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酸枣仁皂甙a与钙调蛋白相互作用的荧光光谱研究

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生物物理学报 1989年第2期5卷 183-189页

作者：区耀华王志刚周昕清华大学生物科学与技术系

文中报导了本实验室最近发现的一种新型钙调蛋白(CaM)天然拮抗剂——酸枣仁皂甙a,它能显著地抑制CaM活化PDE的活力.为研究它与CaM间的相互作用,本实验还制备了与天然CaM具有相同激活PDE能力的丹磺酰钙调蛋白(D-CaM).D-CaM的荧光光谱研... 详细信息

文中报导了本实验室最近发现的一种新型钙调蛋白(CaM)天然拮抗剂——酸枣仁皂甙a,它能显著地抑制CaM活化PDE的活力.为研究它与CaM间的相互作用,本实验还制备了与天然CaM具有相同激活PDE能力的丹磺酰钙调蛋白(D-CaM).D-CaM的荧光光谱研究表明,酸枣仁甙A的加入诱导CaM分子的疏水位点更加暴露,从而增强丹磺酰基团的荧光发射量子产率.桔抗剂与CaM间的结合是绝对依赖Ca^(2+)的.荧光滴定的结果证明此结合的解离常数为2.8μM.酸枣仁皂甙a能进一步加强三氟啦嗪(TFP)所诱导的D-CaM荧光增强.这结果暗示,它不与TFP竞l争CaM上相同的结合位点.

关键词：酸枣仁皂甙a 钙调蛋白荧光光谱

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酸枣仁皂甙a──新型的钙调蛋白天然拮抗剂

清华大学学报（自然科学版） 1990年第3期30卷 81-85页

作者：区耀华王志刚周昕生物科学与技术系

报导了具有宁心、安神等功效的中药酸枣仁的主要成分之一——酸枣仁皂甙Ａ，它是钙调蛋白（ＣａＭ）的一种新型天然拮抗剂，以不含氮而区别于其它天然拮抗剂。酸枣仁皂甙Ａ能有效地抑制ＣａＭ活化的环腺苷酸磷酸二酯酶（ＰＤＥ）的活... 详细信息

报导了具有宁心、安神等功效的中药酸枣仁的主要成分之一——酸枣仁皂甙Ａ，它是钙调蛋白（ＣａＭ）的一种新型天然拮抗剂，以不含氮而区别于其它天然拮抗剂。酸枣仁皂甙Ａ能有效地抑制ＣａＭ活化的环腺苷酸磷酸二酯酶（ＰＤＥ）的活力，其ＩＣ５０值为１５μｍｏｌ／Ｌ，是目前已发现的拮抗能力较强的一种ＣａＭ天然拮抗剂。动力学研究表明，酸枣仁皂甙Ａ对ＣａＭ活化ＰＤＥ活力的抑制是按非竞争性抑制方式进行的。

关键词：酸枣仁皂甙a 酸枣仁钙调蛋白

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酸枣仁皂甙a对急性高眼压大鼠视网膜缺氧诱导因子表达的影响

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解剖学杂志 2013年第1期36卷 65-69页

作者：林延王玮林志雄吴云霞厦门市第一医院眼科厦门361003 福建医科大学人体解剖学组织学胚胎学系福州350004

目的：研究急性高眼压下大鼠视网膜缺氧诱导因子的表达变化；酸枣仁皂甙a对急性高眼压大鼠视网膜缺氧诱导因子（HIF-1α）的影响。方法：建立大鼠急性高眼压模型。造模后，每天给药1次至取材，对模型给药组和对照给药组分别从大鼠尾静脉... 详细信息

目的：研究急性高眼压下大鼠视网膜缺氧诱导因子的表达变化；酸枣仁皂甙a对急性高眼压大鼠视网膜缺氧诱导因子（HIF-1α）的影响。方法：建立大鼠急性高眼压模型。造模后，每天给药1次至取材，对模型给药组和对照给药组分别从大鼠尾静脉按20mg/kg剂量注射酸枣仁皂甙a。各组分别于造模后6、 24、 48、 72h取材，H-E染色观察各组视网膜的结构变化；RT-PCR检测HIF-1α mRNA在各组视网膜上的表达。结果：H-E染色显示，造模后，随着时间延长，视网膜神经节细胞排列紊乱，神经纤维层水肿，内界膜破裂不连续；注射酸枣仁皂甙a后，视网膜的结构变化有所改善。RT-PCR检测视网膜上的HIF-1α mRNA表达：各模型组随着造模后时间的延长，HIF-1α mRNA均值逐渐升高，并在48h达到峰值，与空白对照组和空白给药组比较差异有统计学意义；模型给药组的HIF-1α mRNA均值比模型组低，差异有统计学意义。结论：HIF-1α是急性高眼压内早期变化的因子；酸枣仁皂甙a可改善急性高眼压大鼠视网膜的结构；酸枣仁皂甙a可降低24、 48、 72h急性高眼压大鼠视网膜上HIF-1α的表达。

关键词：酸枣仁皂甙a 急性高眼压视网膜缺氧诱导因子

酸枣仁皂甙a对海马神经细胞及GABA受体基因表达的影响

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酸枣仁皂甙A对海马神经细胞及GABA受体基因表达的影响

作者：夏晴电子科技大学

学位级别：硕士

酸枣仁在我国传统中医药中被广泛用于治疗失眠和焦虑症,整体动物实验证明其具有镇静安神功效,酸枣仁皂甙a(JuA)是其主要提取物。有研究报道证明JuA是一种对钙调蛋白(CaM)的非竞争性抑制剂,对小鼠自发活动有抑制作用。近期研究报道证明... 详细信息

酸枣仁在我国传统中医药中被广泛用于治疗失眠和焦虑症,整体动物实验证明其具有镇静安神功效,酸枣仁皂甙a(JuA)是其主要提取物。有研究报道证明JuA是一种对钙调蛋白(CaM)的非竞争性抑制剂,对小鼠自发活动有抑制作用。近期研究报道证明高剂量JuA可以抑制海马CA1区由于青霉素钠介导的过度活动,JuA对在体和体外大鼠海马内谷氨酸介导的兴奋信号通路具有抑制作用。以上证明JuA对中枢神经系统(CNS)具有抑制作用,尤其是在海马。海马作为边缘系统的重要组成部分,神经元高度集中,具有相对简单而高度序化的层状结构,神经元相对独立分布,在睡眠、学习、记忆、情绪反应及植物神经功能方面有重要作用。我们实验室在以往的研究工作中,用JuA作用于整体动物,检测小鼠自发活动,证明其具有镇静催眠作用。γ-氨基丁酸(GABA)是中枢神经系统内重要的抑制性神经递质,其传递作用由GABA受体介导,存在于神经元膜上的GABA受体,在脑区内介导突触前抑制和突触后抑制效应。该受体与人的许多神经性疾病密切相关,包括癫痫、酒精中毒、失眠和帕金森综合征等。GABAA受体和苯二氮卓类药物镇静催眠作用密切相关,并且与镇静催眠作用密切相关的部分受体在出生后发育期海马神经细胞上高表达。我们前期的工作初步提供了JuA发挥镇静催眠作用的证据,但是目前尚未有关于酸枣仁皂甙a(JuA)对海马神经细胞作用以及对其上GABA受体基因表达影响的研究报道,JuA对海马神经细胞作用的机制是什么,是否和传统经典的苯二氮卓类药物相似,通过作用于GABA受体发挥镇静催眠作用,其抑制作用的分子机理等还不清楚。本研究采用现代生物医学技术对JuA镇静催眠分子机制进行了初步探讨。我们首先进行了体外新生大鼠海马神经细胞培养,对文献报道的原代神经元培养方案进行了优化,并且用细胞骨架蛋白微管相关蛋白(MAP2)作为标志物,运用免疫细胞化学和免疫荧光方法,对培养的神经元进行了鉴定。结果显示培养物为MAP2阳性细胞,表明培养物为高纯度的海马神经细胞,可以进一步用于JuA对其作用的研究。其次,我们以JuA作用于培养的新生大鼠海马神经细胞作为研究对象,观察其对海马神经细胞的影响。首先,在相差显微镜下,我们观察到了相当数量具有典型外形特征的海马神经细胞,然后运用MTT方法检测JuA对海马神经细胞生长存活率的影响,不同浓度JuA(0.05g/L和0.01g/L)与海马神经细胞共同孵育7d,与空白对照组比较可见两个浓度JuA作用于海马神经细胞后,其MTT值均明显上升。实验结果显示,JuA组的海马神经细胞存活率明显高于对照组(p﹤0.05),0.05g/L和0.1g/L浓度的JuA对海马神经细胞的生长均有促进作用,能明显提高海马神经细胞的存活率,且呈现一定的剂量相关性,提示本试验中所选取的两个浓度JuA对体外培养新生大鼠海马神经细胞的生长有一定的促进和保护作用。最后,我们对JuA镇静催眠作用可能的分子机理进行了初步探讨。我们以体外培养新生大鼠海马神经细胞作为研究对象,运用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)技术检测JuA对培养海马神经细胞GABA受体基因表达量的影响,并且和地西泮(DZ)作用结果相比较。实验结果表明0.1 g/L JuA和10μM DZ作用于海马神经细胞24h后,均能上调部分GABA受体基因α1、α5和R1及下调β2的表达量;而高剂量0.1 g/L JuA作用72小时后能下调α1和β2的表达量,对α5和R1的表达量无明显影响,此结果不同于地西泮作用72h后所介导的α1、α5、β2和R1表达量的降低;低剂量JuA作用24h及72h后都能上调部分GABA受体基因α1、α5、β2和R1的表达量。JuA和地西泮作用于海马神经细胞不同时间均能引起部分GABA受体基因(α1、α5、β2和R1)表达量变化,提示0.1 g/L JuA短时间作用可能能够介导镇静催眠作用和肌肉松弛作用,而长时间作用则有可能同地西泮相似能导致耐受性和成瘾性;然而,低剂量0.05 g/L JuA无论短时间或长时间作用均可能诱导镇静催眠和肌松作用,并且没有明显的诱导耐受性和成瘾性的倾向。所以,0.1 g/L和0.05 g/L剂量的JuA均可能介导镇静催眠作用,但是0.05 g/L剂量JuA由于其没有明显的导致耐受性和依赖性的分子生物学机制,可能更适用于临床治疗失眠症。

关键词：酸枣仁皂甙a 海马神经细胞地西泮免疫组化免疫荧光 MTT RT-PCR

酸枣仁皂甙a对急性高眼压大鼠视网膜神经节细胞的保护作用

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酸枣仁皂甙A对急性高眼压大鼠视网膜神经节细胞的保护作用

作者：林莉福建医科大学

学位级别：硕士

【目的】观察酸枣仁皂甙a(Jujuboside A,JuA)对急性高眼压大鼠视网膜谷氨酸的抑制效应,探讨其对视网膜神经节细胞(retinal ganglion cells,RGCs)的保护作用。【方法】选用健康成年SD大鼠54只,体重200±20g,雌雄不限,随机分成三组:空... 详细信息

【目的】观察酸枣仁皂甙a(Jujuboside A,JuA)对急性高眼压大鼠视网膜谷氨酸的抑制效应,探讨其对视网膜神经节细胞(retinal ganglion cells,RGCs)的保护作用。【方法】选用健康成年SD大鼠54只,体重200±20g,雌雄不限,随机分成三组:空白对照组6只,不做任何处理;实验对照组(生理盐水组)24只,前房灌注加压前及加压后每天早上9:00鼠尾静脉注射等量生理盐水;实验组(JuA组)24只,前房灌注加压前及加压后每天早上9:00鼠尾静脉注射JuA 20mg/kg。实验对照组和实验组按取材时间分成4组,每组6只,加压成功后6h、24h、48h、72h分批处死动物取视网膜。HE染色观察视网膜组织形态改变;TUNEL法检测凋亡细胞;HPLC检测视网膜谷氨酸浓度变化;免疫荧光检测和RT-PCR检测NMDAR1的表达和分布。【结果】急性高眼压主要造成大鼠视网膜内层损伤和RGCs凋亡,实验组较实验对照组视网膜内层损伤小,RGCs凋亡减少;急性高眼压后视网膜谷氨酸水平增高,实验对照组较空白对照组差异有统计学意义(24h、48h和72h p < 0.01),实验组谷氨酸水平下降,较实验对照组差异有统计学意义(24h和72h p < 0.05,48h p < 0.01),用药后不同时间差异有统计学意义(p < 0.01),时间和药物交互作用明显,以48小时最为明显;急性高眼压后NMDAR1 mRNA表达增高,48h表达最高,实验对照组48h较空白对照组48h差异有统计学意义(p < 0.01),实验组48h表达量下降,较实验对照组48h差异有统计学意义(p < 0.05)。【结论】急性高眼压造成大鼠视网膜内层损伤和RGCs凋亡。鼠尾静脉注射JuA预处理可以减轻高眼压对视网膜造成的损伤,减少RGCs凋亡,抑制视网膜游离谷氨酸水平的增高和NMDAR1的表达,其可能机制是通过抑制谷氨酸介导的兴奋性氨基酸信号通路,防止谷氨酸继发性损害的发生,从而发挥对视网膜神经节细胞的保护功能。

关键词：酸枣仁皂甙a 视网膜神经节细胞神经保护青光眼

酸枣仁皂甙a对小鼠自发活动及Mark3和Rpgrip1基因表达的研究

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酸枣仁皂甙A对小鼠自发活动及Mark3和Rpgrip1基因表达的研究

作者：王成电子科技大学

学位级别：硕士

酸枣仁是鼠李科植物酸枣Ziziphus jujuba Mill var spinosa (Bunge) Hu ex H F Chou (Ziziphus)的干燥成熟种子,传统中医理论认为其为镇静安眠类药物。酸枣仁皂甙a是酸枣仁的一种主要成份,研究表明酸枣仁皂甙a为酸枣仁镇静安眠的有效成... 详细信息

酸枣仁是鼠李科植物酸枣Ziziphus jujuba Mill var spinosa (Bunge) Hu ex H F Chou (Ziziphus)的干燥成熟种子,传统中医理论认为其为镇静安眠类药物。酸枣仁皂甙a是酸枣仁的一种主要成份,研究表明酸枣仁皂甙a为酸枣仁镇静安眠的有效成分之一,酸枣仁皂甙a可以抑制动物的自主活动、抑制青霉素钠诱导的海马CA1区兴奋性电位、降低海马神经元突触兴奋性突触后电位、抑制谷氨酸介导的信号途径。以上研究结果表明酸枣仁皂甙a对中枢神经系统(尤其是海马区)可能起着一个抑制物的作用。但是这些实验结果还不能够彻底地把酸枣仁皂甙a的作用机理解释清楚。在本课题中我们利用小鼠自主活动仪对给药组和对照组小鼠的运动量进行测定,接下来我们采用差异显示PCR(DD-PCR)技术来筛选与酸枣仁皂甙a相关的差异表达基因,从而在基因转录水平上解释枣仁皂甙A的作用机理。这是将差异显示PCR(DD-PCR)技术应用于研究中药有效成分的作用机制,差异显示PCR(DD-PCR)技术不仅能用于研究与酸枣仁皂甙a相关的差异表达基因,而且该技术对研究中药及其有效成分的作用机理是通用的。把差异显示PCR技术引入到中药及其有效成分的分子药理的研究将为该领域提供新的有用工具。对整体动物实验数据进行配对样本t检验和独立样本t检验分析表明腹腔注射80mg/kg酸枣仁皂甙a能够显著抑制小鼠的自发活动(P酸枣仁皂甙a作为酸枣仁的主要成分之一,具有抑制小鼠自发活动的功效,可能是酸枣仁镇静安眠的主要有效成分。为研究酸枣仁的有效成分提供了依据。差异显示PCR的实验结果和半定量PCR的实验结果均表明与对照组相比给药组小鼠海马区Mark3和Rpgrip1两个基因的表达水平升高。这一结果说明在酸枣仁皂甙a抑制小鼠自发活动的同时小鼠海马区Mark3和Rpgrip1两个基因的表达水平升高。不管酸枣仁皂甙a是否直接作用于Mark3和Rpgrip1两个基因,小鼠自发活动的降低与Mark3和Rpgrip1两个基因表达水平升高相关。

关键词：酸枣仁皂甙a 差异显示PCR 小鼠自发活动海马

酸枣仁皂甙a对急性高眼压诱导的大鼠视网膜节细胞损伤的作用

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酸枣仁皂甙A对急性高眼压诱导的大鼠视网膜节细胞损伤的作用

作者：林志雄福建医科大学

学位级别：硕士

【目的】 1、建立急性高眼压模型 2、酸枣仁皂甙a保护性治疗急性高眼压大鼠【方法】 1、第一部分健康成年SD大鼠60只,随机分为5组:空白对照组、模型1天组、模型3天组、模型5天组、模型7天组。生理盐水灌注大鼠眼前房法建立大鼠急性高... 详细信息

【目的】 1、建立急性高眼压模型 2、酸枣仁皂甙a保护性治疗急性高眼压大鼠【方法】 1、第一部分健康成年SD大鼠60只,随机分为5组:空白对照组、模型1天组、模型3天组、模型5天组、模型7天组。生理盐水灌注大鼠眼前房法建立大鼠急性高眼压模型。观察造模时大鼠角膜和结膜形态学的变化,并用Tono-Pen眼压计测量造模时和造模前后各组大鼠眼压;免疫组化观察造模前后阳性节细胞数的变化;RT-PCR检测各组THY-1基因的表达情况。 2、第二部分健康成年SD大鼠48只大鼠随机分为3组:空白对照组,模型7天组,酸枣仁皂甙a组。在造模后立即对酸枣仁皂甙a组按20mg/kg剂量从大鼠尾静脉注射酸枣仁皂甙a,每天一次,共七天。模型7天组给予相同体积的生理盐水代替从尾静脉注射。术后七天,三组取材免疫组化观察视网膜组织结构及阳性细胞数的变化;RT-PCR检测THY-1mRNA和western blot检测各组THY-1蛋白的表达。【结果】 1、眼压造模前大鼠眼压为15.80±1.47mmHg。在造模过程中测量大鼠眼压为30.13±2.36mmHg。造模后第3,5,7天,眼压恢复正常(P>0.05)。 2、通过免疫组化观察和RT-PCR检测,观察和检测到到造模后随着时间的推移,节细胞层上的阳性细胞数和THY-1mRNA表达均值逐渐减少。 3、空白对照组,模型7天组,酸枣仁皂甙a组的视网膜神经节细胞密度分别为22±2.2个/高倍镜、16±2.8个/高倍镜和21±2.7个/高倍镜。酸枣仁皂甙a组与空白对照组比较,密度差异没有统计学意义;模型组与空白对照对照组比较,密度差异有统计学意义。 4、THY-1的mRNA水平酸枣仁皂甙a组与空白对照组比较,差异没有统计学意义;模型7天组与空白对照组比较,差异有统计学意义,P酸枣仁皂甙a组与空白对照组比较,差异没有统计学意义;模型组与空白对照组比较,差异有统计学意义。【结论】 1.通过生理盐水灌注大鼠前房建立急性高眼压的方法,可建立与闭角型急性青光眼病理相似的高眼压动物模型。 2.酸枣仁皂甙a对实验性急性高眼压大鼠的视网膜神经节细胞有保护作用。

关键词：酸枣仁皂甙a 急性高眼压视网膜节细胞

钙调蛋白与酸枣仁皂甙a作用的~1H核磁共振谱研究

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清华大学学报（自然科学版） 1990年第6期30卷 46-52页

作者：周玉祥王志刚区耀华周昕生物科学与技术系

利用高分辨的１Ｈ核磁共振技术研究了Ｃａ２＋对钙调蛋白（ＣａＭ）分子构象的影响以及酸枣仁皂甙Ａ与ＣａＭ的作用机制。研究结果表明；随着Ｃａ２＋的加入．ＣａＭ分子的构象处于不断的变化之中。前两个Ｃａ２＋的加入主要结合... 详细信息

利用高分辨的１Ｈ核磁共振技术研究了Ｃａ２＋对钙调蛋白（ＣａＭ）分子构象的影响以及酸枣仁皂甙Ａ与ＣａＭ的作用机制。研究结果表明；随着Ｃａ２＋的加入．ＣａＭ分子的构象处于不断的变化之中。前两个Ｃａ２＋的加入主要结合在ＣａＭ的第Ⅲ，ⅣＣａ２＋结合位点（Ｃ结构域）上，后两个Ｃａ２＋的加入，则主要结合在ＣａＭ分子的第Ⅰ，Ⅱ Ｃａ２＋结合位点（Ｎ结构域〕上：酸枣仁皂甙Ａ在ＣａＭ上也有两类结合位点，一类是位于ＣａＭ分子Ｎ结构域上，只能结合一个药物分子的高亲合点；另一类是位于ＣａＭ分子Ｃ结构域上的至少能结合两个药物分子的低亲合点。

关键词：核磁共振钙调蛋白酸枣仁皂甙a

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薄层扫描法测定酸枣仁中酸枣仁皂甙a和B的含量

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药物分析杂志 1995年第A1期15卷 163-164页

作者：王健林晓