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江浙蝮蛇毒酸性磷脂酶a2基因的表达

Acta Biochimica et Biophysica Sinica 1998年第4期30卷 85-89页

作者：刘小龙潘华杨冠珍吴祥甫周元聪蔡明德中国科学院上海生物化学研究所上海市高血压研究所

将江浙蝮蛇毒酸性磷脂酶Ａ２基因克隆至表达载体ｐＢＬＭＶＬ２，转化入大肠杆菌ＲＲ１，经过温敏诱导，ＳＤＳ－ＰＡＧＥ检测，在约１４ｋＤ处有一表达条带。表达产物酸性磷脂酶Ａ２约占细菌蛋白总量的３０％，并以包涵体的形式存在。... 详细信息

将江浙蝮蛇毒酸性磷脂酶Ａ２基因克隆至表达载体ｐＢＬＭＶＬ２，转化入大肠杆菌ＲＲ１，经过温敏诱导，ＳＤＳ－ＰＡＧＥ检测，在约１４ｋＤ处有一表达条带。表达产物酸性磷脂酶Ａ２约占细菌蛋白总量的３０％，并以包涵体的形式存在。纯化包涵体后，将产物变性、复性，然后用ＦＰＬＣＳｕｐｅｒｏｓｅＴＭ１２纯化，产物经过ＳＤＳ－ＰＡＧＥ检测只有单一条带。通过Ｗｅｓｔｅｒｎ检测，证实纯化产物即是酸性磷脂酶Ａ２。最后对表达的酸性磷脂酶Ａ２进行了酶活性和生物活性的测定。至此我们成功地在大肠杆菌中表达蝮蛇毒酸性磷脂酶Ａ２基因，这将为以后对磷脂酶Ａ２的结构与功能的研究打下很好的基础

关键词：江浙蝮蛇酸性磷脂酶a2 表达复性活性测定

广西眼镜王蛇毒酸性磷脂酶a2-1的表达及杂合性酸性磷脂酶a2的克隆及序列分析

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广西眼镜王蛇毒酸性磷脂酶A2-1的表达及杂合性酸性磷脂酶A2的克隆...

作者：林文珍广西医科大学

学位级别：硕士

将广西眼镜王蛇毒酸性磷脂酶a2-1(APLa2-1)基因克隆至表达载体pBLMVL2和 pET28a(+),分别转化入大肠杆菌RR1和BL21,经过诱导,SDS-PAGE检测,重组质粒pBLMVL2-APLa2-1无明显表达, pET28a-APLa2-1在18kD有一明显的表达条带,表达产物APLa2-1约占细菌总量30%,并以包涵体的形式存在,将产物变复性后用Sephadex G-75 纯化,产物经过SDS-PAGE检测只有单一条带, 通过Western-blot检测,证实纯化产物即是酸性磷脂酶a2 ，最后对表达的APLa2进行了酶活性和生物活性的测定，至此我们在大肠杆菌中表达了广西眼镜王蛇毒APLa2 。此外，我们从广西眼镜王蛇毒腺中提取总RNA，根据种属关系接近的台湾眼镜蛇毒酸性磷脂酶a2（简称APLa2）两端非翻译区的保守序列设计引物，利用RT-PCR进行体外扩增，获得磷脂酶a2基因，克隆至pMD18-T载体，经测序筛选出APLa2-1、APLa2-2及一个新的酸性磷脂酶a2（命名为APLa2-3）。根据测序结果确定了APLa2-3基因的全序列，并由此推导编码的氨基酸序列。利用Antheprot 4.3c蛋白序列分析软件包计算它的等电点为4.885，相对分子质量为16.543kD,并预测了它的二级结构和部分理化性质。同源性比较表明，APLa2-3的1～39位氨基酸残基序列与APLa2-2相同，其同源性为64%，而40～108位氨基酸残基序列与APLa2-1相同，其同源性为69%，109位氨基酸残基序列不同于这两种APLa2 ，这揭示了PLa2具有基因多样性，可能与物种进化和生物活性有关，并为进一步研究PLa2的结构与功能的关系提供更多的信息。

关键词：广西眼镜王蛇毒酸性磷脂酶a2 表达复性活性测定基因克隆

pBPB共价修饰蝮蛇酸性磷脂酶A_2的晶体学数据

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物理化学学报 1997年第5期13卷 449-451页

作者：赵海燕宋时英林政炯杜晓燕周元聪中国科学院生物物理研究所生物大分子国家重点实验室北京100101 中国科学院上海生物化学研究所上海200031

The Crystals of acidic phospholipase a2 from the venom of Agkistrodon blomhoffii bre-vicaudus (i.e. Agkistrodon halys pallas) covalently modified with p-bromo-phenacylbromide wereobtained by the method of hanging drop vapor diffusion. Crystallization droplet was composedof 0.06mol’L-1 Na(CH3)2AsO2 (pH=6.5), 24.8% (v/v) 1,4-butanediol, and ***-1 *** crystal data are ot a=b=82.82A., c=32.85A, space group P61. 8945 unique reflections with1.93A resolution were ineasured on a Siemens area detector X-ray diffractometor, of which 8069reflections haring F0 >2σ(F). The experimental results show that the crystals are suitable to astructure analysis of high resolution.

关键词： BPB抑制剂晶体生长蝮蛇酸性磷脂酶a2 抑制剂

眼镜王蛇毒中酸性磷脂酶A_2对三氯化铁诱导的大鼠动脉血栓形成的抑制作用

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中国药理学与毒理学杂志 2004年第1期18卷 37-41页

作者：张维文张贵平罗健东钟蓓华区慧坚广州医学院药理学教研室广东广州510182

目的　研究眼镜王蛇毒中酸性磷脂酶a2 组分Ⅰ (命名为APLa2 Ⅰ)抑制动脉血栓形成的能力 ,观察将其开发成抗血栓药物的可能性。方法　模型组大鼠舌下ivPBS,3组APLa2 Ⅰ预治疗组大鼠分别舌下ivAPLa2 Ⅰ 1 .0 ,0 .5和 0 .1mg·kg-1 。... 详细信息

目的　研究眼镜王蛇毒中酸性磷脂酶a2 组分Ⅰ (命名为APLa2 Ⅰ)抑制动脉血栓形成的能力 ,观察将其开发成抗血栓药物的可能性。方法　模型组大鼠舌下ivPBS,3组APLa2 Ⅰ预治疗组大鼠分别舌下ivAPLa2 Ⅰ 1 .0 ,0 .5和 0 .1mg·kg-1 。各组给药 30min后 ,用 40 %FeCl3 诱导大鼠腹主动脉血栓形成 ,监测远端腹主动脉压 ,记录最低腹主动脉压和血栓形成时间 ,测量血栓面积及血栓重量。采用大鼠体外血浆凝块回缩实验观察APLa2 Ⅰ对血浆凝块回缩的影响。用小鼠尾动脉出血实验观察APLa2 Ⅰ对出血时间的影响。结果　预ivAPLa2 Ⅰ 1 .0 ,0 .5及 0 .1mg·kg-1 可抑制FeCl3 诱导的大鼠血栓形成后的腹主动脉压下降 ,使最低腹主动脉压从(4.0± 0 .5)kPa(模型组 )分别增高至 (7.7± 1 .0 ) ,(6 .8±0 .8)和 (5 .4± 0 .7)kPa ;使血栓形成时间从(31±4)min(模型组 )分别延长至 (60± 7) ,(53± 5)和(49± 6)min;使血栓面积从 (1 0 62± 1 39) μm2 (模型组 )分别减少至 (72 4± 74) ,(785± 96)和 (91 0±1 2 6) μm2 ;使 0 .5cm长血管内血栓重量从 (5 .2±0 .6)mg(模型组 )分别减少至 (3 .5± 0 .5) ,(3 .8±0 .5)和 (4.6± 0 .6)mg(P a2 Ⅰ能剂量依赖性地抑制大鼠血浆凝块回缩?

关键词：蛇毒液类酸性磷脂酶a2 眼镜王蛇毒三氯化铁动脉血栓形成抑制作用

广东眼镜王蛇毒酸性磷脂酶A_2的分离纯化及抗血小板聚集作用

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蛇志 2000年第1期12卷 3-6页

作者：张维文钟倍华张贵平广州医学院药理教研室广州510182 广州蛇毒研究所广州510182

目的　研究眼镜王蛇毒中酸性磷脂酶 a2 对血小板的作用。方法　采用 CM-Sephadex C-2 5,Sephadex G-75,DEAE-Sephadex A-2 5,Sephadex G-75多步柱层析法 ;聚丙烯酰胺凝胶电泳 ;酸性磷脂酶 a2 酶活性测定 ;血小板聚集实验。结果　从粗毒... 详细信息

目的　研究眼镜王蛇毒中酸性磷脂酶 a2 对血小板的作用。方法　采用 CM-Sephadex C-2 5,Sephadex G-75,DEAE-Sephadex A-2 5,Sephadex G-75多步柱层析法 ;聚丙烯酰胺凝胶电泳 ;酸性磷脂酶 a2 酶活性测定 ;血小板聚集实验。结果　从粗毒中分离纯化出一酸性磷脂酶 a2 单体 ,分子量为 1 4KD;等电点 p I3 .8;PLa2 比活力 2 0 μmol· mg- 1 ·min- 1 ;小鼠腹腔注射 LD5 0 为 ( 7.53± 1 .2 9) ***- 1 ;对 ADP、花生四稀酸、凝血酶诱导的兔血小板聚集均有抑制作用 ,具有剂量依赖关系。结论　广东眼镜王蛇毒酸性磷脂酶单体具有抗血小板聚集的作用。

关键词：眼镜王蛇蛇毒酸性磷脂酶a2 血小板聚集作用

广西眼镜王蛇毒酸性磷脂酶A_2的分离纯化和性质研究

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广西医科大学学报 2001年第1期18卷 1-3页

作者：王秋雁庄茂辛林文珍舒雨雁广西医科大学第一附属医院临床实验中心南宁530021 广西医科大学南宁530021

目的 :广西眼镜王蛇毒酸性磷脂酶 a2 的分离纯化和性质研究。方法 :分离纯化采用 Sephadex G- 75 ,CM- Sepharose CL -6 B和 DEAE- Sephadex A- 5 0柱层析法 ;通过电泳 ,磷脂酶 a2 活力测定 ,氨基酸组成测定 ,N端序列分析及药理实验进... 详细信息

目的 :广西眼镜王蛇毒酸性磷脂酶 a2 的分离纯化和性质研究。方法 :分离纯化采用 Sephadex G- 75 ,CM- Sepharose CL -6 B和 DEAE- Sephadex A- 5 0柱层析法 ;通过电泳 ,磷脂酶 a2 活力测定 ,氨基酸组成测定 ,N端序列分析及药理实验进行性质研究。结果 :从广西眼镜王蛇毒中分离到一种酸性的磷脂酶 a2 (命名为 APL a2 - 1) ,相对分子质量为 146 0 0 u,等电点 5 .4,酶的比活力为 10 8μmol/ m g· min- 1 ,N端序列为 NL IQFGNMIQCTVPGF。它对实验用小白鼠有致死性 (L D5 0 6 .6 m g/ kg) ,具有肌毒性 ,心脏毒性 ,抗血小板聚集活性 ,能诱导水肿形成。结论 :APL a2 - 1生化和药理性质的研究 ,为阐明蛇毒 PL a2结构和功能关系 ,及蛇伤中毒机制 ,打下了良好基础。

关键词：磷脂酶a2 眼镜王蛇纯化性质蛇毒酸性磷脂酶a2

广西眼镜王蛇毒酸性磷脂酶A_2-1在不同载体的表达

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蛇志 2007年第3期19卷 175-179页

作者：林文珍舒雨雁庄茂辛林政炯吴祥甫周元聪广西医科大学生物化学与分子生物学教研室广西南宁530021 中国科学院生物物理研究所生物大分子国家重点实验室北京100101 中国科学院上海生命科学院生物化学与细胞生物学研究所上海200031

目的构建广西眼镜王蛇毒酸性磷脂酶a2-1(APLa2-1)在不同载体的重组表达质粒,在***中表达APLa2-1并比较不同表达系统对APLa2-1的表达效果。方法将广西眼镜王蛇毒酸性磷脂酶a2-1(AP-La2-1)基因克隆至表达载体pBLMVL2和pET28a(+),分别转化... 详细信息

目的构建广西眼镜王蛇毒酸性磷脂酶a2-1(APLa2-1)在不同载体的重组表达质粒,在***中表达APLa2-1并比较不同表达系统对APLa2-1的表达效果。方法将广西眼镜王蛇毒酸性磷脂酶a2-1(AP-La2-1)基因克隆至表达载体pBLMVL2和pET28a(+),分别转化入大肠杆菌RR1和BL21,经过诱导表达,应用SDS-聚丙烯酰胺凝胶(SDS-PAGE)及Western blot观察重组蛋白表达情况。结果成功构建了重组质粒pBLMVL2-APLa2-1和pET28a-APLa2-1。pBLMVL2-APLa2-1在SDS-PAGE上没见明显表达带,在Western blot上可见一14 kD的表达带。pET28a-APLa2-1在SDS-PAGE上有一明显的18 kD表达条带,表达产物AP-La2-1约占细菌总量30%,并以包涵体的形式存在。结论APLa2-1可在大肠杆菌中表达,pET28a(+)对APLa2-1的表达效果优于pBLMVL2。

关键词：广西眼镜王蛇毒酸性磷脂酶a2 表达

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蝮蛇毒酸性磷脂酶A_2的空间晶体生长

生物物理学报 1993年第3期9卷 374-378页

作者：桂璐璐牛秀田毕汝昌周元聪林南琴中国科学院生物物理研究所北京100101 中国科学院上海生物化学研究所上海200031

对血小板聚集抑制剂—蝮蛇毒酸性磷脂酶A_2结晶研究的基础上,进行了空间结晶买验,与地面对照实验结果比较,空间的微重力环境对该酶的晶体生长有明显的改进作用.

关键词：酸性磷脂酶a2 结晶微重力蛇毒

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微重力对蛋白质晶体结构的影响

科学通报 2000年第1期45卷 55-59页

作者：董君潘冀森牛秀田周元聪毕汝昌中国科学院生物物理研究所北京100101 中国科学院上海生物化学研究所上海200031

了考察微重力对蛋白质晶体结构的影响，对空间和地面结晶实验生长出的蛋白质晶体进行了结构测定，并进行了比较研究．在完成对鸡蛋清溶菌酶晶体结构研究的基础上，又对酸性磷脂酶Ａ_２晶体结构做了测定和比较．从目前的研究结果可以得... 详细信息

了考察微重力对蛋白质晶体结构的影响，对空间和地面结晶实验生长出的蛋白质晶体进行了结构测定，并进行了比较研究．在完成对鸡蛋清溶菌酶晶体结构研究的基础上，又对酸性磷脂酶Ａ_２晶体结构做了测定和比较．从目前的研究结果可以得到这样的结论：微重力可能不足以改变蛋白质肽链的构象，但微重力能够改善与蛋白质分子联系较弱的有序水分子的空间排布状况，这应该是微重力改善蛋白质晶体质量的一个重要因素．另外，上述两种蛋白晶体的改善状况差异可能暗示，蛋白质晶体质量改善的显示程度是与蛋白质晶体的溶剂含量相关的．

关键词：微重力蛋白质结构晶体结构溶剂酸性磷脂酶a2