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假雄牙鲆消化器官中碱性磷酸酶比活性的研究

海洋科学集刊 2001年第1期 157-160页

作者：王宏田徐永立张培军中国科学院海洋研究所

碱性磷酸酶(alkaline phosphatases)是一种内源性酶,几乎存在于所有动物的细胞膜(plasma membrane)中,它在许多代谢活动中,如动物的生长、蛋白质的合成、营养成分的转运、类固醇的生成等方面都发挥着重要的作用(Ram et al.,1985)。因此... 详细信息

碱性磷酸酶(alkaline phosphatases)是一种内源性酶,几乎存在于所有动物的细胞膜(plasma membrane)中,它在许多代谢活动中,如动物的生长、蛋白质的合成、营养成分的转运、类固醇的生成等方面都发挥着重要的作用(Ram et al.,1985)。因此,对于碱性磷酸酶的研究,有利于了解鱼类的消化生理。

关键词：碱性磷酸酶消化器官酶比活性营养成分牙鲆人工诱导中国科学院海洋研究所生物化学酶的活性

重组牛肠激酶的克隆表达、纯化与活性测定方法研究

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重组牛肠激酶的克隆表达、纯化与活性测定方法研究

作者：张弨浙江大学

学位级别：硕士

牛肠激酶是一种丝氨酸蛋白酶,因为具有较强的特异性和较宽的活性范围,而在基因工程中得到广泛应用,对蛋白药物的研发也起着重要作用。本论文构建牛肠激酶轻链大肠杆菌表达菌株后发酵生产,经过多步纯化后得到重组牛肠激酶轻链蛋白,并对... 详细信息

牛肠激酶是一种丝氨酸蛋白酶,因为具有较强的特异性和较宽的活性范围,而在基因工程中得到广泛应用,对蛋白药物的研发也起着重要作用。本论文构建牛肠激酶轻链大肠杆菌表达菌株后发酵生产,经过多步纯化后得到重组牛肠激酶轻链蛋白,并对其酶比活性测定方法进行了研究。构建表达质粒pET39b-BEK,并将其转化大肠杆菌BL21（DE3）中,经筛选鉴定得到阳性工程菌株后,发酵培养并诱导表达。每10 L发酵液能得到约250 g湿菌体,经电泳检测,目的蛋白主要出现在包涵体中。破碎菌体后收集包涵体,取5 g湿包涵体进行复性,并用亲和层析、分子排阻层析和阴离子交换层析等方法纯化蛋白。最终得到约220mg目的蛋白,即折合每升发酵液可得到纯化后的目的蛋白220mg左右。对纯化后的目的蛋白进行检测,蛋白含量约0.92mg/mL,纯度大于95%,酶比活性约为55000U/mg。分别使用两步法和荧光底物法检测纯化产品酶比活性。发现两步法操作繁琐,结果不精确,而荧光底物法操作简单,结果较佳,因此选择荧光底物法作为目的蛋白酶比活性检测方法。优化的荧光底物法反应条件为孵育温度25℃、缓冲液pH值8.0,并对荧光底物法进行了方法学验证,证明此方法稳定可靠。又对比了荧光底物法与以公司自制融合蛋白为底物的电泳法,建立了荧光底物法表示的酶比活性与电泳法表示的酶比活性的联系,使得用荧光底物法检测酶比活性的重组牛肠激酶轻链蛋白可用于融合蛋白的酶切。

关键词：牛肠激酶轻链重组表达纯化酶比活性

2β-(3羟丙氧)-骨化三醇对OS-732人成骨样细胞增殖与分化的影响

同方学位论文库评论

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同方学位论文库

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中华老年医学杂志 2005年第7期24卷 508-510页

作者：杨艳兰柳洁薛延山西省人民医院内分泌科北京积水潭医院创伤骨科研究所

目的观察2β(3羟丙氧)骨化三醇(ED71)对体外培养人成骨样细胞增殖与分化的影响,进一步探讨ED71治疗骨质疏松的机制。方法采用塞唑蓝(MTT)分析法检测ED71对体外培养OS732人成骨样细胞增殖作用与效价。采用培养细胞匀浆测单位蛋白碱性磷... 详细信息

目的观察2β(3羟丙氧)骨化三醇(ED71)对体外培养人成骨样细胞增殖与分化的影响,进一步探讨ED71治疗骨质疏松的机制。方法采用塞唑蓝(MTT)分析法检测ED71对体外培养OS732人成骨样细胞增殖作用与效价。采用培养细胞匀浆测单位蛋白碱性磷酸酶活性,培养基中骨钙素含量分析及原位杂交方法检测ED71对OS732人成骨样细胞分化的影响。结果培养第4天,10-7mol/LED71显著抑制成骨样细胞增殖(P酶比活性无明显变化。结论ED71抑制成骨样细胞增殖高剂量作用显著,促进成骨样细胞分化较低剂量显著。

关键词： OS-732 人成骨样细胞增殖与分化骨化三醇成骨样细胞增殖 mol/L 转化生长因子-β 碱性磷酸酶活性细胞增殖作用原位杂交方法氧体外培养细胞分化 TGF-β 骨钙素骨质疏松培养细胞 0.05 酶比活性培养基分析法

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日本血吸虫血红素降解酶系的研究(英文)

中国寄生虫病防治杂志 2003年第5期16卷 263-265页

作者：刘文琪李雍龙 Andreas Ruppel 华中科技大学同济医学院病原生物系湖北武汉430030 海德堡大学热带医学研究所德国海德堡69120

目的　研究日本血吸虫成虫中血红素加氧酶和胆绿素还原酶的活性以及酶的生物学特性。　方法　从日本血吸虫成虫的匀浆组织中抽提微粒体蛋白组分并制备匀浆上清 ,分别用特异性底物检测微粒体和匀浆上清中血红素加氧酶 (HO)和胆绿素还原酶... 详细信息

目的　研究日本血吸虫成虫中血红素加氧酶和胆绿素还原酶的活性以及酶的生物学特性。　方法　从日本血吸虫成虫的匀浆组织中抽提微粒体蛋白组分并制备匀浆上清 ,分别用特异性底物检测微粒体和匀浆上清中血红素加氧酶 (HO)和胆绿素还原酶 (BR)的活性 ,并研究这两种酶活性的时间依赖性和 pH值依赖性。　结果　在日本血吸虫成虫的微粒体和匀浆上清中分别检测到HO和BR ,其酶的比活性分别为 5 6.7nmolbilirubin/ (mg·min)和 43 .4nmolbilirubin/ (mg·min)。在这两种酶促反应中 ,10min前酶促反应速率呈线形上升 ,15min后进入平台期 ,反应趋于饱和。成虫匀浆抽提物体外降解血红素的反应对 pH值有依赖性 ,HO和BR反应的最佳 pH环境均为pH 8.7。　结论　日本血吸虫成虫具有完整的血红素降解酶系统。

关键词：血吸虫日本血红素加氧酶胆绿素还原酶酶比活性

压电电化学研究葡萄糖氧化酶和超氧化物歧化酶生物传感器

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压电电化学研究葡萄糖氧化酶和超氧化物歧化酶生物传感器

作者：陈昕湖南师范大学

学位级别：硕士

由电化学方法与压电传感技术联用发展起来的压电电化学,可在电化学研究现场动态监测电极表面低至纳克级(原子及分子单层或亚单层)的质量及溶液粘、密度改变等信息,具有实时同步提供电化学、质量等多维信息的能力,已成为目前研究液/固界... 详细信息

由电化学方法与压电传感技术联用发展起来的压电电化学,可在电化学研究现场动态监测电极表面低至纳克级(原子及分子单层或亚单层)的质量及溶液粘、密度改变等信息,具有实时同步提供电化学、质量等多维信息的能力,已成为目前研究液/固界面最有成效的工具之一。本学位论文采用压电电化学研究了葡萄糖氧化酶(GOD)、超氧化物歧化酶(SOD)生物传感器中的三个体系,主要内容摘要如下: 1简要综述了酶生物传感器的发展、压电电化学的基本理论及其在酶生物传感器中的应用。 2采用EQCM技术监测了裸金电极、镀金和碳纳米管(CNTs)修饰金电极上葡萄糖氧化酶的吸附过程;通过EQCM测量吸附固定的GOD质量,并实时检测酶促反应产物HO的氧化电量,求算了各表面上吸附态GOD的比活性(ESA);考察了7种不同电极表面吸附态GOD所产生的催化氧化电流,采用SigmaPlotScientific Graphing Software Version 2.0软件非线性拟合,求得了各电极表面酶促反应表观米氏常数。 3采用去甲肾上腺素(NA)氧化过程中生成的聚合膜(PFNO)作为固定葡萄糖氧化酶的基质,利用普鲁士蓝(PB)和碳纳米管进一步提高响应性能,研制了一种在还原电位进行检测的新型葡萄糖传感器。以EQCIA技术实时监测了PB沉积及PFNO聚合包埋GOD过程;优化了相关实验条件;考察了电极性能。实验结果表明由此构建的葡萄糖传感器性能优良,并且解决了纳米粒子引入时带来的干扰问题,有望广泛用于纳米生物传感器的制备。 4以半胱胺(Cy)为电子促进剂,研制了超氧化物歧化酶(SOD)生物传感器,实现电极与SOD之间的直接电子转移。系统地研究了该传感器的电化学行为,探讨了SOD催化O歧化反应机理;优化了实验条件,考察了电极性能,并分别研究了该酶电极在氧化和还原电位下对超氧阴离子浓度的响应。 5采用EQCM技术实时监测了SOD在CNTs/Au电极上的吸附过程;研究了SOD/CNT/Au电极的电化学行为;定量估算了吸附态SOD的电活性比例;同时考察了SOD固定在CNTs/Au电极后生物电催化活性的保持情况及SOD/CNTs/Au电极对O的响应。

关键词：电化学石英晶体阻抗葡萄糖氧化酶酶比活性碳纳米管电镀金去甲肾上腺素普鲁士蓝电沉积超氧化物歧化酶半胱胺超氧阴离子直接电化学