检索结果-南通市图书馆

猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF5/6和ORF6/7重叠区的分离(人工)改造病毒的构建及鉴定

同方期刊数据库博看期刊评论

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中国预防兽医学报 2008年第2期30卷 81-85页

作者：余丹丹孙志王金勇袁世山中国农业科学院上海兽医研究所中国动物卫生与流行病学中心上海分中心/动物传染病研究室/农业部动物寄生虫病重点实验室上海200232

为了研究重叠序列在病毒繁殖周期中所起的作用以及更好地操作感染性克隆,将猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)感染性克隆ORF间(ORF5/6和ORF6/7)重叠区域分离并插入酶切位点,成功构建两个突变的全长质粒,随后进行了病毒拯救和复制分析。结... 详细信息

为了研究重叠序列在病毒繁殖周期中所起的作用以及更好地操作感染性克隆,将猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)感染性克隆ORF间(ORF5/6和ORF6/7)重叠区域分离并插入酶切位点,成功构建两个突变的全长质粒,随后进行了病毒拯救和复制分析。结果表明:(1)两个全长质粒均能够进行病毒拯救,并产生明显细胞病变;(2)突变病毒具遗传稳定性;(3)病毒空斑形态及生长曲线与亲本毒株近似。表明PRRSVORF间重叠碱基的安排方式对病毒的感染性是非必需的,获得的两株突变病毒为进一步研制PRRSV基因标识疫苗、研究PRRSV各编码蛋白功能奠定了基础。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒重叠序列病毒感染性反向遗传操作

猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）蛋白编码基因区的反向遗传操作

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）蛋白编码基因区的反向遗传操作

作者：丛雁方中国农业科学院

学位级别：硕士

PRRS在世界范围内迅速蔓延而成为养猪业的重要威胁。2006年以来,“猪高热综合征”肆虐我国养猪业,高致病性猪蓝耳病是其主要致病病原之一。现有疫苗在免疫原性以及交叉保护性方面的作用均值得商榷,此外对于蓝耳病病毒的毒力因子的探寻... 详细信息

PRRS在世界范围内迅速蔓延而成为养猪业的重要威胁。2006年以来,“猪高热综合征”肆虐我国养猪业,高致病性猪蓝耳病是其主要致病病原之一。现有疫苗在免疫原性以及交叉保护性方面的作用均值得商榷,此外对于蓝耳病病毒的毒力因子的探寻仍无定论。PRRSV的基因表达是通过一系列亚基因组(sgmRNA)完成的,sgmRNA的转录采用一种特有的不连续性转录(discontinuous transcription)方式形成。本研究通过对结构蛋白编码基因区间进行插入外源序列的一系列突变,初步鉴定了调控病毒转录及翻译的顺式调控因子(cis-acting element)并对其作用机制进行了探讨,现将研究内容分述如下:1、高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒结构蛋白编码基因区的反向遗传操作HP PRRSV基因组部分结构蛋白编码阅读框之间存在重叠序列现象,为单个基因功能的深入研究带来诸多不便。在本实验室已有的感染性克隆pJXM143的基础上,分别经过在ORF1/2之间插入NdeⅠ、在ORF4/5之间插入NdeⅠ和PacⅠ酶切位点、把ORF5/6或ORF6/7重叠区域拉开并插入酶切位点的反向遗传操作,结果只有在ORF1/2之间插入NdeⅠ的突变体pJXM-12经转染传代后产生病毒且突变病毒具有遗传稳定性,病毒生长特性及其亚基因组与亲本毒株近似。其余突变体均未拯救出病毒,并且无转录及复制过程。这可能涉及高致病性蓝耳病病毒的结构紧凑性,插入序列的位置,插入的序列的二级结构,从而影响病毒的转录和复制、翻译,甚至包装的过程。为进一步研究病毒亚基因组mRNA的非连续性转录机制和翻译机制奠定了基础。2、猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF6/7及3′UTR的基因区的反向遗传操作高致病性蓝耳病近年来在我国广泛流行,目前尚无高效疫苗用于该病的防制。本研究以PRRSV弱毒感染性克隆pAPRRS为骨架,构建了将高致病性蓝耳病江西分离株(JX143)ORF7基因和3′UTR区域替换入pAPPRS相应区域,并且分别在ORF6与ORF7之间或(和)ORF7与3′UTR之间插入32nt的四个嵌合突变体pBJ327、pBJ732、pBJD32、pBJD32R,经DNA转染Marc-145细胞后拯救出病毒,且拯救病毒的病毒生物学特性与亲本病毒相似。本研究通过人为构建正向重复序列,为高致病性疫苗研制提供新的思路。3、猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒mRNA5转录启动子的鉴定PRRSV通过不连续转录,翻译出一系列的蛋白,ORF5翻译的GP5蛋白是prrsv主要保护性抗原,含有中和表位,本研究通过突变PCR技术,获得一系列ORF4、ORF5间在不同位置引入不同碱基数及特定序列的突变体,对ORF5的转录翻译调控进行研究。结果:在ORF4/5的10nt间隔序列之前可以插入13nt;在其间隔序列之后只能允许3nt的插入;间隔序列之间能允许18nt的插入,但与序列特异性有关。由此,暗示ORF4/5允许插入的外源序列,不仅与插入位置有关,而且与序列的特异性相关。本研究结果为进一步解析猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒转录调控机制和翻译机制奠定了坚实基础。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒感染性克隆 ORF 重叠序列正向重复序列外源序列插入转录翻译机制

同方学位论文库评论

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

论清真词时间结构的三种形态

鲁东大学学报（哲学社会科学版） 2020年第6期37卷 31-37,49页

作者：刘天禾复旦大学中国古代文学研究中心上海200433

清真词的时间结构主要可分为以景为纲、以物为纲和以情为纲三种形态,在词境架构中各具特点。以景为纲即通过摹景来贯通非连续的时间显现,以当下或往昔为原点对词境进行梳理,可发掘出“今—昔—今”等五种时间序列;以物为纲即通过状物来... 详细信息

清真词的时间结构主要可分为以景为纲、以物为纲和以情为纲三种形态,在词境架构中各具特点。以景为纲即通过摹景来贯通非连续的时间显现,以当下或往昔为原点对词境进行梳理,可发掘出“今—昔—今”等五种时间序列;以物为纲即通过状物来融汇交叠不同时间片段,词境中的物通常蕴含了时间流逝与人物缺位这两方面意义指向;以情为纲即任现实或悬想的情感牵引不同时刻的片段剪影,并经由这些时间段的叠加框架构筑完整饱满的艺术境界。

关键词：清真词时间结构重叠序列缺位悬想

猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF5a/ORF5重叠区的分离

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中国动物传染病学报 2012年第2期20卷 29-35页

作者：刘闰夏蔺涛田德斌韦祖樟孙利厂陆嘉琦袁世山童光志中国农业科学院上海兽医研究所上海200241 南京农业大学动物医学院南京210095

以两个不同基因型的猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)感染性克隆为平台进行反向遗传操作,利用SOE-PCR将I型PRRSV的ORF2～5a替换进II型PRRSV的相应区域,旨在将I型PRRSV的5a从ORF5中独立出来进而研究5a蛋白的功能,同时探讨两型PRRSV的结构蛋白结构与功能关系。研究结果表明,I型PRRSV的ORF2～5a序列能稳定存在于嵌合病毒基因组内,表达的相应蛋白能在II型PRRSV中发挥同样功能。本研究首次将PRRSV的ORF5a序列从ORF5中独立出来,为进一步研究5a蛋白的结构与功能提供了理论依据和基础材料。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒嵌合重叠序列 5a蛋白

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

重组PCR技术的应用及优化

激光生物学报 2008年第3期17卷 355-362页

作者：赵旵军朱咸艳刘祥阚显照朱国萍安徽师范大学生命科学学院生物大分子进化重点实验室安徽芜湖241000

重组PCR是通过DNA重叠序列的衔接作用,使多个DNA分子融合在一起的体外扩增技术。它使基因全序列的拼接、基因融合、基因破坏及启动子交换等DNA操作变得简单易行。如今重组PCR已成为DNA分析的有效利器。本研究通过重组PCR在分子进化、基... 详细信息

重组PCR是通过DNA重叠序列的衔接作用,使多个DNA分子融合在一起的体外扩增技术。它使基因全序列的拼接、基因融合、基因破坏及启动子交换等DNA操作变得简单易行。如今重组PCR已成为DNA分析的有效利器。本研究通过重组PCR在分子进化、基因敲除及基因敲入、启动子研究和转基因植物转化载体的构建等方面的实际应用,分析了该技术的影响因素,并针对引物设计、DNA碱基重叠长度、温度参数等重要反应条件提出了优化方案。

关键词：重组PCR 重叠序列基因敲除基因敲入优化