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重组麻疹病毒载体sars-cov-2疫苗病毒滴度荧光定量PCR检测方法的建立、验证及应用

中国生物制品学杂志 2024年第6期37卷 745-750页

作者：杜天飞容新宗杨盛理张勇侠高雅丽武志强李春阳刘兰军成都生物制品研究所有限责任公司四川省疫苗工程技术研究中心四川成都610023

目的建立检测重组麻疹病毒载体严重急性呼吸综合征冠状病毒2(severe acute respiratory symptom coronavirus 2,sars-cov-2)疫苗病毒滴度的荧光定量PCR(qPCR)法,并进行验证及初步应用。方法以重组质粒pUC57-S351为模板,扩增sars-cov-2 ... 详细信息

目的建立检测重组麻疹病毒载体严重急性呼吸综合征冠状病毒2(severe acute respiratory symptom coronavirus 2,sars-cov-2)疫苗病毒滴度的荧光定量PCR(qPCR)法,并进行验证及初步应用。方法以重组质粒pUC57-S351为模板,扩增sars-cov-2 S基因,优化引物浓度,建立qPCR检测方法。对该方法的专属性、重复性进行验证,确定线性范围及检测限。应用建立的qPCR法对生物反应器连续培养感染后1~12 d的重组病毒S基因拷贝数进行检测。结果选择引物浓度为0.20μmol/L建立qPCR方法。该方法能特异性检测sars-cov-2 S基因拷贝数;模板浓度在2×10^(2)~2×10^(8)copies/μL之间,线性关系良好(R^(2)=0.995),检测下限为2×10^(2)copies/μL;6次重复检测重组病毒S基因拷贝数的变异系数(coefficient of variation,CV)为2.64%。应用建立的qPCR法检测生物反应器连续培养感染后1~12 d的重组病毒S基因拷贝数的结果与细胞病变法检测结果基本一致。结论建立的qPCR法专属性和重复性良好,可用于重组麻疹病毒载体sars-cov-2疫苗病毒滴度检测。

关键词：荧光定量PCR 重组麻疹病毒载体sars-cov-2疫苗 S基因病毒滴度

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