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金枪鱼胰脏酶解多肽对db/db糖尿病小鼠肾脏的保护作用

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食品科学 2017年第3期38卷 182-187页

作者：孙婷婷李妍妍周君张迪骏李晔张春丹何珊黄忠白苏秀榕宁波大学海洋学院浙江宁波315211 康奈尔大学农业与生命科学学院美国纽约州伊萨卡14850

目的:研究金枪鱼胰脏酶解多肽对db/db糖尿病小鼠体质量、血清胰岛素、糖化血红蛋白、血脂的影响,为进一步开发金枪鱼胰脏、研制新型保健型食品提供理论依据。方法:雄性Db/m小鼠为空白对照组,雄性db/db小鼠30只,分为模型对照组、阳性药组... 详细信息

目的:研究金枪鱼胰脏酶解多肽对db/db糖尿病小鼠体质量、血清胰岛素、糖化血红蛋白、血脂的影响,为进一步开发金枪鱼胰脏、研制新型保健型食品提供理论依据。方法:雄性Db/m小鼠为空白对照组,雄性db/db小鼠30只,分为模型对照组、阳性药组(甲基巴多索隆9.75 mg/(kg·d))、实验组,实验组灌胃金枪鱼胰脏酶解多肽(50 mg/(kg·d))。10周后测定各组小鼠体质量、血清胰岛素、糖化血红蛋白、血脂水平等指标。利用基因芯片技术,比较不同组间肾脏基因的表达水平。结果:与模型对照组相比,实验组能显著降低糖尿病小鼠的体质量、血清胰岛素、糖基化血红蛋白水平;降低总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白胆固醇水平,升高高密度脂蛋白胆固醇水平。并且,与模型对照组的差异表达比较,实验组基因表达水平有显著改变,获得差异基因678个,其中161个上调,517个下调。结论:金枪鱼胰脏酶解多肽可以改善db/db糖尿病小鼠的体质量、血清胰岛素、糖化血红蛋白、血脂水平,其作用效应可能与其下调醛固酮合成相关基因CYP11B1的表达水平有关。

关键词：金枪鱼胰脏酶解多肽糖尿病 db/db小鼠 CYP11B1

泥蚶血红蛋白异源四聚体酶解多肽抗菌活性及其机理研究

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海洋学报 2015年第12期37卷 106-115页

作者：王娟娟包永波王素芳林志华宁波大学海洋学院浙江宁波315211 浙江海洋高效健康养殖协同创新中心浙江宁波315211 浙江万里学院浙江省水产种质资源高效利用技术研究重点实验室浙江宁波315100

采用凝胶层析技术从泥蚶血细胞裂解物中纯化得到两种血红蛋白Tg-HbⅡ（异源四聚体）和TgHbⅠ（同源二聚体）,回收率分别为48.15%和24.91%。胰蛋白酶酶解Tg-HbⅡ,酶解液经反相C-18色谱柱分离纯化得7种血红蛋白源多肽F1~F7。通过琼脂扩散... 详细信息

采用凝胶层析技术从泥蚶血细胞裂解物中纯化得到两种血红蛋白Tg-HbⅡ（异源四聚体）和TgHbⅠ（同源二聚体）,回收率分别为48.15%和24.91%。胰蛋白酶酶解Tg-HbⅡ,酶解液经反相C-18色谱柱分离纯化得7种血红蛋白源多肽F1~F7。通过琼脂扩散法检测酶解多肽抑菌活性,结果发现7种多肽对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、恶臭假单胞菌、枯草芽孢杆菌和坚强芽孢杆菌均无抑菌作用,但多肽F2~F7对副溶血弧菌、溶藻弧菌和哈维氏弧菌具有明显抗菌活性,且多肽F2~F7对副溶血弧菌、溶藻弧菌和哈维氏弧菌的MIC值在0.012~0.200mg/mL范围内。荧光显微镜观察酶解多肽杀菌效果发现多肽杀菌迅速,5min内弧菌细胞几乎全部死亡。利用透射电子显微镜观察正常的和经抗菌肽处理后的溶藻弧菌和哈维氏弧菌细胞的超微结构,结果显示,对照组正常细胞内部结构完整,而经抗菌肽处理过的细胞其细胞壁完整,但因缺乏细胞内容物支持导致局部区域内陷,细胞质膜明显收缩,细胞内物质外流形成许多空泡从而导致细胞死亡。研究结果表明血红蛋白源抗菌肽对泥蚶致病菌弧菌有明显的抗菌活性,其通过破坏细胞内部结构而起到杀菌作用,这些发现为血红蛋白抗菌机制的研究奠定了基础。

关键词：泥蚶酶解多肽反相高效液相色谱抗菌活性超微结构抗菌机理

凡纳滨对虾血蓝蛋白酶解多肽的凝集与抑菌活性

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水生生物学报 2017年第5期41卷 1042-1047页

作者：李长平黄河王帆钟名其陈洁辉章跃陵汕头大学理学院生物学系广东省海洋生物技术重点实验室汕头515063

以凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)为研究对象,通过分子筛层析、Tricine-SDS-PAGE、Westernblotting、凝集实验、抑菌实验和Edman N端测序等方法探索血蓝蛋白酶解多肽的凝集和抑菌活性。结果发现,血蓝蛋白经胰蛋白酶酶解后可产生分子... 详细信息

以凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)为研究对象,通过分子筛层析、Tricine-SDS-PAGE、Westernblotting、凝集实验、抑菌实验和Edman N端测序等方法探索血蓝蛋白酶解多肽的凝集和抑菌活性。结果发现,血蓝蛋白经胰蛋白酶酶解后可产生分子量约为6—70 k D的7条多肽,该酶解混合物对副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus)具有显著的凝集活性,与未酶解的血蓝蛋白相比,其凝集活性可提高4—16倍。在此基础之上,进一步分离纯化该7条多肽,发现多肽-3对副溶血弧菌表现出较强的抑菌活性,且具有较好的浓度依赖性。在浓度为75μg/m L时,其抑菌率为(93.76±1.60)%,与阴性对照组相比,存在极显著性差异(P多肽位于血蓝蛋白N端α-螺旋区域。由此推测,凡纳滨对虾血蓝蛋白在体外经胰蛋白酶酶解后可产生具有凝集、抑菌等免疫活性的多肽,这对研究血蓝蛋白的降解机制及其在先天免疫中的作用具有重要意义。

关键词：凡纳滨对虾血蓝蛋白胰蛋白酶酶解多肽凝集抑菌

酪蛋白酶解多肽-Fe^(2+)的制备及性质研究

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食品工业科技 2004年第8期25卷 53-56页

作者：王稳航沈登莱刘安军王丽霞张宏山天津科技大学食品科学与生物工程学院天津300222 山东省烟台市盐务局烟台264000

探讨了以酪蛋白为原料,通过木瓜蛋白酶水解并经超滤分离酶解多肽的优化工艺,并对酶解多肽螯合氯化亚铁的性质进行了研究,从而为其在食品中作为铁强化剂的应用打下了基础。

关键词：酶解多肽制备性质酪蛋白木瓜蛋白酶氯化亚铁螯合

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响应面法优化沧州小枣协同酶解多肽的研究

食品研究与开发 2017年第6期38卷 86-90页

作者：刘嘉坤焦艳于永军沧州医学高等专科学校河北沧州061000

以沧州小枣蛋白液为原料,水解度和多肽得率为检测值,先进行单因素试验,通过spss相关分析选出最显著的3个因素:加酶量、酶解时间和酶解温度,然后以酶解多肽得率为评价指标用响应面分析法优化酶解工艺,结果表明,最佳酶解条件为加酶量5 000... 详细信息

以沧州小枣蛋白液为原料,水解度和多肽得率为检测值,先进行单因素试验,通过spss相关分析选出最显著的3个因素:加酶量、酶解时间和酶解温度,然后以酶解多肽得率为评价指标用响应面分析法优化酶解工艺,结果表明,最佳酶解条件为加酶量5 000 U/g,酶解温度55℃,酶解时间5 h,在此条件下,小枣的酶解多肽得率达到了55%,与预测值相近。

关键词：沧州小枣响应面酶解多肽酶解工艺协同酶解

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小球藻酶解多肽的制备及抗氧化功能研究

小球藻酶解多肽的制备及抗氧化功能研究

作者：王文强福建师范大学

学位级别：硕士

小球藻(Chlorella)属于一类单细胞的绿藻,是微藻中蛋白质含量最高的种类之一,具有良好的医疗保健功效,是具有重要商业价值的微藻资源。但是,目前尚无相关研究证明小球藻中发挥高生物活性的主要物质由何种组分构成,以及不同的组分具有何... 详细信息

小球藻(Chlorella)属于一类单细胞的绿藻,是微藻中蛋白质含量最高的种类之一,具有良好的医疗保健功效,是具有重要商业价值的微藻资源。但是,目前尚无相关研究证明小球藻中发挥高生物活性的主要物质由何种组分构成,以及不同的组分具有何各自的生物学活性和功能。本文利用本实验室建立的高压均质法并结合纤维素酶与果胶酶酶解细胞壁对小球藻进行破壁,提取小球藻蛋白。通过筛选最适蛋白酶以及利用响应面法优化蛋白酶复合酶解多肽制备工艺,利用超滤膜多级分离技术获得不同分子量区段的小球藻酶解多肽,进而开展体外抗氧化功能实验、细胞实验以及老龄小鼠体内实验3个方面的研究,探究不同分子量区段的小球藻酶解多肽的抗氧化活性。主要研究结果如下:1.为确定获得最佳抗氧化酶解多肽片段的最适蛋白酶和酶解条件,以体外总还原能力为指标,根据不同蛋白酶酶解产物总还原能力的强弱筛选最适蛋白酶,确定经碱性蛋白酶与胰蛋白酶复合酶解小球藻蛋白后的酶解产物总还原能力最高。进一步采用响应面法确立了碱性蛋白酶与胰蛋白酶复合酶解小球藻蛋白的最适参数:pH 8.8、酶解温度60℃、加酶量2.2%、酶解时间30.0 min、底物浓度4.0%、碱性蛋白酶与胰蛋白酶配比为5:1,该条件下测得实际蛋白水解度为71.06%。2.蛋白酶复合酶解后的酶解液经超滤膜多级分离技术,获得分子量为>10 kDa、5-10 kDa、3.5-5 kDa、1-3.5 kDa 和酶解多肽。3.通过体外抗氧化能力与总还原能力的检测,确定1-3.5 kDa的酶解多肽的体外抗氧化能力的效果最好。当1-3.5 kDa的酶解多肽浓度为10 mg/mL时,DPPH自由基清除率为88.53%。1-3.5 kDa的酶解多肽浓度为12.5 mg/mL时,羟自由基清除率为96.81%。通过SPSS软件回归分析得,1-3.5 kDa的酶解多肽对DPPH及羟自由基清除率的半抑制浓度(IC50)分别为2.62 mg/mL和5.74 mg/mL。进一步通过Bel7402人肝癌细胞实验,证实1-3.5 kDa的酶解多肽能够在细胞内发挥抗氧化作用,降低细胞内ROS水平。4.利用老龄小鼠实验检测各分子量区段酶解多肽的体内抗氧化能力,再次确认1-3.5 kDa的酶解多肽在降低脂质过氧化产物丙二醛(MDA)的水平,提高抗氧化酶超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)的活力方面能力最为显著,且呈现出明显的多肽剂量依赖性。1-3.5 kDa区段的酶解多肽组与对照组和其他多肽组相比,小鼠血清中MDA由对照组6.81 nmoL/mL下降到4.68 nmoL/mL。GSH-PX活性由对照组545.74 U/mL上升到950.46 U/mL。SOD活性由对照组173.33 U/mL 上升到 209.28 U/mL。综上所述,碱性蛋白酶与胰蛋白酶复合酶解后的小球藻酶解多肽具有抗氧化活性,特别是分子量为1-3.5 kDa区段的酶解多肽的抗氧化功能最显著。本研究能够为大规模酶解小球藻蛋白获取抗氧化肽和拓展小球藻酶解多肽的更深层开发提供技术和理论依据。

关键词：小球藻酶解多肽抗氧化活性氧多级膜分离

西藏野桃仁酶解多肽的生物活性及其亚铁螯合物的研究

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西藏野桃仁酶解多肽的生物活性及其亚铁螯合物的研究

作者：杨玉蓉中南林业科技大学

学位级别：硕士

桃仁为蔷薇科植物桃或山桃的干燥成熟种子,具有活血祛瘀,润肠通便,止咳平喘的功效。干燥桃仁有较高含量的蛋白质,蛋白质质量分数在25%～30%之间。我国西藏林芝地区的野桃资源非常丰富,但目前桃仁除部分用于中医药外,绝大部分被丢弃,造... 详细信息

桃仁为蔷薇科植物桃或山桃的干燥成熟种子,具有活血祛瘀,润肠通便,止咳平喘的功效。干燥桃仁有较高含量的蛋白质,蛋白质质量分数在25%～30%之间。我国西藏林芝地区的野桃资源非常丰富,但目前桃仁除部分用于中医药外,绝大部分被丢弃,造成蛋白质资源浪费。本研究以西藏野桃仁为原料,探讨了桃仁蛋白酶酶解制备桃仁多肽的最佳工艺、桃仁多肽的抗氧化性活性、对血管紧张素转换酶(ACE)的抑制活性,及其桃仁多肽亚铁离子螯合物的制备和生物活性,以期为桃仁多肽的开发利用提供理论基础。(1)采用响应面法优化酶解桃仁多肽的制备条件和研究了酶解多肽各分子量组分的抗氧化活性。研究得到桃仁蛋白浓度为3.5%、pH 10.4、加酶量4200 U/g、酶解时间4.9 h条件下进行碱性蛋白酶酶解,可获得桃仁蛋白的最高水解度61.12%和多肽得率67.91%。桃仁蛋白及其酶解物的十二烷基磺酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)图表明,酶解后的多肽分子量大部分小于12kDa。DPPH自由基清除能力、ABTS自由基清除能力、亚硝酸根离子清除能力和总抗氧化能力4个体外抗氧化活性测试结果表明不同分子量组分间的抗氧化活性存在显著性差异(P多肽组分对血管紧张素转换酶(ACE)抑制活性结果表明:桃仁蛋白酶解物(PKH)以及各超滤组分均具有ACE抑制活性,且ACE抑制活性高低与桃仁多肽的分子量大小呈负相关。分子量最小组分PKH4(分子量多肽分子量大小和氨基酸组成和含量有关。(3)以桃仁蛋白酶解多肽和氯化亚铁为原料制备桃仁多肽亚铁螯合物,分析了不同分子量多肽组分的螯合率,对小分子量桃仁多肽亚铁螯合物PKH-Ⅲ-Fe(PKH-Ⅲ多肽组分分子量多肽具有更高的螯合率。桃仁多肽与亚铁离子螯合后紫外吸收峰位置、峰值均发生迁移,内源荧光强度明显减弱,傅立叶变换红外光谱分析得亚铁离子与桃仁多肽中的-COO-、N-H、O-H形成配位键;扫描电镜图显示桃仁多肽螯合后微观结构发生明显改变,有光滑球状颗粒生成。在模拟胃部消化过程中,PKH-Ⅲ-Fe的铁离子释放率显著低于硫酸亚铁片和乳酸亚铁片(P多肽以螯合物的状态存在。(4)分别对亚铁离子与不同分子量桃仁多肽和不同植物多肽形成的螯合物,以及亚铁、锌、钙和镁等离子与桃仁多肽形成的螯合物的抑菌活性进行比较,并对螯合物进行结构表征。研究结果表明,小分子量桃仁多肽PKH-Ⅲ组分与亚铁螯合后的抑菌活性强于分子量大的,桃仁多肽与亚铁离子和锌离子螯合后有较强抑菌活性;4种植物多肽与亚铁离子所形成的螯合物间的抑菌活性存在显著性差异(P多肽螯合亚铁和小麦多肽螯合亚铁的抑菌活性最强,对大肠杆菌的最小抑菌浓度(MIC)均为5.0 mg/mL,对金黄色葡萄球菌的MIC分别为2.5和5.0 mg/mL;傅立叶变换红外光谱图分析表明亚铁离子与4种植物多肽分子的-COO-、N-H、C-O形成配位键,多肽与亚铁离子能有效地螯合形成多肽螯合亚铁。

关键词：西藏野桃仁酶解多肽抗氧化血管紧张素转换酶螯合物体外模拟消化结构表征

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元宝枫籽粕酶解多肽的提取及活性研究

元宝枫籽粕酶解多肽的提取及活性研究

作者：毕晓娟东北林业大学

学位级别：硕士

元宝枫籽粕为生产元宝枫籽油过程中产生的副产物,随着元宝枫籽油的大量生产,每年会产生大量的元宝枫籽粕,元宝枫籽粕中含有丰富的蛋白质,如果不予以合理利用,便会引起严重的资源浪费以及环境污染。本研究以元宝枫籽粕为实验材料,选取七... 详细信息

元宝枫籽粕为生产元宝枫籽油过程中产生的副产物,随着元宝枫籽油的大量生产,每年会产生大量的元宝枫籽粕,元宝枫籽粕中含有丰富的蛋白质,如果不予以合理利用,便会引起严重的资源浪费以及环境污染。本研究以元宝枫籽粕为实验材料,选取七种蛋白酶(木瓜蛋白酶、胰蛋白酶、蜗牛酶、复合蛋白酶、中性蛋白酶、胃蛋白酶和碱性蛋白酶)对元宝枫籽粕(去油去糖)进行酶解,制备得到七种酶解多肽,首先以酶解多肽得率高低和体外活性强弱为评价标准,并对其性能进行表征,最终筛选出了综合性能较好的碱性蛋白酶酶解多肽,其次又对其酶解条件进行了优化,最后通过测定表面活性以及建立人血红细胞模型评价碱性蛋白酶酶解多肽的功能和抗氧化活性。1、元宝枫籽粕酶解多肽的制备及体外活性研究。首先元宝枫籽粕经去油去糖处理后,使用七种蛋白酶对元宝枫籽粕进行酶解,结果表明,得率最高的酶解多肽为碱性蛋白酶酶解多肽,同时体外抗氧化和降糖实验表明,七种酶解多肽均具有较强的体外抗氧化活性和降糖效果,其中碱性蛋白酶酶解多肽的综合活性最强。2、元宝枫籽粕酶解多肽的氨基酸组成研究。结果表明碱性蛋白酶酶解多肽相较于其他酶解多肽具有较高的八种必需氨基酸含量(20.3%),远高于国际粮农组织所建议成人所需必需氨基酸的量(10.75%),除了不含有谷氨酰胺(Gln)和天冬酰胺(Asn),元宝枫籽粕碱性蛋白酶酶解多肽含有其他全部十二种非必需氨基酸。3、碱性蛋白酶酶解多肽制备工艺的优化。以单因素实验为基础,根据Box-Behnken中心组合实验设计对碱性蛋白酶酶解多肽工艺条件进行优化。得到碱性蛋白酶酶解多肽的最佳酶解工艺条件为:酶解时间为3.30 h,加酶量为3.0%,酶解温度为55℃,pH值为10。进行3次平行实验,最后实际酶解多肽得率为(40.13±0.15)%,与Box-Behnken中心组合实验设计预测值相差0.1382。4、碱性蛋白酶酶解多肽表面活性的研究。pH对碱性蛋白酶酶解多肽的溶解性比温度对其影响大,等电点处其溶解性较低,同时乳化性和起泡性也较低。5、碱性蛋白酶酶解多肽的细胞抗氧化实验研究。碱性蛋白酶酶解多肽(浓度≤0.4mg·mL)对人血红细胞无明显的毒性。其对AAPH激发造成的红细胞氧化溶血能够产生一定的保护作用。碱性蛋白酶酶解多肽可以明显降低受损红细胞产生的ROS的含量,明显降低受损红细胞内抗氧化酶(CAT、SOD和GSH-Px)的表达水平,抑制脂质过氧化产物MDA的产生,结果说明碱性蛋白酶酶解多肽可以有效降低AAPH诱导红细胞的氧化应激反应,具有较好的细胞抗氧化效果。本研究将为元宝枫籽粕的开发应用提供一定的数据和理论支撑,为元宝枫籽仁的高值化利用奠定了基础,最终实现元宝枫籽粕剩余物的综合利用率,提升资源的利用效率。

关键词：元宝枫籽粕酶解多肽抗氧化氧化应激

油用牡丹（凤丹）籽粕酶解多肽的提取及活性研究

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油用牡丹（凤丹）籽粕酶解多肽的提取及活性研究

作者：乔慧茹东北林业大学

学位级别：硕士

牡丹籽粕是生产牡丹籽油过程中的副产物,随着牡丹籽油的大量生产,每年会产生大量的牡丹籽粕,并且牡丹籽粕中含有丰富的蛋白,不加以利用会造成严重的浪费。本研究以牡丹(凤丹)为研究对象,用6种蛋白酶(木瓜蛋白酶、胰蛋白酶、胃蛋白酶、... 详细信息

牡丹籽粕是生产牡丹籽油过程中的副产物,随着牡丹籽油的大量生产,每年会产生大量的牡丹籽粕,并且牡丹籽粕中含有丰富的蛋白,不加以利用会造成严重的浪费。本研究以牡丹(凤丹)为研究对象,用6种蛋白酶(木瓜蛋白酶、胰蛋白酶、胃蛋白酶、复合蛋白酶、中性蛋白酶和碱性蛋白酶)对牡丹籽粕其进行水解,得到6种酶解多肽,通过抗氧化实验和小鼠体内实验研究酶解多肽的活性。1、牡丹籽粕酶解多肽的制备。首先榨油后的牡丹籽粕经脱油脱糖处理,然后用6种蛋白酶对处理后的牡丹籽粕进行水解,根据得率选取得率较高的复合蛋白酶和碱性蛋白酶,通过单因素和正交实验确定最佳酶解条件,复合蛋白酶的最佳酶解条件为:加酶量24000 U·g-1,提取温度为55℃,提取时间2h,料液比为1:40 g·mL-1,pH为5;碱性蛋白酶的最佳酶解条件为:加酶量36000 U·g-1,提取温度55℃,提取时间2 h,料液比1:40 ***-1,pH 为 11。2、牡丹籽粕酶解多肽成分及氨基酸组成研究。研究表明牡丹籽粕酶解多肽中主要含有蛋白质和少量的糖类;其包含8种必需氨基酸,且必需氨基酸含量十分丰富,可以满足国际标准中儿童的蛋白营养需求,具有很好的营养价值。3、牡丹籽粕酶解多肽表面活性及其乳化稳定性的研究。研究表明碱性蛋白酶酶解多肽的吸油性和乳化性优于复合蛋白酶酶解多肽。选用碱性蛋白酶酶解多肽和牡丹籽油进行乳化,制成乳化液,通过加速氧化法测定其乳化稳定性,结果表明酶解多肽对牡丹籽油起到了较好的保护作用,可以防止油被氧化分解。4、牡丹籽粕酶解多肽的抗氧化与小鼠体内活性研究。研究表明酶解多肽在5种抗氧化实验中均具有较好的抗氧化活性,其中碱性蛋白酶酶解多肽的综合抗氧化能力较强。通过灌胃对蛋白营养小鼠进行蛋白补充的实验表明,高剂量组中牡丹籽粕酶解多肽可以提高小鼠体内的蛋白含量,同时能有效的促进过氧化氢酶(CAT)和超氧化物歧化酶(SOD)的增加,并抑制丙二醛(MDA)的产生。所以牡丹籽粕酶解多肽具有重要的营养价值和开发潜力。

关键词：牡丹籽粕酶解多肽抗氧化生物活性