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重组人血清白蛋白的研究进展

生物医学工程学杂志 2009年第4期26卷 900-903页

作者：满初日嘎张英霞张云海南大学农学院海口570228 海南大学海洋学院热带生物资源教育部重点实验室海南省热带水生生物技术重点实验室海口570228 中国科学院昆明动物研究所昆明650223

人血清白蛋白(Human serum albumin,HSA)是现代医学中一种重要的临床生物制品,主要用于维持血浆胶体渗透压及作为血浆容量扩充剂,广泛应用于出血性休克、烧伤、癌症、白细胞增多症、白蛋白过少症等。HSA主要靠收集人的血液分级过滤获得... 详细信息

人血清白蛋白(Human serum albumin,HSA)是现代医学中一种重要的临床生物制品,主要用于维持血浆胶体渗透压及作为血浆容量扩充剂,广泛应用于出血性休克、烧伤、癌症、白细胞增多症、白蛋白过少症等。HSA主要靠收集人的血液分级过滤获得,有可能被病毒、致病蛋白粒子等污染。目前人们利用生物工程技术表达重组人血清白蛋白(Recom binant HSA,rHSA),其结构和功能与血浆来源的血清白蛋白(Plasma derived HSA,pdHSA)相似。预临床和临床试验已证明rHSA可安全地应用于多种疾病治疗。

关键词：重组人血清白蛋白功能临床

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重组人血清白蛋白发酵过程表达期的定量研究

生物工程学报 2003年第1期19卷 81-86页

作者：黄明志郭美锦储炬杭海峰庄英萍张嗣良华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室国家生化工程技术研究中心生物工程学院上海200237

结合元素平衡和代谢平衡 ,建立了重组人血清白蛋白发酵过程表达期的数学模型 ,按单纯形多变量最优化方法估算了模型的未知参数 ,并探讨了导致表达期不同阶段产物形成速率存在差异的可能原因。该模型能较好地描述重组人血清白蛋白发酵过... 详细信息

结合元素平衡和代谢平衡 ,建立了重组人血清白蛋白发酵过程表达期的数学模型 ,按单纯形多变量最优化方法估算了模型的未知参数 ,并探讨了导致表达期不同阶段产物形成速率存在差异的可能原因。该模型能较好地描述重组人血清白蛋白发酵过程表达期中各宏观反应速率之间的关系 ,为重组人血清白蛋白的高效表达提供了线索。

关键词：重组人血清白蛋白发酵过程表达期定量研究代谢平衡元素平衡

重组人血清白蛋白在毕赤酵母表达中的降解控制

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北京化工大学学报（自然科学版） 2004年第4期31卷 9-11,15页

作者：孙战胜陈劲春北京化工大学生命科学与技术学院北京100029

在利用转基因毕赤酵母发酵表达重组人血清白蛋白时 ,遇到了较为严重的蛋白降解 ;为了抑制蛋白的降解 ,分别研究了温度、pH值和氮源的加入对降解的影响。结果表明 ,pH值和氮源的加入对白蛋白的降解控制有显著的正面影响 ,而温度的变化对... 详细信息

在利用转基因毕赤酵母发酵表达重组人血清白蛋白时 ,遇到了较为严重的蛋白降解 ;为了抑制蛋白的降解 ,分别研究了温度、pH值和氮源的加入对降解的影响。结果表明 ,pH值和氮源的加入对白蛋白的降解控制有显著的正面影响 ,而温度的变化对降解的影响不大。当控制pH为 7 0 ,添加酵母提取物和蛋白胨体积分数分别为0 5 %和 1 %时 ,白蛋白的降解得到了有效的控制 ,可得到质量分数为 5

关键词：毕赤酵母重组人血清白蛋白蛋白降解温度氮源

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重组人血清白蛋白在紫花苜蓿中的转基因表达

热带作物学报 2018年第4期39卷 720-725页

作者：陈林涛韦双双黄永林吴昊郭子怡陈银华王大勇海南大学热带农林学院生物学院生物技术与分子药理学研究室海南海口570228 海南大学热带农林学院生物学院生物技术系海南海口570228 海南省热带生物资源可持续利用重点实验室海南海口570228

为获得高产重组人血清白蛋白的转基因紫花苜蓿"游客"(Medicago sativa L. cv.‘Eureka’)株系用于规模化生产rHSA,构建了rHSA植物表达载体。以紫花苜蓿子叶愈伤组织为受体,通过农杆菌介导法进行遗传转化,筛选出潮霉素抗性植株,提取抗性... 详细信息

为获得高产重组人血清白蛋白的转基因紫花苜蓿"游客"(Medicago sativa L. cv.‘Eureka’)株系用于规模化生产rHSA,构建了rHSA植物表达载体。以紫花苜蓿子叶愈伤组织为受体,通过农杆菌介导法进行遗传转化,筛选出潮霉素抗性植株,提取抗性再生紫花苜蓿植株基因组DNA做PCR鉴定,结果表明重组人血清白蛋白基因片段已整合到紫花苜蓿基因组中;提取转基因植株总蛋白,Western blotting检测结果表明rHSA在转基因植株中成功表达。此结果表明转基因紫花苜蓿可稳定表达rHSA。

关键词：重组人血清白蛋白紫花苜蓿农杆菌转基因

重组人血清白蛋白-干扰素α2a融合蛋白质控方法与质量标准的建立

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药物分析杂志 2011年第9期31卷 1750-1753页

作者：裴德宁李响韩春梅饶春明中国药品生物制品检定所重组技术产品室卫生部生物技术产品检定及标准化重点实验室北京100050

目的:建立重组人血清白蛋白-干扰素α2a融合蛋白(rHSA-IFNα2a)的质控方法和质量标准。方法:分别使用抗HSA抗体和抗IFNα2a抗体、采用免疫印迹法对成品进行鉴别试验,采用WISH细胞病变抑制法测定成品和原液的生物学活性,原液以胰蛋白酶... 详细信息

目的:建立重组人血清白蛋白-干扰素α2a融合蛋白(rHSA-IFNα2a)的质控方法和质量标准。方法:分别使用抗HSA抗体和抗IFNα2a抗体、采用免疫印迹法对成品进行鉴别试验,采用WISH细胞病变抑制法测定成品和原液的生物学活性,原液以胰蛋白酶酶切后,用HPLC分析肽图,其余项目按2010年版中国药典(三部)的规定进行检测。结果:样品与抗HSA抗体和抗IFNα2a抗体均呈阳性反应,比活性>1.5×105 IU.mg-1,其肽图与参考品的一致,其余项目均符合2010年版中国药典(三部)的规定,根据检测结果建立了rHSA-IFNα2a的质量标准。结论:建立的质控方法和质量标准可以保证rHSA-IFNα2a的安全、有效和质量可控,可以用于rHSA-IFNα2a的常规检定。

关键词：重组人血清白蛋白干扰素α2a 融合蛋白质控方法质量标准

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重组人血清白蛋白生产工艺研究进展

微生物学通报 2003年第5期30卷 128-132页

作者：刘永东王云山苏志国中科院过程工程研究所生化工程国家重点实验室北京100080

人血清白蛋白是一种重要的临床药物 ,人源血浆白蛋白可能会传染病原体将逐步被重组白蛋白所代替。对用巴斯德毕赤酵母生产重组人血清白蛋白的表达系统、发酵方法。

关键词：巴斯德毕赤酵母重组人血清白蛋白发酵分离纯化

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离子交换层析分离纯化重组人血清白蛋白

华东理工大学学报（自然科学版） 2002年第4期28卷 341-345,350页

作者：朱家文武斌陈葵罗凌丽周武李水龙华东理工大学化学工程研究所上海200237 湖南岳阳中湘康神药业集团有限公司湖南414000

通过层析实验 ,比较了几种阴离子交换剂在不同温度、p H值、离子强度、进样流速、进样浓度下对人血清白蛋白的吸附与脱附性能 ,研究了它们对人血清白蛋白和卵清蛋白的分离能力 ,并考察了柱层析过程中吸附载体对重组人血清白蛋白和杂蛋... 详细信息

通过层析实验 ,比较了几种阴离子交换剂在不同温度、p H值、离子强度、进样流速、进样浓度下对人血清白蛋白的吸附与脱附性能 ,研究了它们对人血清白蛋白和卵清蛋白的分离能力 ,并考察了柱层析过程中吸附载体对重组人血清白蛋白和杂蛋白的分离选择性。实验结果表明 :牌号为DEAE Sepharose FF的载体不仅对重组人血清白蛋白具有良好的分离度。

关键词：分离纯化重组人血清白蛋白离子交换层析阴离子交换剂穿透曲线分离度基因工程分离能力

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毕赤酵母表达硒代重组人血清白蛋白

北京化工大学学报（自然科学版） 2006年第5期33卷 23-25,29页

作者：陈思任锐陈劲春北京化工大学生命科学与技术学院北京100029

将能够成功表达重组人血清白蛋白(rHSA)的巴斯德毕赤酵母培养至诱导期后,流加亚硒酸钠,同时设空白对照发酵液(不加入亚硒酸钠),通过对比相同菌株在两组培养基中表达的rHSA的含硒量,判断硒能否以硒代氨基酸的形式存在于重组蛋白质中。发... 详细信息

将能够成功表达重组人血清白蛋白(rHSA)的巴斯德毕赤酵母培养至诱导期后,流加亚硒酸钠,同时设空白对照发酵液(不加入亚硒酸钠),通过对比相同菌株在两组培养基中表达的rHSA的含硒量,判断硒能否以硒代氨基酸的形式存在于重组蛋白质中。发酵液经热处理、超滤、离子交换和丙酮沉淀等步骤后,进行Tricine-SDS-PAGE凝胶电泳、X射线能量色散谱(EDX)和原子吸收分析。结果表明,加硒发酵液样品中硒元素的质量分数比对照多23.2%,硒与蛋白质的质量比为0.0069,高于对照发酵液近35倍,初步证明无机硒可以被毕赤酵母同化,转化为硒代氨基酸,并形成硒代重组蛋白质。

关键词：亚硒酸钠重组人血清白蛋白毕赤酵母

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重组人血清白蛋白在巴斯德毕赤酵母中的表达

重组人血清白蛋白在巴斯德毕赤酵母中的表达

作者：孙战胜北京化工大学

学位级别：硕士

人血清白蛋白是一种在医学上应用广泛，需求量大的蛋白质药物。而目前血浆提取生产的方式难以满足市场的要求，用基因工程方法生产人血清白蛋白无疑具有巨大的商业价值。由于巴斯德毕赤酵母表达系统自身的许多优点，使得其在表达外源蛋... 详细信息

人血清白蛋白是一种在医学上应用广泛，需求量大的蛋白质药物。而目前血浆提取生产的方式难以满足市场的要求，用基因工程方法生产人血清白蛋白无疑具有巨大的商业价值。由于巴斯德毕赤酵母表达系统自身的许多优点，使得其在表达外源蛋白中具有十分大的优势。本文的工作是用巴斯德毕赤酵母（Pichia Pastoris）构建并筛选分泌重组人血清白蛋白(rHSA)基因工程高产菌株，并对其发酵纯化条件进行初步研究。在构建高产人血清白蛋白的基因工程菌时，采用了分泌型表达质粒pPIC9K构建成质粒pPIC9K-hsa。构建的质粒经线性化后电转化整合进入毕赤酵母GS115染色体AOX1基因中，通过MD/MM平板筛选出his+Muts型菌株。在此基础上，用G418平板筛选出高拷贝表达子。BMGY/BMMY摇瓶培养对不同的拷贝子进行筛选，发现随着拷贝子的增加表达量增加。其中菌株GS115-rHSA-8表达量最高。免疫印迹检测所表达的rHSA具有免疫原性。采用工业基础盐培养基，用摇瓶对发酵条件进行了实验研究。结果表明，组氨酸的加入量为0.15g/L时，蛋白表达量增加57.1%;加入0.10%体积比油酸时，蛋白量可增加43.4%;甲醇浓度控制在0.5％体积比左右时可以获得高产量，甲醇的加量超过1%体积比时，会

关键词：重组人血清白蛋白巴斯德毕赤酵母发酵分离纯化