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碳青霉烯类抗菌药物耐药的大肠埃希菌KPC酶检测与分析

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中华微生物学和免疫学杂志 2010年第7期30卷 685-686页

作者：姚慧琳陆士海刘培明安徽淮北矿业集团总医院检验科 235000

大肠埃希菌是医院内感染和社区获得性感染的重要病原菌,其耐药性十分严重.我们在我院分离的一株碳青霉烯类抗菌药物耐药的大肠埃希菌E902774的耐药机制研究中存在A类碳青霉烯酶KPC（肺炎克雷伯菌碳青霉烯酶）-2酶.

关键词：抗菌药物耐药大肠埃希菌碳青霉烯类酶检测社区获得性感染碳青霉烯酶肺炎克雷伯菌医院内感染

传染性非典型肺炎限制性内切酶检测方法的研究

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中华检验医学杂志 2006年第1期29卷 72-73页

作者：孙非刘立侠金扩世许守民金洪涛金宁一靳玉琴刘志屹张淑芹黄伟江禹万忠海赵文彬邹啸环吉林大学白求恩医学部再生医学科学研究所病毒研究室长春130021 东北师范大学生命科学院解放军军需大学基因工程重点实验室

目的建立一种对传染性非典型肺炎,又称严重急性呼吸综合征(SARS)准确诊断的新方法。方法利用GCG软件将已公布的SARS病毒变异品系与人类基因组、人类易感病原体进行比对分析。结果筛选出了用于检测的ScDNA核苷酸片段,并在该片段中确定特... 详细信息

目的建立一种对传染性非典型肺炎,又称严重急性呼吸综合征(SARS)准确诊断的新方法。方法利用GCG软件将已公布的SARS病毒变异品系与人类基因组、人类易感病原体进行比对分析。结果筛选出了用于检测的ScDNA核苷酸片段,并在该片段中确定特异性的酶切位点,使检测方法的准确性得以保证。结论与传统检测方法比较,限制性内切酶分析法完全克服了检测中非特异性结果的产生,使检测结果准确可靠。

关键词：非典型肺炎诊断限制性内切酶分析法传染性非典型肺炎酶检测严重急性呼吸综合征(SARS) 人类基因组 SARS病毒非特异性检测结果

血清与关节滑液葡萄糖-6-磷酸异构酶检测在类风湿关节炎中意义的研究

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中华风湿病学杂志 2010年第10期14卷 719-720页

作者：王亚强张永乐赵耀亭河南大学淮河医院检验科开封475000 河南大学淮河医院骨科开封475000

葡萄糖-6-磷酸异构酶（glucose-6-phosphate isomerase，GPI）是一种多功能的蛋白分子，存在于各种细胞胞质中，参与糖酵解和糖异生，也作为一种细胞因子或生长因子分泌于细胞外，促进细胞增殖和迁移。近来GPI与类风湿关节炎（rheumatoi... 详细信息

葡萄糖-6-磷酸异构酶（glucose-6-phosphate isomerase，GPI）是一种多功能的蛋白分子，存在于各种细胞胞质中，参与糖酵解和糖异生，也作为一种细胞因子或生长因子分泌于细胞外，促进细胞增殖和迁移。近来GPI与类风湿关节炎（rheumatoid arthritis，RA）的关系成为研究热点，但GPI在RA关节滑液中的检测及RA患者血清与关节滑液中的GPI水平关系鲜见报道。

关键词：葡萄糖-6-磷酸异构酶类风湿关节炎关节滑液酶检测血清 RA患者 GPI 蛋白分子

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超分子串联酶检测的研究

超分子串联酶检测的研究

作者：任思颖中国矿业大学

学位级别：硕士

酶是一类广泛存在于自然界和生物体内的生物催化剂,在细胞的生命活动中承担着重要作用。酶的检测在疾病诊断、药物开发和工业生产中具有重要的意义。而传统的酶检测方法操作复杂、灵敏度低,且由于仪器和技术的限制其成本较高,难以满足... 详细信息

酶是一类广泛存在于自然界和生物体内的生物催化剂,在细胞的生命活动中承担着重要作用。酶的检测在疾病诊断、药物开发和工业生产中具有重要的意义。而传统的酶检测方法操作复杂、灵敏度低,且由于仪器和技术的限制其成本较高,难以满足目前日益增长的高通量检测需求。目前,一种新兴的超分子串联检测策略(Supramolecular Tandem Assay,STA)为酶检测提供了新的方法,该方法无需共价标记、简单快速、灵敏度高且成本低廉,具有广阔的应用潜力。本文基于超分子大环主体和荧光指示剂构建STA体系,实现了对三种酶的检测和抑制剂评估。首先,针对与高胱氨酸尿症和高甲硫氨酸血症相关的甲硫氨酸脱羧酶(Methionine Decarboxylase,MetDC),通过荧光滴定实验分别对七种大环主体与其荧光指示剂、L-甲硫氨酸和3-甲硫丙胺的结合常数进行测定,经过筛选,构建了以L-甲硫氨酸为底物,基于葫芦[7]脲(CB7)和荧光指示剂吖啶橙(AO)的STA体系。通过核磁(NMR)和计算模拟阐释CB7与3-MTP的结合作用力为氢键、静电相互作用和疏水效应。基于构建的体系实现了对MetDC活性的连续实时检测和动力学参数的测定,研究证明其底物特异性较强,羟胺具有较低的半抑制浓度(IC50=38±4.4 μM),抑制作用较好,甲硫氨酸甲酯对其抑制率较高。其次,针对与帕金森病等多种神经退行性疾病相关的多巴脱羧酶(DOPA Decarboxylase,DDC),以L-多巴为底物,基于CB7和AO构建STA体系,实现了对DDC活性的实时连续检测。研究得到DDC的动力学参数,其底物特异性较强,该方法具有低的检测限(LOD=0.659 μg/mL),潜在抑制剂5-溴水杨酸和5-碘水杨酸的抑制率较高,羟胺半抑制浓度较低(IC50=41.0±5.9 μM),具有较好的抑制作用。最后,针对重要的工业用酶天冬氨酸酶(Aspartase,AspA),以L-天冬氨酸为底物,基于季铵盐杯[4]芳烃衍生物和磺化花青5构建STA体系,实现了对AspA的快速检测,与紫外—可见分光光度法(UV-Vis)检测的结果一致。测定了多种抑制剂对AspA的抑制效果,其中N-乙基马来酰亚胺的抑制效果明显,与UV-Vis法对比,该方法具有更强的抗干扰性。该论文有图67幅,表3个,参考文献178篇。

关键词：超分子串联检测荧光传感酶检测抑制剂筛选

基于新型水溶性共轭聚合物的酶检测及逻辑门构建研究

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基于新型水溶性共轭聚合物的酶检测及逻辑门构建研究

作者：刘越陕西师范大学

学位级别：硕士

水溶性共轭聚合物由于其独特的共轭结构使其具有极强的光捕获能力以及荧光信号放大作用,在生物传感、细胞成像、药物筛选与输送、疾病诊断与治疗等方面表现出了很好的应用前景。本文设计合成了新型含低聚（氧乙烯）侧链的中性聚（对-苯... 详细信息

水溶性共轭聚合物由于其独特的共轭结构使其具有极强的光捕获能力以及荧光信号放大作用,在生物传感、细胞成像、药物筛选与输送、疾病诊断与治疗等方面表现出了很好的应用前景。本文设计合成了新型含低聚（氧乙烯）侧链的中性聚（对-苯撑）（PPP-OR10）和阳离子共轭聚芴PFPB,研究了基于共轭聚合物的生物传感新机理并建立了传感新方法,分别用于pH响应和酶活性的检测以及酶调控的可逆逻辑门的构建,具体工作如下所述：一、基于水溶性共轭聚合物荧光发射光谱红移机制的pH响应及酶活性的检测发展了一种新的传感机理、设计了新的传感体系用于pH响应及酶催化活性的检测,该机理是基于硝基苯衍生物对水溶性共轭聚合物PPP-OR10的内滤效应（Inner Filter Effect, IFE）导致PPP-OR10的荧光发射光谱红移（FRES）。首先设计并通过Suzuki偶联反应合成了含有低聚（氧乙烯）侧链的中性聚（对-苯撑）（PPP-OR10）,该聚合物与其他化合物之间不产生静电相互作用。硝基苯衍生物由于其酸式或碱式型体采取不同的电子跃迁形式而表现出不同的光吸收特性,其吸收光谱会随着pH的增大而红移。当环境中的pH高于硝基苯衍生物的pKa时,硝基苯衍生物在400nnm左右有强吸收,此时与PPP-OR10的最大发射波长很接近,在IFE的作用下,PPP-OR10/硝基苯衍生物体系的最大发射波长会随着pH值的增加而发生明显的红移。利用该体系对pH敏感的特性,进而我们设计了一种基于对硝基苯胺的内滤效应新方法检测α-糜蛋白酶（ChT）, ChT水解其底物BTNA（N-benzoy1-L-tyrosine-p-nitroaniline）后的产物即为对硝基苯胺,而对硝基苯胺的吸收光谱与PPP-OR10的发射光谱有较好的重叠,因此,随着BTNA的水解,释放出的对硝基苯胺逐渐增加,通过IFE使PPP-ORIO的最大发射波长逐渐红移。另外,此方法检测ChT的检出限为0.1μM,低于传统的紫外-可见吸收光谱法。进一步研究表明,我们设计的体系其pH响应与酶活性检测在50mM PBS及10%的血清中均可实现,克服了离子强度等复杂环境对测定的不利影响,使得此方法有望在更加复杂的条件下实现对目标物的检测。该研究进一步拓宽了共轭聚合物在传感领域中的应用。二、基于共轭聚合物/DNA自组装的由酶调节的可逆逻辑门构建首先利用Suzuki偶联反应合成了一种新型的阳离子共轭聚芴PFPB,建立了PFPB/DNA自组装体系,进而构建了核酸酶调控的可逆逻辑门体系。带负电荷的DNA末端分别被荧光素（FAM）和荧光染料TAMRA标记,与带正电荷的PFPB通过静电相互作用形成复合物,一旦激发PFPB,共轭聚合物与荧光染料间可发生从PFPB→FAM.再从FAM→TAMRA的多重荧光共振能量转移（FRET）。由于不同染料标记的DNA序列可以被特异性核酸酶水解,形成携带荧光染料的DNA短链,从而破坏多重FRET,导致输出信号减弱。在此基础上,通过T4DNA连接酶将水解后的DNA片段连接起来,使FRET恢复,同时输出信号明显增强。因此将T4DNA连接酶、核酸内切酶（HaeⅢ、PvuⅡ）作为输入信号,不同染料最大发射波长处的荧光强度作为输出信号,我们构建了NOT, YES和NOR等逻辑门。更为重要的是,YES逻辑门与NOT逻辑门可以通过HaeⅢ和T4连接酶来回切换;类似地,YES逻辑门与NOR逻辑门也可以来回切换。因此,我们以逻辑门的方式实现了对单个酶以及多种酶的高灵敏、可循环重复检测,为构建可重复利用的生物传感体系提供了新思路。

关键词：共轭聚合物 pH响应酶检测逻辑门可循环

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阴沟肠杆菌Ampc酶检测及耐药性分析

江西医学检验 2005年第1期23卷 39-40,18页

作者：孟曙芳艾芙琪孔艺王琴浙江省诸暨市人民医院 311800 上海复旦大学附属华山医院 200040

目的了解阴沟肠杆菌的感染部位、AmpC酶的检测情况及对临床常用抗生素的耐药特征。方法用VITEK-AMS60鉴定系统进行细菌鉴定,K-B法测定药敏结果,通过酶提取物三维试验检测产AmpC酶菌株。结果阴沟肠杆菌感染部位广泛,尤以呼吸道感染为主,... 详细信息

目的了解阴沟肠杆菌的感染部位、AmpC酶的检测情况及对临床常用抗生素的耐药特征。方法用VITEK-AMS60鉴定系统进行细菌鉴定,K-B法测定药敏结果,通过酶提取物三维试验检测产AmpC酶菌株。结果阴沟肠杆菌感染部位广泛,尤以呼吸道感染为主,对常用抗生素耐药现象严重,表现为高耐药和多重耐药,但第四代头孢菌素耐药率较低,另外碳青霉烯类抗生素亚胺培南耐药率极低,仅为0.8%。58株阴沟肠杆菌中检出产AmpC酶21株,检出率为36.2%。结论阿米卡星、环丙沙星可作为阴沟肠杆菌感染的经验治疗的首选药物,第四代头孢菌素可作为产AmpC酶菌株感染的治疗,亚胺培南可作为二线用药治疗其混合感染及其高耐药菌株的感染。临床实验室对阴沟肠杆菌进行药敏分析、检测AmpC酶很有必要。

关键词： Ampc酶阴沟肠杆菌治疗第四代头孢菌素酶检测耐药性分析亚胺培南结论现象特征

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浅谈血清丙氨酸氨基转移酶检测的质量保证

中国预防医学杂志 2007年第5期8卷 562-563页

作者：杨文萍台州市中心血站浙江318000

血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)检验是献血者健康体检筛查项目之一,检测血清 ALT 有助于鉴别输血相关肝炎病毒携带者,同时可以在一定程度上弥补某些肝炎病毒标志物未被检测及感染'窗口期'的缺陷,有助于预防输血相关肝炎的传播.目前,我国因血... 详细信息

血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)检验是献血者健康体检筛查项目之一,检测血清 ALT 有助于鉴别输血相关肝炎病毒携带者,同时可以在一定程度上弥补某些肝炎病毒标志物未被检测及感染'窗口期'的缺陷,有助于预防输血相关肝炎的传播.目前,我国因血清 ALT 检验不合格淘汰者献血者比例非常高,造成血源及血液的大量报废,对我国无偿献血工作的开展有极大的负面影响.笔者就环境、仪器、试剂、标本、方法学上参数的设置等几方面来谈谈 ALT 检测的质量保证.

关键词：丙氨酸氨基转移酶(ALT) 血清ALT 质量保证酶检测肝炎病毒携带者肝炎病毒标志物无偿献血工作 “窗口期”

中性粒细胞碱性磷酸酶检测在血液病诊断中的应用

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中国基层医药 2010年第7期17卷 960-961页

作者：廖亚仙衢化医院检验科浙江省衢州324004

为研究中性粒细胞碱性磷酸酶（NAP）活性对各血液病的诊断、鉴别诊断及疗效观察中的价值，本研究对219例血液系统疾病患者NAP活性检测结果，进行对比分析，以探讨其在血液系统疾病诊断和鉴别诊断中的应用意义。

关键词：中性粒细胞碱性磷酸酶血液病诊断酶检测血液系统疾病应用鉴别诊断疗效观察检测结果

多重耐药铜绿假单胞菌ESBLs和AmpC酶检测与分析

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江西医学检验 2007年第2期25卷 187-188页

作者：项领沈翠芬浙江省温州第二医院 325000 湖州中心医院

铜绿假单胞菌广泛分布于周围环境及正常人的皮肤、呼吸道和消化道等部位Ⅲ，是医院感染最常见的条件致病菌之一。近年来，由于β-内酰胺类抗生素、免疫抑制剂、肿瘤化疗等药物的广泛使用以及各种侵入性操作的增多．该菌引起的医院感染... 详细信息

铜绿假单胞菌广泛分布于周围环境及正常人的皮肤、呼吸道和消化道等部位Ⅲ，是医院感染最常见的条件致病菌之一。近年来，由于β-内酰胺类抗生素、免疫抑制剂、肿瘤化疗等药物的广泛使用以及各种侵入性操作的增多．该菌引起的医院感染日益突出闭，其耐药性日趋严重，给临床治疗带来极大困难。本研究对我院2005年1月。2006年12月各种临床标本中筛选出的60株多重耐药铜绿假单胞菌的ESBLs和AmpC酶进行检测与分析．以探讨其耐药机制．为临床治疗及控制医院感染提供依据。

关键词：多重耐药铜绿假单胞菌 ESBLs AmpC酶酶检测 β-内酰胺类抗生素控制医院感染临床治疗条件致病菌