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酿酒酵母工程菌产3-甲硫基丙醇的发酵条件优化

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河北农业大学学报 2014年第1期37卷 94-101页

作者：杨雪莲张凯丽李金玉张秋晨罗霞王成涛北京工商大学北京市食品添加剂工程技术研究中心北京100048 北京工商大学食品添加剂与配料北京高校工程研究中心北京100048

为提高天然香料3-甲硫基丙醇的得率,本研究采用单因素和正交设计实验对表达脱羧酶酿酒酵母工程菌的发酵条件进行优化。确定了工程菌的最佳发酵培养基为:蛋氨酸5g/L,微量元素2%(v/v),酵母提取物4g/L,蛋白胨12g/L,KH2PO410g/L,K2HPO42g/L... 详细信息

为提高天然香料3-甲硫基丙醇的得率,本研究采用单因素和正交设计实验对表达脱羧酶酿酒酵母工程菌的发酵条件进行优化。确定了工程菌的最佳发酵培养基为:蛋氨酸5g/L,微量元素2%(v/v),酵母提取物4g/L,蛋白胨12g/L,KH2PO410g/L,K2HPO42g/L,葡萄糖20g/L,G418 400μg/L。最适发酵条件为:接种量10%,pH为5,发酵温度30℃,转速200r/min。优化后3-甲硫基丙醇的浓度可达4.38g/L,较初始条件提高了3.5倍。

关键词： 3-甲硫基丙醇酿酒酵母工程菌正交实验发酵优化

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产青蒿酸酿酒酵母工程菌的抗性筛选

中国医药工业杂志 2019年第5期50卷 524-529页

作者：陈伟于文文陈亚军滕云杨胜利浙江海正药业股份有限公司浙江省抗真菌药物重点实验室浙江台州318000 浙江工业大学药学院浙江杭州310000

本研究以产青蒿酸的酿酒酵母工程菌为出发菌株,通过3 种抗菌素(诺尔斯菌素、遗传霉素和潮霉素B)对出发菌株进行抗性筛选。研究表明,当诺尔斯菌素和潮霉素B 复合添加且添加浓度分别为150 和100 μg/ml 时,经抗性筛选获得的抗性菌株发酵... 详细信息

本研究以产青蒿酸的酿酒酵母工程菌为出发菌株,通过3 种抗菌素(诺尔斯菌素、遗传霉素和潮霉素B)对出发菌株进行抗性筛选。研究表明,当诺尔斯菌素和潮霉素B 复合添加且添加浓度分别为150 和100 μg/ml 时,经抗性筛选获得的抗性菌株发酵产量高达(926.8±21.9)mg/L,与出发菌株的(785.3±18.1)mg/L 相比提高了18.0%。经多次传代验证,经抗性筛选获得的菌株遗传稳定性好,具备工业化生产价值。

关键词：青蒿酸酿酒酵母工程菌抗性筛选遗传稳定性

α-淀粉酶和糖化酶的表达及酿酒酵母工程菌的构建

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中山大学学报（自然科学版） 1999年第2期38卷 80-84页

作者：吴晓萍李文清罗进贤后茂立林资诚中山大学生命科学学院广州市微生物研究所

将切除了５′端非编码区５０碱基对片段的黑曲霉糖化酶ＧＡＩｃＤＮＡ与大麦α淀粉酶基因重组进大肠杆菌酵母穿梭载体，构建重组表达质粒ｐＭＡＧ１１，转化酿酒酵母ＧＲＦ１８，获得含α淀粉酶和糖化酶双基因的酵母工程菌ＧＲＦ１... 详细信息

将切除了５′端非编码区５０碱基对片段的黑曲霉糖化酶ＧＡＩｃＤＮＡ与大麦α淀粉酶基因重组进大肠杆菌酵母穿梭载体，构建重组表达质粒ｐＭＡＧ１１，转化酿酒酵母ＧＲＦ１８，获得含α淀粉酶和糖化酶双基因的酵母工程菌ＧＲＦ１８（ｐＭＡＧ１１）．在酵母ＰＧＫ基因启动子和终止信号的调控下，α淀粉酶和糖化酶基因获得高效表达，９９％的表达产物分泌至胞外．在含ｗ＝１５％的可溶性淀粉的ＹＰＳ培养基中培养４４ｈ，淀粉水解率达到９９％。

关键词： α-淀粉酶糖化酶基因表达酿酒酵母工程菌分解淀粉

可降解淀粉酿酒酵母基因工程菌的构建及其生产应用

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中山大学学报（自然科学版） 2007年第3期46卷 128-130页

作者：程少菊张添元罗进贤吴群悦中山大学生命科学学院生物化学系//基因工程教育部重点实验室广东广州510275

将酿酒酵母的rDNA片段,黑曲霉葡萄糖淀粉酶基因表达盒及G418抗性基因表达盒重组进经过改造的质粒pSP72,构建酿酒酵母整合型质粒YIp4RGAn及YIp19RGAn,转化酿酒酵母实验室菌株GRF18、生产菌株JL108、SD和JM,获得能高效表达葡萄糖淀粉酶和... 详细信息

将酿酒酵母的rDNA片段,黑曲霉葡萄糖淀粉酶基因表达盒及G418抗性基因表达盒重组进经过改造的质粒pSP72,构建酿酒酵母整合型质粒YIp4RGAn及YIp19RGAn,转化酿酒酵母实验室菌株GRF18、生产菌株JL108、SD和JM,获得能高效表达葡萄糖淀粉酶和分解淀粉的酿酒酵母基因工菌。Southern印迹分析证明,葡萄糖淀粉酶基因已整合进工程菌染色体。这些工程菌在含有20%淀粉的培养基中培养,产酒率都在11%以上。

关键词：降解淀粉酿酒酵母工程菌酒精生产重组DNA技术

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酿酒酵母代谢木糖工程菌的构建

食品与发酵工业 2011年第11期37卷 16-20页

作者：汤斌张风琴汤文晶丁丽霞安徽工程大学微生物发酵安徽省工程技术研究中心安徽芜湖241000

通过PCR方法从休哈塔假丝酵母基因组DNA中克隆得到木糖还原酶(XR)基因XYL1和木糖醇脱氢酶(XDH)基因XYL2,将其分别连接到酵母表达载体pYES2上,得到重组表达载体pYES2-XYL1和pYES2-XYL2,从pYES2-XYL1上克隆得到含半乳糖启动子的XYL1,将其... 详细信息

通过PCR方法从休哈塔假丝酵母基因组DNA中克隆得到木糖还原酶(XR)基因XYL1和木糖醇脱氢酶(XDH)基因XYL2,将其分别连接到酵母表达载体pYES2上,得到重组表达载体pYES2-XYL1和pYES2-XYL2,从pYES2-XYL1上克隆得到含半乳糖启动子的XYL1,将其连接到pYES2-XYL2序列的下游,得到重组表达载体pYES2-XYL1-XYL2,通过电转化方法将pYES2-XYL1-XYL2转入酿酒酵母宿主菌INVSc1。在初始pH为5.5,温度为33℃,前5h转速为150r/min,后变为50r/min的条件下,乙醇产量为33.45g/L。

关键词：休哈塔假丝酵母木糖还原酶木糖醇脱氢酶 pYES2-XYL1-XYL2 酿酒酵母工程菌

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酿酒酵母代谢木糖工程菌的构建

酿酒酵母代谢木糖工程菌的构建

作者：张凤琴安徽工程大学

学位级别：硕士

生物质能源是可再生能源的重要组成部分,以生物质为原料生产燃料乙醇有着广阔的市场前景。燃料乙醇是一种便捷、清洁的可再生能源,因此世界很多国家已将其纳入能源战略发展规划。廉价易得的原料和高效的生产工艺是燃料乙醇工业化生产的... 详细信息

生物质能源是可再生能源的重要组成部分,以生物质为原料生产燃料乙醇有着广阔的市场前景。燃料乙醇是一种便捷、清洁的可再生能源,因此世界很多国家已将其纳入能源战略发展规划。廉价易得的原料和高效的生产工艺是燃料乙醇工业化生产的必备条件,以可再生木质纤维素为原料生物转化制取乙醇已成为当前的研究热点,木糖是木质纤维素水解液中含量仅次于葡萄糖的一种单糖,木糖的高效转化是木质纤维素生物法制取乙醇的关键技术之一。目前,对木糖高效发酵产乙醇菌株的研究是一项热门课题。本论文主要进行两个方面研究。一是从休哈塔假丝酵母中提取其基因组DNA,以其为模板,扩增得到木糖还原酶和木糖醇脱氢酶基因。将其重组到质粒pYES2上,构建得到重组质粒pYES2-XYL1-XYL2。将其转化酿酒酵母INVScl,得到重组酿酒酵母菌株。二是对构建的酿酒酵母工程菌进行酶活性鉴定,摇瓶发酵,并对其发酵条件进行初步研究。通过研究,取得以下研究成果：（1）采用经诱变并不断驯化得到的优良菌株休哈塔假丝酵母作为出发菌株,通过酚-氯仿法提取其基因组DNA,以该基因组DNA为模板,经PCR扩增得到主要的木糖代谢酶木糖还原酶基因XYL1和木糖醇脱氢酶基因XYL2。将测序结果与GenBank上的序列进行比对,核苷酸同源性分别为99%和98%,蛋白质的同源性均为100%。（2）将基因XYL1及XYL2分别与质粒pYES2连接得到重组质粒pYES2-XYL1和pYES2-XYL2,并以pYES2-XYL1为模板,扩增得到含半乳糖启动子的XYL1片段PGAL-XYL1。将该片段连接到重组质粒pYES2-XYL2,构建得到重组质粒pYES2-XYL1-XYL2。将该重组质粒转化酿酒酵母INVSc1,成功获得了木糖代谢酿酒酵母工程菌。（3）通过试验得到酿酒酵母工程菌的木糖还原酶和木糖醇脱氢酶酶活分别为O.83U/mg和1.04U/mg,而未重组的酿酒酵母无木糖还原酶和木糖醇脱氢酶活性,因而可知木糖还原酶和木糖醇脱氢酶在酿酒酵母中得到了表达。继而对初始木糖浓度,初始pH,温度,摇床转速等发酵条件进行了研究,初步确定此酿酒酵母工程菌发酵产乙醇的最佳条件为：木糖初始浓度为100g/L,初始pH为5.5,温度为33℃,前5h转速为150rpm,后转速变为50rpm,直至发酵结束,在此条件下,乙醇和木糖醇产量分别为33.45g/L和14.85 g/L。本研究成功构建了一株能够代谢木糖的酿酒酵母工程菌,该菌株具有耐高浓度糖和较高浓度酒精的能力。此外,本研究采用的双基因单载体的方法,为该研究提供了一种单载体克隆多基因的可行方法。

关键词：休哈塔假丝酵母木糖还原酶木糖醇脱氢酶 pYES2-XYL1-XYL2 酿酒酵母工程菌

ChIFN-γ酿酒酵母工程菌粉的毒性与营养分析

同方学位论文库评论

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同方学位论文库

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山地农业生物学报 2015年第3期34卷 14-18,30页

作者：刘宗宋莉赵德刚贵州大学农业生物工程研究院山地植物资源保护与种质创新省部共建教育部重点实验室生命科学学院贵州贵阳550025 山地生态与农业生物工程协同创新中心贵州贵阳550025

从感官特性、微生物和重金属含量及营养成分等方面,对具有抗禽病毒活性的Ch IFN-γ酿酒酵母工程菌粉进行毒性和营养品质分析。结果表明,Ch IFN-γ酿酒酵母工程菌粉具有酵母的正常特性,含水量低,复水后活细胞率高;其细菌、霉菌、铅和总... 详细信息

从感官特性、微生物和重金属含量及营养成分等方面,对具有抗禽病毒活性的Ch IFN-γ酿酒酵母工程菌粉进行毒性和营养品质分析。结果表明,Ch IFN-γ酿酒酵母工程菌粉具有酵母的正常特性,含水量低,复水后活细胞率高;其细菌、霉菌、铅和总砷含量均符合国标卫生学要求。工程菌粉的灰分、总糖、总磷和总钙含量高于野生型菌粉,粗脂肪含量与野生型菌粉接近,但粗蛋白质和粗纤维含量显著低于野生型菌粉;工程菌粉的总必需氨基酸和总非必需氨基酸含量较高,赖氨酸、甲硫氨酸和亮氨酸3种必需氨基酸的含量高于野生型菌粉;第一限制性氨基酸为苯丙氨酸+酪氨酸,第二限制性氨基酸为缬氨酸。工程菌粉的蛋白模式不符合蛋白质饲料要求。

关键词：酿酒酵母工程菌鸡γ干扰素毒性营养分析

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秸杆生物转化燃料酒精研究现状

武汉生物工程学院学报 2005年第1期 23-27页

作者：何昌义吴柏春武汉生物工程学院应用生物技术研究所武汉生物工程学院科研处

重点介绍了我国自主技术开发的秸杆预处理、产酶菌的诱变育种、纤维素酶活性提高、酶系组分的现代生物技术应用、酿酒酵母工程菌的构建和发酵工艺、酒精脱水等新技术应用,展望了秸杆生物转化酒精的可能的工业化途径。

关键词：秸杆生物燃料酒精纤维素酶酿酒酵母工程菌渗透蒸发膜

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药物生物技术 2016年第1期 21-21页

2016-01一种高效表达中华绒螯蟹甲壳素的酿酒酵母工程菌一种高效表达中华绒螯蟹甲壳素的酿酒酵母工程菌,属于生物技术领域。本方法通过将中华绒螯蟹抗脂多糖因子Es Crustin的c DNA克隆至载体质粒p HAC181上,克隆成功的阳性转化子经过测... 详细信息

2016-01一种高效表达中华绒螯蟹甲壳素的酿酒酵母工程菌一种高效表达中华绒螯蟹甲壳素的酿酒酵母工程菌,属于生物技术领域。本方法通过将中华绒螯蟹抗脂多糖因子Es Crustin的c DNA克隆至载体质粒p HAC181上,克隆成功的阳性转化子经过测序验证后,再利用同源重组的方法,将目的基因整合于酿酒酵母菌株中GAL1启动子下游,在半乳糖的诱导下,将目的蛋白Es Crustin高效表达。

关键词：免疫磁珠富集几丁质中华绒螯蟹河蟹酿酒酵母工程菌高效表达基因片段玉米赤霉烯酮铁皮石斛 SEQ 甘蓝型油菜碱性成纤维细胞生长因子制备方法氨基酸序列阳性转化子环糊精糖基转移酶融合表达