检索结果-南通市图书馆

钩端螺旋体M23金属内肽酶活性与致病性研究及流感嗜血杆菌OMP6优势抗原表位筛选与鉴定

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

钩端螺旋体M23金属内肽酶活性与致病性研究及流感嗜血杆菌OMP6优...

作者：张颖颖浙江大学

学位级别：硕士

第一部分钩端螺旋体M23超家族金属内肽酶活性及致病性研究研究背景及意义:钩端螺旋体(以下简称钩体)病是由致病性钩体感染引起的自然疫源性人畜共患传染病,也是我国重点防疫和监控的主要传染病之一。根据致病性可将钩体分为致病性和非... 详细信息

第一部分钩端螺旋体M23超家族金属内肽酶活性及致病性研究研究背景及意义:钩端螺旋体(以下简称钩体)病是由致病性钩体感染引起的自然疫源性人畜共患传染病,也是我国重点防疫和监控的主要传染病之一。根据致病性可将钩体分为致病性和非致病性两大类,问号钩体(Leptospira interrogans)是流行最广的致病性钩体基因种,我国则以问号钩体黄疸出血群赖型为优势流行的血清群型。致病性钩体具有强大的侵袭力,能迅速穿越皮肤和黏膜侵入人体,也能从血流中穿越血管壁扩散多种脏器和组织,但其侵袭力的物质基础及机制迄今未完全明了。金属蛋白酶(metalloprotease,MP)是一群能水解蛋白或多肽的酶类,问号钩体黄疸出血群赖型赖株基因组中具有多个产物注释为MP的基因,但其酶活性和致病作用尚无报道。研究方法:采用生物信息学软件分析问号钩体黄疸出血群赖型赖株LA2582和LA2901基因产物信号肽、跨膜区和功能结构域。构建LA2582和LA2901基因胞外区原核表达系统,采用Ni-NTA亲和层析法提纯目的重组表达产物rLA2582和rLA2901,采用SDS-PAGE及Bio-Rad凝胶图像分析系统检测其表达及提纯效果。提纯的rLA2582和rLA2901皮内注射免疫家兔获得抗血清及其IgG。采用分光光度仪检测 rLA2582 和 rLA2901 水解 Dabsyl-Leu-Gly-Gly-Gly-Ala-Edans 荧光五肽底物的活性及其Km和Kcat值。采用SDS-PAGE检测rLA2582和rLA2901水解细胞外基质(extracellular matrix,ECM)分子I型胶原蛋白(COL1)和纤维连接蛋白(fibronectin,FN)的活性。采用分光光度法检测rLA2582和rLA2901水解刚果红标记弹性蛋白(elastin,ELN)底物的活性。采用实时荧光定量RT-PCR和Western Blot法,检测问号钩体赖株感染HUVEC人脐静脉内皮细胞后LA2582和LA2901基因mRNA和蛋白表达水平及其产物外分泌情况。研究结果:生物信息学分析结果显示,LA2582和LA2901基因产物均有信号肽和跨膜区,其氨基酸序列中含有锌离子依赖M23超家族金属Gly-Gly内肽酶的功能结构域和M23基序HXH。所构建的问号钩体赖株LA2582或LA2901基因原核表达系统能有效地表达目的重组蛋白rLA2582或rLA2901。rLA2582和rLA2901均能水解Dabsyl-Leu-Gly-Gly-Gly-Ala-Edans荧光五肽底物,其Km和Kcat值分别为 126.54 μmol·L-1 和 4.67 s-1、190.25 μmol·L1 和 4.85 s-1。rLA2582 和 rLA2901 能水解ECM分子COLl、FN和ELN。问号钩体赖株感染HUVEC人脐静脉内皮细胞后,其LA2582和LA2901基因mRNA、蛋白表达和外分泌水平均显著增高(p金属内肽酶,与问号钩体侵袭力密切相关。第二部分不可分型流感嗜血杆菌OMP6优势抗原表位筛选与鉴定研究背景及意义:流感嗜血杆菌感染常引起儿童肺炎、中耳炎和脑膜炎、等疾病。根据有无荚膜及其多糖抗原,流感嗜血杆菌可分为能用血清学试验分型的可分型流感嗜血杆菌(typeable Haemophilus influenzae,THi)和不可分型流感嗜血杆菌(nontypeable Haemophilus influenzae,NTHi)。接种多价流感嗜血杆菌荚膜多糖疫苗有效地预防了 THi的感染,但该疫苗对NTHi无效。因此,筛选与鉴定NTHi 外膜蛋白(outer membrane protein,OMP)及其优势 T 和 B 细胞(T-B)联合抗原表位,可为研发NTHi抗原肽疫苗奠定基础。研究方法:采用PCR扩增NTHi临床菌株全长omp6基因,T-A克隆后测序。采用生物信息学软件分析OMP6序列保守性与膜定位并预测其T-B联合抗原表位。采用噬菌体展示联合免疫印迹法和ELISA检测重组噬菌体PⅢ蛋白(rPⅢ)展示的OMP6中T-B联合抗原表位肽免疫原性和免疫反应性。研究结果:35株NTHi临床菌株均能检出omp6基因,其核苷酸和氨基酸序列相似性分别为98.3%～100%和99.3%～100%。OMP6为外膜表面蛋白,具有OMP6-2-25、OMP6-61-86和OMP6-98-126三个高分的预测T-B联合抗原表位。Western Blot和ELISA结果显示,OMP6-2-25能与NTHi抗血清产生较强的杂交条带,96.9%(59/62)、69.4%(43/62)和 74.2

关键词：问号钩端螺旋体 M23超家族金属蛋白酶金属内肽酶生物学活性致病性不可分型流感嗜血杆菌 P6外膜蛋白优势抗原表位免疫原性多抗原肽疫苗

金属内肽酶底物Glutaryl－Ala－Ala－Phe－2NA的合成

同方学位论文库评论

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

氨基酸杂志 1994年第2期16卷 5-6页

作者：朱迎春赵忠刘东东王赋敏海军总医院中心实验科

文本以苯丙萘胺（Ｐｈｅ－２ＮＡ）为原料。

关键词：金属内肽酶 Boc活化酯四肽化合物

金属内肽酶底物Glu-Ala-Ala-Phe-2-NA的合成

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

海军总医院院刊 1994年第3期7卷 195-196页

作者：朱迎春赵忠刘东东王赋敏海军总医院中心实验科

现在广泛应用于结节病诊断的一个主要指标是病人血清的血管紧张素Ⅰ转换酶(ACE)值,但此法仍存在一些问题,如不易发现非活动性病人和不能显示服用激素病人的病情.1984年Almenoff等人发现结节病人血清中有一种膜结合的金属内肽酶(EC_3,4,(... 详细信息

现在广泛应用于结节病诊断的一个主要指标是病人血清的血管紧张素Ⅰ转换酶(ACE)值,但此法仍存在一些问题,如不易发现非活动性病人和不能显示服用激素病人的病情.1984年Almenoff等人发现结节病人血清中有一种膜结合的金属内肽酶(EC_3,4,(24),(11))增高,非活动性结节病人增高两倍(与对照组比),活动性结节病人增高四倍以上(与对照组比),并且观察到此酶不受激素治疗影响.因此。

关键词：金属内肽酶底物合成四肽化合物

泛素化结合酶E2抑制剂对草菇15℃保鲜的影响

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

菌物学报 2022年第12期41卷 2074-2082页

作者：龚明尹昕黄天宇郑婷婷唐利华张赫男汪滢上海市农业科学院食用菌研究所农业农村部南方食用菌资源利用重点实验室国家食用菌工程技术研究中心国家食用菌加工技术研发分中心上海市农业遗传育种重点开放实验室上海201403 长春工业大学化学与生命科学学院吉林长春130012 江苏海洋大学食品科学与工程学院江苏连云港222005 上海海洋大学食品学院上海201306

为了改进草菇低温保鲜方法,在15℃贮藏条件下,采用泛素化结合酶E2(UBEV2)抑制剂对草菇子实体进行处理,并开展相关生理指标和基因表达检测。结果表明,使用100μmol/L的UBEV2抑制剂L345-0044维持了草菇较好的品质,提高了草菇可溶性糖的含... 详细信息

为了改进草菇低温保鲜方法,在15℃贮藏条件下,采用泛素化结合酶E2(UBEV2)抑制剂对草菇子实体进行处理,并开展相关生理指标和基因表达检测。结果表明,使用100μmol/L的UBEV2抑制剂L345-0044维持了草菇较好的品质,提高了草菇可溶性糖的含量。低温明显提升抑制剂处理下的碱性蛋白酶和中性蛋白酶活力,并证实了低温胁迫显著提高了抑制剂处理下的一种类型蛋白酶肽基赖氨酸金属内肽酶的表达。本研究证实了草菇可溶性糖和高活性的冷诱导金属内肽酶对于延长草菇的低温保鲜时间是必须的。

关键词：草菇泛素化结合酶E2 蛋白酶金属内肽酶低温保鲜

同方期刊数据库

突触小泡膜蛋白VAMP-2的原核表达、纯化及活性鉴定

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

军事医学 2013年第4期37卷 250-253页

作者：罗森王琴房华丽王德慧李崭李涛王慧安徽医科大学合肥230032 军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的克隆突触小泡膜蛋白(VAMP-2)基因,原核表达、纯化并鉴定重组蛋白VAMP-2活性。方法根据GenBank中已报道的VAMP-2基因序列,设计特异性引物,通过RT-PCR从小鼠的全脑组织总RNA中获得基因。将去疏水区后的基因克隆至含有N端信号肽pelB序... 详细信息

目的克隆突触小泡膜蛋白(VAMP-2)基因,原核表达、纯化并鉴定重组蛋白VAMP-2活性。方法根据GenBank中已报道的VAMP-2基因序列,设计特异性引物,通过RT-PCR从小鼠的全脑组织总RNA中获得基因。将去疏水区后的基因克隆至含有N端信号肽pelB序列的原核表达载体pET-22b中,重组质粒转化BL21(DE3)Rosetta感受态细胞,IPTG诱导表达,表达产物经Ni-NTA亲和层析纯化,SDS-PAGE及Western印迹进行鉴定,并利用金属内肽酶BoNT/B轻链对该蛋白进行生物活性分析和酶活动力学测定。结果与结论成功构建pET-22b-VAMP-2表达质粒,并转化大肠杆菌BL21(DE3)Rosetta,Western印迹证实重组蛋白VAMP-2(残基Met 1-Met 94)获得可溶性表达。重组蛋白VAMP-2可被金属内肽酶BoNT/B特异性酶解,具有良好的生物学活性。

关键词：囊泡相关膜蛋白质2 金属内肽酶底物原核表达

A型肉毒毒素轻链的原核表达、纯化及活性鉴定

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

生物技术通讯 2015年第5期26卷 632-635页

作者：罗森齐芬芳宫路路刘昊李涛王慧遵义医药高等专科学校贵州遵义563002 军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的:在大肠杆菌中表达、纯化A型肉毒毒素轻链(Bo NT/A LC),研究其生物学活性。方法:根据Gen Bank中报道的Bo NT/A LC基因序列设计特异引物,从肉毒梭菌中扩增Bo NT/A LC基因片段,构建重组大肠杆菌p ET-32a Bo NT/A LC/BL21(DE3)Rosetta,... 详细信息

目的:在大肠杆菌中表达、纯化A型肉毒毒素轻链(Bo NT/A LC),研究其生物学活性。方法:根据Gen Bank中报道的Bo NT/A LC基因序列设计特异引物,从肉毒梭菌中扩增Bo NT/A LC基因片段,构建重组大肠杆菌p ET-32a Bo NT/A LC/BL21(DE3)Rosetta,IPTG诱导目的蛋白高效表达,表达产物经Ni螯合亲和层析纯化,SDS-PAGE鉴定目的蛋白,并利用相应底物对纯化产物进行生物活性分析和酶活动力学测定。结果与结论:构建了重组大肠杆菌p ET-32a Bo NT/A LC/BL21(DE3)Rosetta,原核表达获得高水平可溶性重组Bo NT/A LC,纯化得到纯度较高的蛋白质,重组Bo NT/A LC的酶活略高于A型肉毒毒素全毒素,可作为试剂用于Bo NT/A LC抑制剂高通量体外检测方法研究。

关键词： A型肉毒毒素轻链金属内肽酶原核表达

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

B型肉毒毒素轻链的高效制备及活性鉴定

生物技术通讯 2018年第1期29卷 59-63页

作者：罗森陈芳红李涛王慧遵义医药高等专科学校贵州遵义563002 军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的:在大肠杆菌中高效表达B型肉毒毒素轻链(BoNT/BLC)并纯化,研究其生物学活性。方法:根据报道的BoNT/B LC基因序列设计引物,从肉毒梭菌中扩增BoNT/BLC基因片段,将其克隆至原核表达载体pET-22b中,重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)Rosett... 详细信息

目的:在大肠杆菌中高效表达B型肉毒毒素轻链(BoNT/BLC)并纯化,研究其生物学活性。方法:根据报道的BoNT/B LC基因序列设计引物,从肉毒梭菌中扩增BoNT/BLC基因片段,将其克隆至原核表达载体pET-22b中,重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)Rosetta感受态细胞,构建重组大肠杆菌pET-22b BoNT/BLC/BL21(DE3)Rosetta,在20℃条件下用IPTG诱导目的蛋白表达,表达产物经His Trap FF柱纯化,用SDS-PAGE对目的蛋白进行鉴定,并利用相应底物对纯化产物进行生物活性分析。结果与结论:构建了重组大肠杆菌pET-22b BoNT/BLC/BL21(DE3)Rosetta,BoNT/BLC表达量达到了细菌总蛋白的30%左右,通过一步亲和纯化目的蛋白后经SDS-PAGE检测其纯度在95%以上,制备的重组LC的酶活略高于B型肉毒毒素全毒素,可作为试剂用于BoNT/BLC抑制剂高通量体外检测方法的研究。

关键词：肉毒毒素金属内肽酶原核表达