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醛固酮通过调节ACE2—Ang(1-7)—Mas受体轴诱导内皮细胞凋亡的研究

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上海交通大学学报（医学版） 2013年第1期33卷 6-11页

作者：张霞潘瑜金惠敏上海交通大学医学院附属第三人民医院肾脏内科上海201900

目的探讨醛固酮对内皮细胞ACE2-Ang(1-7)-Mas受体轴的影响及其与凋亡的关系。方法将体外培养的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)分为对照组(DMEM/F12培养基)、醛固酮组(10、100、1 000 nmol/L醛固酮干预)和醛固酮拮抗组(100 nmol/L醛固酮+1μmo... 详细信息

目的探讨醛固酮对内皮细胞ACE2-Ang(1-7)-Mas受体轴的影响及其与凋亡的关系。方法将体外培养的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)分为对照组(DMEM/F12培养基)、醛固酮组(10、100、1 000 nmol/L醛固酮干预)和醛固酮拮抗组(100 nmol/L醛固酮+1μmol/L醛固酮受体拮抗剂共同干预)。采用免疫荧光细胞化学染色法观察细胞ACE2蛋白的表达;Western blotting检测细胞中ACE2和Mas受体的表达;酶联免疫吸附实验(ELISA)检测细胞培养上清中AngⅡ和Ang(1-7)蛋白的含量以及凋亡相关蛋白caspase-3的活性;流式细胞术结合FITC-Annexin V/PI荧光染色检测细胞凋亡。结果与对照组比较,醛固酮组细胞ACE2和Mas受体的表达明显下调(P醛固酮组,随着干预时间的延长,细胞ACE2和Mas受体的表达明显下调(P醛固酮拮抗组细胞ACE2和Mas受体的表达显著高于100 nmol/L醛固酮组(P醛固酮组细胞培养上清中AngⅡ浓度和caspase-3活性均显著升高,而Ang(1-7)浓度降低。流式细胞术检测结果显示:醛固酮组细胞凋亡率显著高于对照组,醛固酮拮抗组细胞凋亡率显著低于醛固酮组(P醛固酮具有调节ACE2-Ang(1-7)-Mas受体轴的作用,并可能通过此轴诱导内皮细胞凋亡。

关键词：醛固酮人脐静脉内皮细胞 ACE2-Ang(1-7)-Mas受体轴

醛固酮抑制肾小球系膜细胞的自噬激活加速其在氧化应激状态下的凋亡

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第二军医大学学报 2015年第8期36卷 839-844页

作者：石红光刘海燕张颖慧张波董立巍梅长林赵学智解放军401医院肾内科青岛266071 第二军医大学长征医院肾内科解放军肾脏病研究所上海200003 第二军医大学东方肝胆外科医院信号转导研究室上海200438

目的探讨醛固酮对肾小球系膜细胞自噬激活的影响。方法通过3种经典的自噬活性检测方法检测醛固酮对体外培养的系膜细胞自噬的影响:(1)蛋白质印迹法检测不同浓度的醛固酮干预肾小球系膜细胞系(HMCL)后自噬相关的蛋白标记物LC3、SQSTM1/P6... 详细信息

目的探讨醛固酮对肾小球系膜细胞自噬激活的影响。方法通过3种经典的自噬活性检测方法检测醛固酮对体外培养的系膜细胞自噬的影响:(1)蛋白质印迹法检测不同浓度的醛固酮干预肾小球系膜细胞系(HMCL)后自噬相关的蛋白标记物LC3、SQSTM1/P62的表达水平变化;(2)向系膜细胞系转入GFP-LC3的真核表达质粒,用激光共聚焦显微镜观察醛固酮干预下系膜细胞荧光自噬点数量的变化并进行统计学分析;(3)通过电子显微镜观察醛固酮干预下系膜细胞自噬泡数量的变化并进行统计学分析。通过光镜下形态学观察及蛋白质印迹法检测凋亡相关蛋白聚腺苷二磷酸-核糖聚合酶(PARP)剪切体的表达情况,分析醛固酮干预下系膜细胞在过氧化氢刺激后凋亡水平的变化。结果 3种方法均证实高生理剂量醛固酮可以抑制系膜细胞自噬激活:(1)10-7 mol/L醛固酮干预12h后自噬标记蛋白LC3Ⅰ向LC3Ⅱ转化减少约40%;(2)10-7 mol/L醛固酮干预12h能够降低饥饿及雷帕霉素诱导的系膜细胞自噬点数量,降低的比率分别为60%和47%;(3)醛固酮干预后可减少饥饿和雷帕霉素诱导的系膜细胞自噬泡的增加。10-7 mol/L醛固酮干预系膜细胞12h后接受过氧化氢2.5×10-6 mol/L刺激较对照组细胞凋亡的比率明显增加(P醛固酮能够抑制系膜细胞的基础自噬激活并促进系膜细胞在氧化应激条件下的凋亡。

关键词：醛固酮自噬肾小球系膜细胞氧化性应激

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醛固酮致心肌纤维化相关基因的筛选

细胞与分子免疫学杂志 2012年第4期28卷 350-353页

作者：陈劲松莫群谢永进郭玉松黄婷婷任磊王升启伯晓晨任艺虹解放军总医院心血管内科北京100853 解放军第175医院医务处福建漳州363000 军事医学科学院放射与辐射医学研究所北京100850

目的:寻找醛固酮独立致心肌纤维化(MF)的分子。方法:利用差速贴壁法分离培养胎儿心肌成纤维细胞(FCFs);选择3 4代细胞给予醛固酮(ALD)处理8 h、提取各组总RNA,用基因组芯片检测差异表达基因,利用Westernblot和RT-PCR对部分基因表达产物... 详细信息

目的:寻找醛固酮独立致心肌纤维化(MF)的分子。方法:利用差速贴壁法分离培养胎儿心肌成纤维细胞(FCFs);选择3 4代细胞给予醛固酮(ALD)处理8 h、提取各组总RNA,用基因组芯片检测差异表达基因,利用Westernblot和RT-PCR对部分基因表达产物进行验证。结果:ALD处理后表达水平改变的基因共1 519个,其中上调的714个,下调的805个。选择与MF发生机制关系密切的趋化因子(C-C基元)配体7(CCL7)、基质金属蛋白酶26(MMP-26)及白细胞介素31受体α(IL31RA)等基因进行RT-PCR和Westernblot验证,结果与芯片检测一致。结论:利用基因芯片检测出ALD处理后FCFs多种基因表达发生改变,部分基因可能与MF有关。

关键词：醛固酮心肌纤维化基因芯片

醛固酮对豚鼠耳蜗水通道及离子通道蛋白的作用

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南方医科大学学报 2007年第12期27卷 1918-1920,1923页

作者：李琦黄德亮南方医科大学南方医院耳鼻喉科广东广州510515 解放军总医院耳鼻咽喉-头颈外科北京100853

目的检测醛固酮作用后早期(6h)及远期(1月)豚鼠耳蜗水通道及离子通道蛋白基因与蛋白质的表达改变情况。方法使用RT-PCR方法检测醛固酮腹腔注射后6h豚鼠耳蜗中Na-KATP酶β1、β3亚单位及钠离子通道蛋白α亚单位(ENaC α Subunit)基因表... 详细信息

目的检测醛固酮作用后早期(6h)及远期(1月)豚鼠耳蜗水通道及离子通道蛋白基因与蛋白质的表达改变情况。方法使用RT-PCR方法检测醛固酮腹腔注射后6h豚鼠耳蜗中Na-KATP酶β1、β3亚单位及钠离子通道蛋白α亚单位(ENaC α Subunit)基因表达的改变情况;使用免疫组织化学染色的方法检测醛固酮作用后1月耳蜗水通道蛋白1(AQP1)蛋白的表达情况。结果醛固酮作用后早期,在豚鼠耳蜗中Na-KATP酶β1、β3亚单位的表达情况无明显改变,钠离子通道蛋白α亚单位则出现明显上调(P醛固酮在豚鼠耳蜗中可能通过基因组作用方式发挥作用,并且醛固酮引起膜迷路积水可能是由于其对离子浓度的改变所引起的。

关键词：醛固酮耳蜗离子通道蛋白水通道蛋白

醛固酮与螺内酯对肝星状细胞增殖及胶原合成的影响

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中华医学杂志 2003年第20期83卷 1823-1825页

作者：姚金锋姚希贤房红梅崔东来白文元河北医科大学第二医院消化内科石家庄050000

目的　探讨醛固酮 (ALD)、螺内酯对大鼠肝星状细胞 (HSC)增殖、胶原合成的影响。方法　大鼠HSC培养 ,在不同浓度的ALD、螺内酯作用下 ,采用3 H 胸腺嘧啶核苷 (3 H TdR)、3 H 脯氨酸 (3 H Pro)掺入法及流式细胞技术观察ALD、螺内酯对HSC... 详细信息

目的　探讨醛固酮 (ALD)、螺内酯对大鼠肝星状细胞 (HSC)增殖、胶原合成的影响。方法　大鼠HSC培养 ,在不同浓度的ALD、螺内酯作用下 ,采用3 H 胸腺嘧啶核苷 (3 H TdR)、3 H 脯氨酸 (3 H Pro)掺入法及流式细胞技术观察ALD、螺内酯对HSC增殖及胶原合成的影响。结果　ALD在 10 -4mol/L高浓度时3 H TdR、3 H Pro掺入量与对照组相比明显增多 (P 0 .0 5 )。结论　高浓度ALD可以促使HSC增殖 ,其拮抗剂螺内酯明显抑制HSC的增殖及合成胶原。

关键词：醛固酮螺内酯肝星状细胞增殖胶原合成肝硬化

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醛固酮诱导MIN6细胞凋亡及作用机制研究

上海交通大学学报（医学版） 2012年第3期32卷 288-292页

作者：潘瑜刘晓莉束金莲张霞金惠敏上海交通大学医学院附属第三人民医院肾内科上海201900

目的探讨醛固酮对小鼠胰岛B细胞株MIN6细胞凋亡的影响及可能的作用机制。方法体外培养的小鼠胰岛B细胞株MIN6分为对照组(加入无血清的DMEM培养基)、醛固酮组(加入10、100、1 000 nmol/L醛固酮进行干预)和醛固酮+拮抗剂组(以100 nmol/L... 详细信息

目的探讨醛固酮对小鼠胰岛B细胞株MIN6细胞凋亡的影响及可能的作用机制。方法体外培养的小鼠胰岛B细胞株MIN6分为对照组(加入无血清的DMEM培养基)、醛固酮组(加入10、100、1 000 nmol/L醛固酮进行干预)和醛固酮+拮抗剂组(以100 nmol/L醛固酮和100 nmol/L醛固酮拮抗剂螺内酯共同干预)。采用MTT法检测细胞活性;放射免疫分析法检测葡萄糖刺激的胰岛素分泌(GSIS);流式细胞术结合FITC-Annexin V/PI荧光染色检测细胞凋亡;ELISA法检测细胞培养上清液中Caspas-3活性;Western blotting法检测凋亡相关蛋白细胞色素C(Cyt-C)、Bcl-2、Bax和磷酸化蛋白激酶C(p-Akt)的表达。结果MIN6细胞增殖活性随醛固酮干预浓度的升高而下降,呈现浓度依赖性。在生理糖浓度(5.6 mmol/L)和高葡萄糖浓度(28 mmol/L)环境中,醛固酮组的GSIS均显著低于与对照组(P醛固酮+拮抗剂组GSIS显著高于醛固酮组(P醛固酮组细胞凋亡率显著高于对照组(P醛固酮+拮抗剂组细胞凋亡率显著低于醛固酮组(P醛固酮组Caspase-3活性明显升高,Cyt-C表达上调,Bcl-2/Bax下降,p-Akt表达下调(均P醛固酮+拮抗剂组对醛固酮组的Caspase-3活性升高及相关蛋白表达异常具有明显抑制作用。结论醛固酮具有促进MIN6细胞凋亡的作用,其作用机制可能与Cyt-C、Bcl-2、Bax和Akt介导的线粒体信号途径有关。

关键词：醛固酮胰岛B细胞细胞凋亡蛋白激酶C

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醛固酮检测方法及临床应用进展

中华检验医学杂志 2019年第12期42卷 1072-1077页

作者：钱婧雨刘向祎首都医科大学附属北京同仁医院检验科北京100730

醛固酮是一种类固醇激素,通过作用于肾脏来维持机体的水钠平衡。原发性醛固酮增多症(简称原醛)是最常见的引起内分泌性高血压的疾病,其临床表现隐匿,具有较高的死亡率。肾素-醛固酮比值(ARR)、血/尿醛固酮的检测是最有效筛查和确诊原醛... 详细信息

醛固酮是一种类固醇激素,通过作用于肾脏来维持机体的水钠平衡。原发性醛固酮增多症(简称原醛)是最常见的引起内分泌性高血压的疾病,其临床表现隐匿,具有较高的死亡率。肾素-醛固酮比值(ARR)、血/尿醛固酮的检测是最有效筛查和确诊原醛的方法。人体内醛固酮含量低且存有类似结构的干扰物质,因此对其准确定量具有一定的挑战性。醛固酮检测方法有放射免疫法、酶联免疫吸附法、化学发光法和质谱。每种方法具有各自的优缺点,且不同检测方法诊断原醛的ARR比值也不完全一致。因此本文对醛固酮检测方法及临床应用的研究进展进行综述。

关键词：醛固酮放射免疫测定酶联免疫吸附测定质谱分析法

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醛固酮促进心室成纤维细胞增殖作用

中国应用生理学杂志 2001年第1期17卷 64-67页

作者：龚素珍刘培庆鲁伟谈智符史干潘敬运中山医科大学生理学教研室广州510089

探讨醛固酮促进心室成纤维细胞增殖作用。方法 :采用 [3H] TdR掺入率测定和RT PCR。结果 :醛固酮 (1× 10 -9～ 1× 10 -6)mol/L能明显促进心室成纤维细胞的 [3H] TdR掺入率 ,且呈剂量依赖方式 ;醛固酮孵育 15min ,可见c fosmRNA的表达 ... 详细信息

探讨醛固酮促进心室成纤维细胞增殖作用。方法 :采用 [3H] TdR掺入率测定和RT PCR。结果 :醛固酮 (1× 10 -9～ 1× 10 -6)mol/L能明显促进心室成纤维细胞的 [3H] TdR掺入率 ,且呈剂量依赖方式 ;醛固酮孵育 15min ,可见c fosmRNA的表达 ,至 1h表达达高峰 ,以后逐渐降低 ,醛固酮受体拮抗剂螺旋内酯能阻断醛固酮的作用。结论 :醛固酮能促进心室成纤维细胞增殖。

关键词：醛固酮螺旋内酯 [^3H]-TdR c-fosmRNA 成纤维细胞心室增殖作用

醛固酮对肝星状细胞早期生长反应因子-1信号通路调控的体外研究

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中华肝脏病杂志 2005年第8期13卷 567-570页

作者：李旭孟莹杨希山吴平生张振书南方医科大学南方医院急诊科广州510515 南方医科大学南方医院呼吸内科广州510515 广东省中医药管理局南方医科大学南方医院心内科广州510515 南方医科大学南方医院消化科广州510515

目的探讨醛固酮(Aldo)对肝星状细胞(HSC)早期生长反应因子-1(EGR-1)信号传导通路的影响。方法采用HSC-T6细胞株,分别给予Aldo 1μmol/L处理10 min、30 min、1h、2h和3h, western blot检测磷酸化p42/44蛋白的表达。另外,观察细胞外信号... 详细信息

目的探讨醛固酮(Aldo)对肝星状细胞(HSC)早期生长反应因子-1(EGR-1)信号传导通路的影响。方法采用HSC-T6细胞株,分别给予Aldo 1μmol/L处理10 min、30 min、1h、2h和3h, western blot检测磷酸化p42/44蛋白的表达。另外,观察细胞外信号调节激酶(ERK)1/2特异性阻断剂U0126、抗氧化剂N-乙酰半胱氨酸(NAC)(均预先处理60 min,再给予Aldo刺激)和肿瘤坏死因子α对磷酸化p42/44蛋白表达的影响。此外,给予Aldo、U0126和NAC处理后,用电泳迁移率分析(EMSA)检测EGR-1 DNA结合活性的变化;western blot检测血小板衍生生长因子-B(PDGF—B)蛋白的表达。免疫细胞化学检测Aldo对HSC PDGF-B蛋白表达的影响。结果Aldo可诱导磷酸化p42/44的表达,U0126可抑制磷酸化p42/44的表达。EMSA结果显示:Aldo干预HSC 30 min后EGR-1 DNA结合活性开始增加, 1h达到峰值,然后逐渐减低;U0126可显著抑制Aldo诱导的EGR-1活性增强;NAC对Aldo诱导的EGR- 1活性无抑制作用。Aldo可诱导HSC PDGF—B蛋白表达;U0126和NAC对PDGF—B表达无抑制作用。结论Aldo可经ERK1/2通路诱导HSC EGR-1活性增强。Aldo可经EGR-1通路调控PDGF-B的表达。

关键词：醛固酮肝星状细胞早期生长反应因子-1 信号通路调控作用 EGR1 HSC Aldo