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针式滤器固相微萃取-酶抑制-数字图像比色法测定毒死蜱残留

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农业工程学报 2023年第4期39卷 267-272页

作者：郑晓娇张欣悦马祯白冰王晓闻荆旭山西农业大学食品科学与工程学院晋中030801 临汾市公安司法鉴定中心临汾041000

为解决食品中毒死蜱残留检测过程中步骤繁琐,灵敏度低的问题,采用高富集因子的针式滤器固相微萃取结合高灵敏度的酶抑制-数字图像比色法对毒死蜱进行快速检测。该研究以石墨烯纳米片作为固相吸附剂装入针式滤器,随后通过注射器重复抽打... 详细信息

为解决食品中毒死蜱残留检测过程中步骤繁琐,灵敏度低的问题,采用高富集因子的针式滤器固相微萃取结合高灵敏度的酶抑制-数字图像比色法对毒死蜱进行快速检测。该研究以石墨烯纳米片作为固相吸附剂装入针式滤器,随后通过注射器重复抽打针式滤器的方法实现样品中毒死蜱的富集。酪氨酸酶能够将邻氨基苯酚和氯化铁体系氧化为黄色,毒死蜱会抑制酪氨酸酶的活性,从而会间接影响邻氨基苯酚和氯化铁体系的显色,通过数字图像比色法实现毒死蜱的定量分析。结果表明:毒死蜱在0.005~0.1 mg/L范围内线性良好,R^(2)>0.99。在矿泉水、茶水和果汁中的测定下限为0.005 mg/L。样品加标后的萃取率为86.6%~92.5%,相对标准偏差为3.2%~6.9%。该方法有助于开发农药的快速前处理和检测技术。

关键词：农药萃取酶抑制针式滤器固相微萃取数字图像比色法毒死蜱酪氨酸酶

基于酶抑制原理的电喷雾质谱法快速筛查蔬菜中氨基甲酸酯类农药残留

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分析化学 2014年第11期42卷 1561-1567页

作者：罗辉泰黄晓兰吴惠勤张立郭寅龙朱志鑫黄芳林晓珊中国广州分析测试中心广东省分析测试技术公共实验室中国科学院上海有机化学研究所上海质谱中心

采用电喷雾质谱(ESI-MS),通过测定乙酰胆碱酯酶(Acetylcholinesterase,AChE)的抑制率,建立了蔬菜中氨基甲酸酯类农药(Carbamate pesticides,CBPs)残留的快速筛查方法。样品经QuEChERS方法简单处理后,以硫代乙酰胆碱为底物,与AChE发生酶... 详细信息

采用电喷雾质谱(ESI-MS),通过测定乙酰胆碱酯酶(Acetylcholinesterase,AChE)的抑制率,建立了蔬菜中氨基甲酸酯类农药(Carbamate pesticides,CBPs)残留的快速筛查方法。样品经QuEChERS方法简单处理后,以硫代乙酰胆碱为底物,与AChE发生酶促反应,用ESI-MS法测定底物转化成产物硫代胆碱的转化率,进而计算得到AChE的抑制率。本实验优化了酶促反应温度、时间及浓度等条件,考察了10种常见CBPs农药浓度与AChE抑制率的关系,研究了实际蔬菜样品存在的基质效应,以不含农药的空白蔬菜样品的酶抑制率的3倍确立了方法的检出限。结果表明,方法检出限可达到0.010.05 mg/kg,优于现行的农药残留快速筛查国家标准,完全满足食品安全国家标准对食品中农药最大残留限量的要求,且具有良好的抗基质干扰能力,可有效避免假阳性结果的出现,并通过了液相色谱-串联质谱法的验证。本方法简便快速、灵敏可靠,适用于蔬菜中氨基甲酸酯类农药的快速、高通量筛查。

关键词：酶抑制电喷雾质谱蔬菜氨基甲酸酯类农药快速筛查高通量

酶抑制荧光探针法检测果蔬样品中农药残留的研究

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精细化工 2004年第12期21卷 946-949页

作者：金盛烨陈吉平郭荣波梁鑫淼中国科学院大连化学物理研究所103组辽宁大连116011

基于已建立的酶抑制荧光探针流动注射分析法,通过对6种蔬菜和水果样品加标呋喃丹农药的实验,对其农药残留进行了检测,考察了该法在实际应用中的可靠性,研究了基质pH对检测的影响。获得呋喃丹的回收率在83 6%～110 9%,RSD在1 9%～8 1%,... 详细信息

基于已建立的酶抑制荧光探针流动注射分析法,通过对6种蔬菜和水果样品加标呋喃丹农药的实验,对其农药残留进行了检测,考察了该法在实际应用中的可靠性,研究了基质pH对检测的影响。获得呋喃丹的回收率在83 6%～110 9%,RSD在1 9%～8 1%,证明该法可以有效地应用在实际果蔬样品的检测中。样品酸度对检测有一定影响,对酸度较高的样品,通过调节基质的pH=7 5即可获得满意的检测结果。

关键词：酶抑制荧光探针流动注射分析农药

酶抑制-数字图像比色法检测和鉴别食品中二硫代氨基甲酸酯、氨基甲酸酯和有机磷类农药残留

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食品安全质量检测学报 2023年第24期14卷 44-50页

作者：秦一帆郭燕郑晓娇白冰荆旭山西农业大学食品科学与工程学院晋中030801 临汾市公安司法鉴定中心临汾041000

目的建立一种酶抑制-数字图像比色法检测和鉴别食品中二硫代氨基甲酸酯、氨基甲酸酯和有机磷类农药残留的分析方法。方法采用简单的胶带黏贴剥离方式,结合低共熔溶剂洗脱对食品样品中的农药进行高效提取。基于二硫代氨基甲酸酯、氨基甲... 详细信息

目的建立一种酶抑制-数字图像比色法检测和鉴别食品中二硫代氨基甲酸酯、氨基甲酸酯和有机磷类农药残留的分析方法。方法采用简单的胶带黏贴剥离方式,结合低共熔溶剂洗脱对食品样品中的农药进行高效提取。基于二硫代氨基甲酸酯、氨基甲酸酯和有机磷类农药对酪氨酸酶的抑制活性,使酪氨酸酶对酚类物质的氧化能力降低,进而影响酚类物质与氯化铁生成有色物质的反应,建立酪氨酸酶、酚类物质和氯化铁的比色阵列传感器,实现农药的残留分析,并结合主成分分析实现多种农药的区分。结果本研究建立的酶抑制-数字图像比色法对番茄、苹果和玉米中福美锌残留在0.008~8.000mg/kg的范围内线性良好,检出限为0.003 mg/kg,定量限为0.008 mg/kg,回收率为75.2%~94.9%,相对标准偏差小于5.0%。结论本研究建立的酶抑制-数字图像比色法绿色环保、简单高效,且易于推广,适用于蔬菜、水果和谷物等食品样品中农药残留的检测,并且在多种农药的残留分析方面有良好的应用前景。

关键词：酶抑制数字图像比色法低共熔溶剂二硫代氨基甲酸酯类农药氨基甲酸酯类农药有机磷类农药主成分分析

酶抑制荧光探针法检测有机磷和氨基甲酸酯类农药的研究

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酶抑制荧光探针法检测有机磷和氨基甲酸酯类农药的研究

作者：金盛烨中国科学院研究生院（大连化学物理研究所）

学位级别：硕士

农药在农业生产中的大量使用已对人类健康造成了危害。有机磷和氨基甲酸酯类农药均为乙胆碱酯酶(AChE)的抑制剂,胆碱酯酶在神经传导中起着重要的作用,它可以使乙酰胆碱分解成胆碱和乙酸,从而使神经的兴奋得到缓解,保证神经脉冲的有效传... 详细信息

农药在农业生产中的大量使用已对人类健康造成了危害。有机磷和氨基甲酸酯类农药均为乙胆碱酯酶(AChE)的抑制剂,胆碱酯酶在神经传导中起着重要的作用,它可以使乙酰胆碱分解成胆碱和乙酸,从而使神经的兴奋得到缓解,保证神经脉冲的有效传送。而有机磷和氨基甲酸酯类化合物可以和胆碱酯酶活性中心丝氨酸上的羟基结合,阻止了乙酰胆碱和胆碱酯酶的结合,使体内的乙酰胆碱积聚而中毒。本论文根据酶抑制原理建立了酶抑制荧光探针农残快速检测方法,并建立了相应的流动注射分析检测系统。论文中采用高灵敏度的荧光探针检测酶的抑制程度。酶的抑制程度与农药的浓度存在一定的线性关系,因此可以间接确定农药浓度。　论文中讨论优化了各种影响检测的条件和因素。在乙酰胆碱酯酶被抑制10 分钟条件下,获得呋喃丹和对氧磷农药最低检测限分别可达3.5 和12μg/L(以抑制率达到10%时的农药浓度计算),该检测方法的灵敏度高于国内目前现有的快速检测方法。每个样品检测时间(包括抑制时间)为14 分钟,样品通量可达15 /h。基于已建立的酶抑制荧光探针流动注射分析法,针对6 种蔬菜和水果样品,通过加标呋喃丹农药的实验,对该方法在实际应用中的可靠性进行了考察,对基质pH 对检测的影响进行了研究。获得呋喃丹的回收率在83.6%-110.9%,RSD 在1.9%-8.1%,证明本方法可以有效地应用在实际样品的检测中。论文讨论了样品酸度对检测的影响,对酸度较高的样品,通过调节基质的pH 即可获得满意的检测结果。

关键词：酶抑制荧光探针农药实际样品

箭叶淫羊藿提取物活性成分、抗氧化及酶抑制活性分析

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食品工业科技 2022年第12期43卷 354-360页

作者：王秦军王翠萍刘建欣陈琛陕西理工大学生物科学与工程学院/陕西省资源生物重点实验室/陕南秦巴山区生物资源综合开发协同创新中心/秦巴生物资源与生态环境省部共建国家重点实验室(培育) 陕西汉中723000 汉中天然谷生物科技有限公司陕西汉中723000

目的:研究评价箭叶淫羊藿提取物的活性成分、含量及体外生物活性。方法:通过分光光度法测定箭叶淫羊藿提取物总多酚、总黄酮、总多糖及原花青素含量;利用高效液相色谱(HPLC)法测定提取物5种黄酮类化合物含量;通过清除DPPH、OH、ABTS^(+... 详细信息

目的:研究评价箭叶淫羊藿提取物的活性成分、含量及体外生物活性。方法:通过分光光度法测定箭叶淫羊藿提取物总多酚、总黄酮、总多糖及原花青素含量;利用高效液相色谱(HPLC)法测定提取物5种黄酮类化合物含量;通过清除DPPH、OH、ABTS^(+)自由基法评价了箭叶淫羊藿提取物的抗氧化活性,并测定了对胰脂肪酶、酪氨酸酶、乙酰胆碱酯酶和丁酰胆碱酯酶的抑制作用。结果:箭叶淫羊藿提取物中总多酚、总黄酮、总多糖及原花青素含量分别为105.60±0.92、70.09±0.75、18.45±1.27、8.79±0.13 mg/g;HPLC测定5种黄酮类成分中淫羊藿苷含量最高、朝藿定C次之,分别为266.16±4.22和43.35±0.67 mg/g,宝藿苷I含量最少,为2.54±0.07 mg/g;箭叶淫羊藿提取物对DPPH·、·OH、ABTS^(+)·半数清除浓度(IC_(50))分别为4.43±0.40、2.83±0.09、2.04±0.08 mg/mL,清除能力呈一定的浓度依赖性;同时,箭叶淫羊藿提取物对脂肪酶、酪氨酸酶、乙酰/丁酰胆碱酯酶的半数抑制浓度(IC_(50))分别为5.97±0.04、2.27±0.23、9.27±0.07、7.41±0.26 mg/mL。结论:箭叶淫羊藿提取物活性物质丰富,对DPPH、OH、ABTS^(+)自由基具有较好的清除作用,对胰脂肪酶、酪氨酸酶、乙酰胆碱酯酶和丁酰胆碱酯酶有一定的抑制作用。

关键词：淫羊藿活性成分含量自由基清除酶抑制

小麦麸皮粗多糖的基本结构特征、流变特性及其对体外消化酶抑制初探

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南昌大学学报（理科版） 2022年第3期46卷 334-341页

作者：王鑫陈什康张婷柳芳伟宋萧萧殷军艺南昌大学食品科学与技术国家重点实验室江西南昌330047

小麦麸皮是小麦加工过程中的主要副产物,具有很高的营养价值与多种生物活性,其中非淀粉多糖含量较高,是主要活性成分之一。本试验采用碱提醇沉法制备小麦麸皮阿拉伯木聚糖(Wheat bran arabinoxylan,WBAX),采用高效液相色谱、离子色谱、... 详细信息

小麦麸皮是小麦加工过程中的主要副产物,具有很高的营养价值与多种生物活性,其中非淀粉多糖含量较高,是主要活性成分之一。本试验采用碱提醇沉法制备小麦麸皮阿拉伯木聚糖(Wheat bran arabinoxylan,WBAX),采用高效液相色谱、离子色谱、红外光谱、SEM、流变等技术与方法,系统研究了WBAX的基本结构特征、流变特性以及对消化酶抑制的效果。结果表明,WBAX以中性糖为主(83.4%),同时含有少量蛋白质(8.6%)和糖醛酸(0.9%),主要由阿拉伯糖(30.3%)和木糖(37.8%)组成;阿拉伯糖与木糖的摩尔比(A/X)为0.8,表明WBAX支化程度较高。WBAX表观黏度存在剪切稀化行为,且随温度增加而降低。WBAX的微观形貌主要为片状、球状和丝状。此外,与α-葡萄糖苷酶抑制实验相比,WBAX对α-淀粉酶抑制率相对较高,且随着多糖浓度增加,对α-淀粉酶抑制率有一定上升趋势。综上所述,从小麦麸皮提取获得WBAX主要为阿拉伯木聚糖,具有一定的抑制α-淀粉酶活性作用,相关结果可为WBAX的开发与应用提供理论依据。

关键词：小麦麸皮阿拉伯木聚糖结构特征流变特性酶抑制

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酶抑制法检测蔬菜中的有机磷农药残留的方法研究

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酶抑制法检测蔬菜中的有机磷农药残留的方法研究

作者：王小红华中农业大学

学位级别：硕士

自有机氯农药被禁用以来，有机磷农药成为我国使用量最大的农药，广泛使用中的有机磷农药品种属于高毒性农药，大量使用会造成许多潜在的危害，如污染环境、药害及人畜中毒等，尤其是由蔬菜中有机磷农药残留所引起的中毒现象十分严重。... 详细信息

自有机氯农药被禁用以来，有机磷农药成为我国使用量最大的农药，广泛使用中的有机磷农药品种属于高毒性农药，大量使用会造成许多潜在的危害，如污染环境、药害及人畜中毒等，尤其是由蔬菜中有机磷农药残留所引起的中毒现象十分严重。要预防和处理有机磷农药引起的环境、食品污染等问题，最有效的策略就是及时、准确检测有机磷农药。近年来有许多关于有机磷农药残留的快速检测方法的报道，这些快速检测方法大都是基于酶抑制的原理。本文利用酶抑制原理，采用植物酯酶和乙酰胆碱酯酶法检测有机磷农药残留。主要包括以下五个方面的内容： 1．综述了酶抑制法检测有机磷农药残留检测方法的进展。根据酶的来源可以分为：植物酯酶法和乙酰胆碱酯酶法。在植物酯酶法中根据显色原理的不同主要有固蓝B盐法和2，6-二氯靛酚钠盐法;乙酰胆碱酯酶法的显色剂主要是DTNB显色。乙酰胆碱酯酶比较昂贵，需要从动物中提取，过程复杂，只能在大城市的一些超市里使用，也不可能在全国范围内推广使用。植物酯酶便宜易得，提取方便，在有机磷的快速测定中有更广泛的应用价值。 2．采用固蓝B盐法对来源于玉米粉和面粉的植物酯酶进行比较，筛选出酶活性强得多的面粉酶作为检测用酶，并对影响酶活性的条件进行了优化研究，确定了植物酯酶的最佳活性反应条件是pH7.5，温度45℃。同时还对该法检测农药的各影响因子进行了分析研究，确定了一个比较适宜的农药检测反应体系条件，并发现农药在0～2.5μg／mL范围内，三种农药对植物酯酶的抑制作用与农药浓度基本上呈现的是线性关系。当以抑制率15％作为检测阈值时，乐果、敌敌畏、辛硫磷的检出限分别为0.3、0.2、0.1mg／kg，用于实际样品有机磷农药检测时，能定性的检测出农药是否超标。 3．对2，6-二氯靛酚钠盐法检测农药含量的各影响因子进行了分析研究，发现结果与固蓝B盐法相类似，确定了适合该方法的各个反应条件，并发现农药在0～2.5μg／mL范围内，三种农药对植物酯酶的抑制作用与农药浓度基本上呈现的也是线性关系。该方法与国标相比，结果的灵敏度不够高，主要原因可能是提取的酶未经纯化所致，但当以吸光度0.5～0.6作为检测阈值时，该方法的乐果、敌敌畏、辛硫磷的检出限都在国标同种方法的检出限范围内。 4．对乙酰胆碱酯酶活性的影响条件进行了优化研究，确定了乙酰胆碱酯酶的最佳活性反应条件是pH8.0，温度45℃。同时还对乙酰胆碱酯酶法检测农药的各影响因子进行了分析研究，确定了一个适宜的农药检测反应体系，并发现农药在1.0×10～1.0μg／mL范围内，三种农药对植物酯酶的抑制作用与农药浓度呈线性关

关键词：有机磷农药植物酯酶乙酰胆碱酯酶酶抑制

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几种枳壳乙醇提取物对酪氨酸酶抑制作用比较

厦门大学学报（自然科学版） 2005年第3期44卷 416-419页

作者：朱祥枝潘东明福建农林大学园艺学院福建福州350002

研究了6种中药枳壳乙醇提取物对酪氨酸酶活力的影响,结果表明: 6种中药枳壳乙醇提取物对酪氨酸酶活力均有显著的抑制作用.除了绿衣枳壳外,其它5种中药枳壳的提取物随着含量的增大,酶活力呈指数下降,测定导致酶活力下降50%的6种中药枳壳... 详细信息

研究了6种中药枳壳乙醇提取物对酪氨酸酶活力的影响,结果表明: 6种中药枳壳乙醇提取物对酪氨酸酶活力均有显著的抑制作用.除了绿衣枳壳外,其它5种中药枳壳的提取物随着含量的增大,酶活力呈指数下降,测定导致酶活力下降50%的6种中药枳壳提取物含量(IC50 )分别为: 0. 92mg/mL(绿衣枳壳)、0. 96mg/mL(陕西枳壳)、1. 30mg/mL(红河橙枳壳)、0. 44mg/mL(湖南枳壳)、0. 41mg/mL(四川枳壳)、和0. 70mg/mL(江西枳壳).上述6种中药枳壳提取物对酪氨酸酶的抑制作用表现为可逆过程,抑制类型均为混合型.分别测定各种枳壳提取物对游离酶抑制抑制常数(KI)和酶底物络合物抑制常数(KIS),并加以比较.

关键词：乙醇提取物抑制作用酪氨酸酶枳壳抑制常数酶活力可逆过程中药混合型络合物酶抑制含量下降测定