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抗绿脓杆菌外毒素A酶标抗体的制备及其应用

中国预防兽医学报 2005年第1期27卷 67-70页

作者：高玲美牛钟相李雅林丁淑燕山东农业大学动物科技学院山东泰安271018

从病死羊体内分离到绿脓杆菌并提取出外毒素A(PEA) ,再以此毒素作为抗原加油佐剂制成乳化抗原免疫家兔 ,获得高免血清并提取免疫球蛋白G(IgG) ;用过碘酸钠法将过氧化物酶标记抗PEA抗体 (IgG) ,制成酶标抗体 ,经检验 ,酶标抗体结合物中的... 详细信息

从病死羊体内分离到绿脓杆菌并提取出外毒素A(PEA) ,再以此毒素作为抗原加油佐剂制成乳化抗原免疫家兔 ,获得高免血清并提取免疫球蛋白G(IgG) ;用过碘酸钠法将过氧化物酶标记抗PEA抗体 (IgG) ,制成酶标抗体 ,经检验 ,酶标抗体结合物中的HRP浓度和Ab(IgG)浓度分别是 0 0 6 0 8mg/mL和 0 336mg/mL ;HRP/Ab(IgG)克分子比值为1 72 4 % ;酶 (HRP)结合率是 11 15 %。利用该酶标抗体以ELISA夹心法对羊体内抗PEA抗体含量进行了检测 ,结果证明 ,用酶标抗体ELISA法比用平板凝集实验法检测的抗体效价平均高出二个滴度 ,表明制备的PEA酶标抗体具有灵敏度高。

关键词：绿脓杆菌外毒素A 酶标抗体

禽流感(H9N2亚型)酶标抗体的制备及双抗夹心Dot-ELISA检测方法的建立

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河南农业科学 2006年第10期35卷 101-103,111页

作者：张春杰王大军吴庭才李银聚余祖华程相朝河南科技大学动物科技学院河南洛阳471003

采用AIV灭活油乳苗(H9N2)对AIV非免疫鸡进行接种并获取高免血清,取高免血清采用饱和硫酸铵沉淀法,经过Sephadex G25层析柱提纯后可获得纯度很好的IgG。将IgG应用过碘酸钠法标记辣根过氧化酶(HRP),制备禽流感酶标抗体(IgG-HRP),利用所提... 详细信息

采用AIV灭活油乳苗(H9N2)对AIV非免疫鸡进行接种并获取高免血清,取高免血清采用饱和硫酸铵沉淀法,经过Sephadex G25层析柱提纯后可获得纯度很好的IgG。将IgG应用过碘酸钠法标记辣根过氧化酶(HRP),制备禽流感酶标抗体(IgG-HRP),利用所提取的AI-IgG和所制备的禽流感酶标抗体按照双抗夹心Dot-ELISA试验操作步骤,采用方阵法分别摸索包被抗原及酶标抗体的最佳浓度,以及各步反应时间等最佳反应条件,以建立一种优化的AIV双抗夹心Dot-ELISA检测法。结果表明,所制备的AI高免血清HI效价为10log2;AI酶标抗体克分子比值为2.45;优化的Dot-ELISA各条件为:包被AI-IgG最佳稀释倍数为1∶50;最佳封闭剂为1%牛血清白蛋白;AI酶标抗体最佳稀释倍数为1∶100;待检抗原与2种抗体的感作时间均为0.5h(37℃)。优化后的检测方法可在2.5h内诊断结果,制备好的包被膜在4℃下保存2个月不影响其效果。而且敏感性提高了3倍,与新城疫病毒液、传染性支气管炎及减蛋综合症病毒液无交叉反应。

关键词：禽流感酶标抗体双抗夹心Dot—ELISA

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抗鸡传染性腺胃炎酶标抗体的制备和应用

中国家禽 2005年第18期27卷 11-13页

作者：沈美艳张广斌李舫牛钟相朱瑞良山东畜牧兽医职业学院山东潍坊261061 山东农业大学山东泰安271018

在前期从患病鸡腺胃内分离到呼肠孤病毒的基础上,以该病毒为免疫原对兔进行免疫制备高免血清,分离纯化IgG,进行辣根过氧化物酶(HRP)标记,并用ELISA双抗体夹心法对山东省青岛、枣庄、泰安等地区采集的传染性腺胃炎的腺胃样品进行检测,结... 详细信息

在前期从患病鸡腺胃内分离到呼肠孤病毒的基础上,以该病毒为免疫原对兔进行免疫制备高免血清,分离纯化IgG,进行辣根过氧化物酶(HRP)标记,并用ELISA双抗体夹心法对山东省青岛、枣庄、泰安等地区采集的传染性腺胃炎的腺胃样品进行检测,结果表明制备的抗鸡传染性腺胃炎呼肠孤病毒的酶标抗体检测传染性腺胃炎特异性强、灵敏度高、较简便。

关键词：呼肠孤病毒酶标抗体 ELISA 传染性腺胃炎制备病鸡辣根过氧化物酶应用双抗体夹心法分离纯化

兔抗O型口蹄疫VLPs酶标抗体的制备及初步应用

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动物医学进展 2019年第1期40卷 20-24页

作者：贺佳慧白满元郭慧琛孙世琪张小丽马小军甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州730070 中国农业科学院兰州兽医研究所/家畜疫病病原生物学国家重点实验室甘肃兰州730046

为制备兔抗O型口蹄疫病毒样颗粒(VLPs)的酶标抗体,进一步建立O型口蹄疫病毒的ELISA检测方法,通过原核表达、体外纯化和组装O型口蹄疫VLPs,免疫家兔制备兔抗O型口蹄疫VLPs高免血清,并采用亲和层析法纯化IgG,改良过碘酸钠法制备兔抗O型口... 详细信息

为制备兔抗O型口蹄疫病毒样颗粒(VLPs)的酶标抗体,进一步建立O型口蹄疫病毒的ELISA检测方法,通过原核表达、体外纯化和组装O型口蹄疫VLPs,免疫家兔制备兔抗O型口蹄疫VLPs高免血清,并采用亲和层析法纯化IgG,改良过碘酸钠法制备兔抗O型口蹄疫VLPs的酶标抗体(rabbit anti-type O foot-and-mouth disease IgG-HRP)。结果显示,兔抗O型口蹄疫VLPs高免血清效价达1∶4 096,纯化后的IgG纯度达90%,效价达1∶512 000。表明获得了高纯度的兔抗O型口蹄疫VLP的酶标抗体,可用于O型口蹄疫的ELISA检测。

关键词：口蹄疫病毒病毒样颗粒 IgG纯化酶标抗体

马传贫ELSA诊断试剂标准化、商品化的研究——Ⅰ.马传贫ELISA抗原、酶标抗体冻干试剂的研究

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中国畜禽传染病 1991年第1期13卷 19-22页

作者：戴玉坤中国农科院哈尔滨兽医研究所

马传贫ELISA抗原冻干后,其活性和特异性没有改变,而且稳定性明显优于湿抗原.酶标抗体冻干后,也获得了与上述同样的效果.

关键词：马传贫 ELISA 诊断剂酶标抗体

酶标抗体的制备及细胞内病毒和立克次体抗原的检出

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中国人民解放军军事医学科学院院刊 1979年第3期 389-395页

作者：陈德蕙洪松芳余澄之

用三种不同方法提取的抗体IgG与辣根过氧化物酶按戊二醛一步法和二步法制备酶标抗体。酶标抗体经免疫化学和免疫组织化学鉴定,初步认为可供光学显微镜检出细胞内病毒和立克次体抗原应用。乙型脑炎病毒感染小白鼠脑石蜡切片间接法酶标抗... 详细信息

用三种不同方法提取的抗体IgG与辣根过氧化物酶按戊二醛一步法和二步法制备酶标抗体。酶标抗体经免疫化学和免疫组织化学鉴定,初步认为可供光学显微镜检出细胞内病毒和立克次体抗原应用。乙型脑炎病毒感染小白鼠脑石蜡切片间接法酶标抗体染色的结果表明:脑干神经核和皮层海马回等部位的感染神经元的胞体、轴突及树突内均可检出棕黄色颗粒样抗原-抗体反应沉淀物。斑点热立克次体自然感染蜱血淋巴涂片的直接法和间接法酶标抗体染色均显示阳性反应。

关键词：酶标抗体辣根过氧化物酶标记抗体立克次体立克次氏体检出酶标记物 IgG 抗原细胞内

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荧光或酶标抗体技术在肾脏疾病研究中的应用

黑龙江畜牧兽医 1997年第7期 40-41页

作者：高洪马吉飞唐兆新陈万芳南京农业大学动物医学院

荧光或酶标抗体技术在肾脏疾病研究中的应用高洪马吉飞唐兆新陈万芳（南京农业大学动物医学院·２１００９５）６０年代初期，人们已认识到肾小球肾炎为一种免疫性疾病，是溶血性链球菌、葡萄球菌等病原体浸入人体后引起的变态反应性疾... 详细信息

荧光或酶标抗体技术在肾脏疾病研究中的应用高洪马吉飞唐兆新陈万芳（南京农业大学动物医学院·２１００９５）６０年代初期，人们已认识到肾小球肾炎为一种免疫性疾病，是溶血性链球菌、葡萄球菌等病原体浸入人体后引起的变态反应性疾病。１９６８年Ｄｉｘｏｎ根据荧光显...

关键词：家畜肾脏疾病酶标抗体荧光抗体应用

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兔抗金黄地鼠酶标抗体的制备及应用

中国实验动物学报 2012年第1期20卷 84-87,I0004页

作者：刘先菊林树柱杨帆佟巍刘云波中国医学科学院实验动物研究所卫生部实验动物检测中心北京100021

目的纯化金黄地鼠血清IgG,制备兔抗金黄地鼠酶标抗体(IgG-HRP),开展金黄地鼠仙台病毒的初步检测。方法采用亲和层析纯化法纯化金黄地鼠IgG,用SDS-PAGE电泳测定IgG纯度并制备兔抗金黄地鼠IgG抗体(second antibody,Ab2);用免疫双扩散法检... 详细信息

目的纯化金黄地鼠血清IgG,制备兔抗金黄地鼠酶标抗体(IgG-HRP),开展金黄地鼠仙台病毒的初步检测。方法采用亲和层析纯化法纯化金黄地鼠IgG,用SDS-PAGE电泳测定IgG纯度并制备兔抗金黄地鼠IgG抗体(second antibody,Ab2);用免疫双扩散法检测抗血清效价后,再用亲和层析纯化抗血清IgG(Ab2);采用改良过碘酸钠标记法制备兔抗金黄地鼠酶标抗体(rabbit anti-hamster IgG-HRP);用直接ELISA和Western-blot法对兔抗金黄地鼠IgG酶标抗体进行工作浓度测定;应用金黄地鼠酶标抗体对金黄地鼠仙台病毒进行酶免检测(IEA)。结果金黄地鼠血清IgG纯度达95%;兔抗金黄地鼠IgG抗体(Ab2)免疫双扩散效价为1:64;兔抗金黄地鼠IgG-HRP经直接ELISA和Western-Blot测定工作浓度分别为1∶5000和1∶2000;酶免(IEA)效价为1∶2000。结论高效快速纯化了金黄地鼠IgG,制备了金黄地鼠IgG-HRP,为金黄地鼠病原微生物的血清学检测提供了条件。

关键词：金黄地鼠 IgG纯化酶标抗体

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酶标抗体组化法对猪瘟强毒接种猪的试验诊断

黑龙江畜牧兽医 1981年第5期 1-6页

作者：肖甫星章星华刘粹春阎秀娟黑龙江省兽医卫生防疫站黑龙江省兽药一厂

酶标记抗体法是迅速发展的医学领域中的一项崭新技术,它已日益为人们所重视,在兽医界它也不断地被研究应用。当前,就诊断方法比较匮乏的猪瘟而言,扩充特异性诊断方法乃是一项重要课题,是控制与根除该病的必不可少的监测手段之一。因此,... 详细信息

酶标记抗体法是迅速发展的医学领域中的一项崭新技术,它已日益为人们所重视,在兽医界它也不断地被研究应用。当前,就诊断方法比较匮乏的猪瘟而言,扩充特异性诊断方法乃是一项重要课题,是控制与根除该病的必不可少的监测手段之一。因此,我们两个单位于1980年初开始协作试用酶标记抗体法进行猪瘟诊断的研究,现将其中的组织化学法的试验情况做以简要报告。

关键词：酶标抗体强毒阳性反应 DAB 猪瘟猪霍乱病毒病