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醛缩酶A基因促进肝癌细胞增殖

国际药学研究杂志 2016年第6期43卷 1088-1092页

作者：曾诚刘文娟李小强张晓文谢艳华曹蔚第四军医大学药学院天然药物学教研室西安710032 第四军医大学药学院药理学教研室西安710032 陕西省商洛学院生物医药与食品工程学院商洛726000

目的初步探索醛缩酶A基因敲除与过表达对肿瘤细胞生长的影响,确定无氧代谢过程中醛缩酶与肿瘤生长代谢之间的关系。方法通过表达载体质粒构建与慢病毒感染构建稳定表达的醛缩酶A过表达与基因敲除细胞,在基因和蛋白水平验证重组细胞,观... 详细信息

目的初步探索醛缩酶A基因敲除与过表达对肿瘤细胞生长的影响,确定无氧代谢过程中醛缩酶与肿瘤生长代谢之间的关系。方法通过表达载体质粒构建与慢病毒感染构建稳定表达的醛缩酶A过表达与基因敲除细胞,在基因和蛋白水平验证重组细胞,观察细胞增殖速度改变。结果实时定量PCR结果显示,过表达细胞系中目的基因的表达约为正常细胞的2倍;根据醛缩酶A RNA序列设计5个干扰靶点,其中醛缩酶A4对于目的基因的干扰效果最为显著,重组后的细胞醛缩酶A mRNA表达水平为正常细胞的1/50。与正常对照组相比,醛缩酶A过表达细胞在48 h增殖率增加40%,增殖率与对照组相比有显著性差异(P醛缩酶A RNA干扰表达细胞在24 h增殖率降低86%,与对照组相比有显著性差异(P醛缩酶A的表达差异对肝癌肿瘤细胞生长有明显影响。

关键词：醛缩酶基因敲除过表达肝癌细胞

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醛缩酶同功酶A及其对原发性肝癌的临床意义

癌症 1989年第1期8卷 74-76页

作者：范跃祖伍福乐南京铁道医学院上海铁道医学院医学系

目前,甲胎蛋白(AFP)仍是诊断原发性肝癌(PHC)的最特异的肿瘤标志,但尚有10～30％的PHC病人其血清AFP为阴性,35～40％的PHC病人血清AFP值<400ng/ml。这些AFP低浓度阳性或阴性PHC以及某些良性肝病患者出现的AFP假阳性,给临床诊断带来一定... 详细信息

目前,甲胎蛋白(AFP)仍是诊断原发性肝癌(PHC)的最特异的肿瘤标志,但尚有10～30％的PHC病人其血清AFP为阴性,35～40％的PHC病人血清AFP值醛缩酶同功酶A(ALD—A)对PHC的临床意义,作一综述。

关键词：醛缩酶同功酶肝癌细胞

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醛缩酶在炎性肌病诊治中的价值

中华内科杂志 2015年第2期54卷 161-163页

作者：何林蓉吴婵媛王迁曾小峰中国医学科学院北京协和医学院 100032 北京协和医院风湿免疫科

炎性肌病是一组以肌肉受累为主要表现的自身免疫病,临床上以多发性肌炎（PM）和皮肌炎（DM）最常见.在疾病的活动期常有多种血清肌酶升高,如磷酸肌酸激酶（CK）、醛缩酶（aldolase）、AST、ALT及乳酸脱氢酶（LDH）.其中CK在临床最常用,... 详细信息

炎性肌病是一组以肌肉受累为主要表现的自身免疫病,临床上以多发性肌炎（PM）和皮肌炎（DM）最常见.在疾病的活动期常有多种血清肌酶升高,如磷酸肌酸激酶（CK）、醛缩酶（aldolase）、AST、ALT及乳酸脱氢酶（LDH）.其中CK在临床最常用,是反映肌肉损伤敏感而特异的指标,与PM/DM病情严重程度和治疗反应相关.但研究发现,部分PM/DM患者疾病活动期血清CK正常[1],正常的原因及其临床意义目前尚无定论,在这一亚类患者中检测其他特异性稍差的肌酶,如醛缩酶是否具有临床价值值得探讨.

关键词：炎性肌病临床价值醛缩酶诊治血清肌酶磷酸肌酸激酶病情严重程度临床意义

恶性疟原虫FCC1/HN株醛缩酶编码区基因的克隆及表达

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2004年第3期22卷 133-135页

作者：张瑞娟朱淮民曹毅周爱国郑志强张青锋郑徽第二军医大学病原生物学教研室

目的　克隆恶性疟原虫海南株 (FCC1/HN)株糖酵解醛缩酶 (ALD)编码区基因。　方法　利用已知ALD基因序列设计一对特异性引物 ,从基因组DNA中用PCR扩增ALD基因 ,将其克隆入pQE 3 0载体 ,阳性克隆经酶切鉴定后测序 ,在此基础上将重组质粒... 详细信息

目的　克隆恶性疟原虫海南株 (FCC1/HN)株糖酵解醛缩酶 (ALD)编码区基因。　方法　利用已知ALD基因序列设计一对特异性引物 ,从基因组DNA中用PCR扩增ALD基因 ,将其克隆入pQE 3 0载体 ,阳性克隆经酶切鉴定后测序 ,在此基础上将重组质粒转化大肠埃希菌M15进行表达。　结果　PCR扩增后获得特异性扩增片段 ,测序结果显示我国的恶性疟原虫FCC1/HN株与恶性疟原虫 3D7株ALD基因序列完全相同。重组融合蛋白通过镍次氮基三乙酸 (Ni NTA)亲和层析及阳离子交换层析进行纯化。　结论　我国的恶性疟原虫FCC1/HN株与文献报道的恶性疟原虫 3D7株ALD编码区基因序列相同。

关键词：恶性疟原虫 FCCl HN 醛缩酶编码区基因表达克隆 PCR引物

GST沉降技术验证弓形虫醛缩酶与肌动蛋白的相互作用

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2011年第5期29卷 363-367页

作者：郑斌尹志奎何蔼李卓雅詹希美新乡医学院寄生虫学教研室新乡453000 中山大学中山医学院寄生虫学教研室广州510080 新乡医学院药学院新乡453000

目的通过GST沉降技术(GST pull-down)验证刚地弓形虫醛缩酶(aldolase)与肌动蛋白(actin)的相互作用。方法 PCR扩增弓形虫cDNA中aldolase和actin基因,分别亚克隆至原核表达质粒pGEX-4T-1和pET30a,转化至大肠埃希菌BL21(DE3),1 mmol/L异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,亲和层析法纯化表达产物。采用腹部皮内多点注射免疫SD大鼠15只,首次免疫Actin-His6蛋白量为200μg/只,第2次起免疫蛋白量为100μg/只,共免疫4次,每次间隔7 d,末次免疫后5 d收集心脏血,制备Actin-His6抗血清。以纯化的GST-Aldolase蛋白作为探针蛋白与Actin-His6蛋白液进行GST沉降实验,实验产物进行十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白质印迹(Western blotting)分析。结果获得了弓形虫aldolase和actin基因序列,构建了相应的原核表达载体。表达并纯化了GST-Aldolase和Actin-His6蛋白。Actin-His6蛋白免疫SD大鼠后获得其抗血清,经抗体亲和纯化柱纯化,获得Actin-His6多克隆抗体。SDS-PAGE和Western blotting结果显示,GST沉降实验产物中的蛋白条带可被Aldolase-His6多克隆抗体和Actin-His6多克隆抗体识别。结论弓形虫醛缩酶与肌动蛋白存在相互作用。

关键词：刚地弓形虫醛缩酶肌动蛋白 GST沉降技术蛋白相互作用

血清醛缩酶同功酶 A 测定对肝癌及消化系其它恶性肿瘤的诊断研究

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中国肿瘤临床 1989年第4期16卷 195-197页

作者：陈士葆沈健伟张国治耿培兰叶伟民沈新义第二军医大学附属长征医院内科第二军医大学附属长征医院实验科

本文应用放射免疫沉淀法对94例经病理证实的消化系统恶性肿瘤(包括食管癌30例、胃癌47例、结肠直肠癌5例、原发性肝癌7例、胰腺癌2例、胆囊癌3例)作Ald-A测定。另有31例健康者作对照组,正常人血清Ald-A在0～18U/dl之间,均值为9.26±5.0U... 详细信息

本文应用放射免疫沉淀法对94例经病理证实的消化系统恶性肿瘤(包括食管癌30例、胃癌47例、结肠直肠癌5例、原发性肝癌7例、胰腺癌2例、胆囊癌3例)作Ald-A测定。另有31例健康者作对照组,正常人血清Ald-A在0～18U/dl之间,均值为9.26±5.0U/dl(X±SD)。食管癌、胃癌、结肠直肠癌、胰腺癌和胆囊癌的Ald-A均值分别为10.23±9.1U/dl、9.94±9.2U/dl、12±8.21U/dl、9.5U/dl和4.83±2.84U/dl。与正常对照组比较无明显差异(P>0.05)。但原发性肝癌患者的血清Ald-A值明显增高,均值为30.03±23.54U/dl(P<0.001)。本文研究结果提示,用放免法测定Ald-A有助于肝癌病人的诊断。

关键词：肝癌消化系肿瘤醛缩酶

N-乙酰-D-神经氨酸醛缩酶的克隆、表达和活性测定

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中国抗生素杂志 2004年第7期29卷 391-393,432页

作者：尚广东李卓荣王以光中国医学科学院中国协和医科大学医药生物技术研究所北京100050

N-乙酰 - D-神经氨酸是一类特殊的氨基糖的重要代表 ,有重要的医药应用价值。本文从大肠埃希氏菌中克隆 N-乙酰 - D-神经氨酸醛缩酶基因 ,并得到高效表达的醛缩酶。经纯化后催化活性实验结果表明 ,醛缩酶可将 N-乙酰 - D-甘露糖胺高效... 详细信息

N-乙酰 - D-神经氨酸是一类特殊的氨基糖的重要代表 ,有重要的医药应用价值。本文从大肠埃希氏菌中克隆 N-乙酰 - D-神经氨酸醛缩酶基因 ,并得到高效表达的醛缩酶。经纯化后催化活性实验结果表明 ,醛缩酶可将 N-乙酰 - D-甘露糖胺高效率地转化为 N-乙酰 - D-神经氨酸 ,表现出较高的催化活性。本工作为 N-乙酰 - D-神经氨酸酶的大规模催化合成奠定了基础。

关键词： N-乙酰-D-神经氨酸醛缩酶基因克隆活性测定

定点突变技术鉴定弓形虫微线体蛋白6与醛缩酶的作用位点

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2014年第3期32卷 221-224页

作者：郑斌尹志奎詹希美河南省新乡医学院寄生虫学教研室新乡453003 河南省新乡医学院药理学教研室新乡4530032 中山大学中山医学院寄生虫学教研室广州510089

目的利用定点突变技术鉴定弓形虫微线体蛋白6(MIC6)与醛缩酶的作用位点。方法根据GenBank中的弓形虫RH株MIC6基因序列(登录号为AF110270)及C端序列设计特异性引物,将MIC6蛋白羧基端(MIC6C)348位色氨酸(W348)的密码子碱基突变为缬氨酸(V... 详细信息

目的利用定点突变技术鉴定弓形虫微线体蛋白6(MIC6)与醛缩酶的作用位点。方法根据GenBank中的弓形虫RH株MIC6基因序列(登录号为AF110270)及C端序列设计特异性引物,将MIC6蛋白羧基端(MIC6C)348位色氨酸(W348)的密码子碱基突变为缬氨酸(V)的碱基,PCR扩增MIC6C W/V突变体基因片段,克隆至原核表达质粒pGEX-4T-1,转化至大肠埃希菌BL21(DE3);0.8 mmol/L异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达GST-MIC6C W/V突变体蛋白,亲和层析法纯化表达产物。以GST-MIC6C W/V突变体蛋白为探针蛋白,GST-MIC6C蛋白为对照蛋白,分别与弓形虫速殖子裂解液进行GST沉降实验,采用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDSPAGE)和蛋白质印迹(Western blotting)分析实验产物。分别以GST-MIC6C W/V突变体蛋白和GST-MIC6C蛋白为探针蛋白和对照蛋白,与弓形虫醛缩酶蛋白液进行GST沉降实验,SDS-PAGE分析实验产物。结果获得了MIC6C W/V突变体基因片段,构建了相应的原核表达载体,表达并纯化了GST-MIC6C W/V突变体蛋白。GST-MIC6C W/V突变体蛋白与弓形虫速殖子裂解液的GST沉降产物中未见蛋白条带,而GST-MIC6C蛋白的沉降产物中可见一蛋白条带,且能被抗醛缩酶抗体特异识别;GST-MIC6C W/V突变体蛋白与弓形虫醛缩酶蛋白液的GST沉降产物中未见蛋白条带,而GST-MIC6C蛋白的沉降产物中可见一蛋白条带。结论色氨酸(W348)为MIC6与醛缩酶的作用位点。

关键词：刚地弓形虫微线体蛋白6 醛缩酶定点突变技术蛋白作用位点

重组恶性疟原虫醛缩酶鉴定及其单克隆抗体的制备

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2006年第3期24卷 196-199页

作者：张瑞娟朱淮民郑徽宁北芳第二军医大学病原生物学教研室

目的鉴定重组表达的恶性疟原虫醛缩酶(ALD),制备针对此酶的单克隆抗体。方法用PCR法扩增恶性疟原虫海南株ALD基因,经大肠埃希菌表达并纯化的ALD免疫BALB/c小鼠,腹腔注射免疫3次,每次间隔2周,加强免疫后3d取免疫小鼠脾细胞制备单克隆抗... 详细信息

目的鉴定重组表达的恶性疟原虫醛缩酶(ALD),制备针对此酶的单克隆抗体。方法用PCR法扩增恶性疟原虫海南株ALD基因,经大肠埃希菌表达并纯化的ALD免疫BALB/c小鼠,腹腔注射免疫3次,每次间隔2周,加强免疫后3d取免疫小鼠脾细胞制备单克隆抗体。同时用获得的免疫血清进行间接荧光抗体试验(IFAT)和蛋白质印迹(Westerntblotting)分析。结果ELISA检测表明,小鼠能产生较高的针对ALD免疫应答,3次免疫后血清中特异性抗体滴度达1∶105,IFAT显示免疫血清能特异性识别疟原虫体内的抗原;Westernblotting分析显示免疫血清识别的疟原虫蛋白相对分子质量(Mr)约41000;所制备的免疫血清与人红细胞内醛缩酶无交叉反应。经ELISA检测3次,筛选获得7株分泌针对ALD的单克隆抗体的杂交瘤细胞株,其中3株分泌的单克隆抗体能识别培养的恶性疟原虫;抗体亚型鉴定结果显示均为IgG1型。结论本实验构建并表达了重组疟原虫糖酵解醛缩酶,并获得特异性的单克隆抗体。

关键词：恶性疟原虫醛缩酶基因表达单克隆抗体