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DNA复制的酶学机理

生物学教学 2017年第10期42卷 71-72,61页

作者：林权胡雪峰福建师范大学生命科学学院

DNA复制对保持亲子代遗传信息的稳定性有着特别重要的作用，其复制过程也十分复杂，需要多种酶和蛋白因子的参与。基于DNA的复制过程，介绍参与复制过程的DNA解旋酶、DNA拓扑异构酶、引发酶、DNA聚合酶及DNA连接酶等相关酶的作用。

关键词： DNA复制酶学机理原核生物真核生物

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双孢蘑菇褐变的酶学机理研究(续)

中国食用菌 1999年第6期18卷 17-18页

作者：池致念柯家耀王泽生福建省轻工业研究所福州350005 福建省罐头行业协会福州350001

The polyacrylamide slab gel electrophoresis(PAGE) was applied to make an exhaustive study on the browning mechanism of Agaricus *** result showed that,the polyphenol oxidase (PPO) was the main reason to cause mushroom brown after *** were different enzymic activity and PAGE isozymic patterns from the defferent type of strains,the same as the different site of organism and different life stage during growing cycle.

关键词：双孢蘑菇褐变酶学机理

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微生物降解褐煤的酶学机理

生物技术 2002年第2期12卷 45-47页

作者：王风芹袁红莉陈文新中国农业大学生物学院北京100094

褐煤是燃烧值较低的劣质煤，工业用途主要是直接燃烧，但直接利用伴随着许多环境问题，如褐煤燃烧过程中会释放含硫及含氮废气对大气造成污染。

关键词：微生物降解褐煤酶学机理

白腐真菌对菲、蒽和荧蒽降解性能和机理的研究

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白腐真菌对菲、蒽和荧蒽降解性能和机理的研究

作者：刘俊安徽大学

学位级别：硕士

多环芳烃是具有稳定苯环结构的有毒有机化合物,分布在各种环境介质中。由于多环芳烃的“三致”效应以及生物积累和生物放大等特性,严重威胁生态环境和人体健康,如何有效修复多环芳烃污染成为急需解决的问题。目前微生物修复技术被认为... 详细信息

多环芳烃是具有稳定苯环结构的有毒有机化合物,分布在各种环境介质中。由于多环芳烃的“三致”效应以及生物积累和生物放大等特性,严重威胁生态环境和人体健康,如何有效修复多环芳烃污染成为急需解决的问题。目前微生物修复技术被认为是去除多环芳烃高效且环境友好的方法之一。本文通过探索乳白耙齿菌F17(Irpex lacteus)对菲、蒽和荧蒽的降解性能,比较了菲、蒽和荧蒽降解性能的不同,并探索了共存体系中菲、蒽和荧蒽降解的相互影响。同时,结合降解中间产物的分析,初步探讨了菲、蒽和荧蒽的降解途径,并通过酶活力的测定,探索了乳白耙齿菌F17对菲、蒽和荧蒽降解的酶学机理。菲、蒽和荧蒽在初始浓度为5 mg/L和10 mg/L时降解效果最优,降解率分别达93%、85%和73%以上,而20 mg/L的菲、蒽和荧蒽对乳白耙齿菌F17的生长有一定的毒害作用而导致降解率有所下降。乳白耙齿菌F17在pH 3.0-8.0范围内能较好地降解菲,在pH 4.0-8.0范围内可较好地降解蒽和荧惠。在10-20℃的较低温度下,乳白耙齿菌F17对菲、蒽和荧蒽的降解速率和降解率均较小,但菲的生物降解过程对低温的适应性比蒽和荧蒽要好。在30-40℃范围内,降解率则显著增大,生物降解的最适温度是30℃。吐温80的加入可以提高乳白耙齿菌F17对菲、蒽和荧蒽的降解能力,但是对菲的促进效果明显低于蒽和荧蒽。当添加的吐温80浓度为50 mg/L时,乳白耙齿菌F17对菲、蒽和荧蒽降解率的提高最明显,分别提高了5.5%、14.6%和14.7%。利用乳白耙齿菌F17对单一和复合多环芳烃的降解性能进行了研究。对于单一多环芳烃,15 d时菲、蒽、荧蒽的降解率分别为97.79%、89.28%和81.54%,降解能力由强到弱依次为菲>蒽>荧蒽。菲、蒽和荧蒽的生物降解过程符合准一级反应动力学,拟合结果表明降解速率按照菲>蒽>荧蒽的顺序递减。复合PAHs的降解主要表现为相互竞争的特点。蒽或荧蒽的存在对菲的降解影响不显著,菲或荧蒽的存在对蒽的降解有抑制作用,菲或蒽的存在对荧蒽的降解同样也存在抑制作用。低环PAHs萘的加入促进了微生物对蒽、荧蒽等较难利用的PAHs的降解,降解率分别比加入萘之前提高了13.70%和20.25%,表现出了共代谢的特点。微生物对PAHs的降解能力主要取决于分子结构、分子大小、水溶性及生物可利用性等因素。在菲、蒽和荧蒽的15d降解实验中,三种降解酶的酶活力都能被检测到。其中木质素过氧化物酶的酶活力在整个降解过程中明显高于锰过氧化物酶和漆酶。因此,在15 d降解实验中,木质素过氧化物酶在降解菲、蒽和荧蒽中起着主要作用,而且三种降解酶的酶活力主要表现在前9天。在菲、蒽和荧蒽的降解过程中,蒽首先转化成9,10蒽醌,然后在酶的作用下转化成邻苯二甲酸。菲首先转化为1-羟基-2-萘甲酸,然后转化为2-(3-羧基-3-氧代-1-丙烯基)苯甲酸或4-(2-羟基-苯基)-2-氧代-3-丁烯酸,前者再转化为邻苯二甲酸,后者再转化为邻苯二酚。荧蒽首先在酶的作用下环裂解生成1-苯基萘,接着1-苯基萘通过环裂解和一系列酶促反应生成对苯二甲酸。根据菲、蒽和荧蒽的不同降解途径可知,乳白耙齿菌F17对不同种类的PAHs存在着不同的降解途径,即使在菲和蒽这对同分异构体上也表现出很大的差异性。

关键词：乳白耙齿菌F17 菲、蒽和荧蒽降解性能相互影响降解途径酶学机理

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稻米品质的遗传、生理研究进展

中国粮油学报 2005年第5期20卷 1-5页

作者：王丰杨娟张国平浙江大学农业与生物技术学院杭州310029

本文从不同亚种、品种及粒间稻米品质差异等方面阐述了我国稻米品质的性状表现,在此基础上,综述了近年来在稻米品质遗传、生理研究中所取得的进展,着重分析了稻米主要品质性状的遗传特性、胚乳淀粉及蛋白质的物理结构、稻米品质形成的... 详细信息

本文从不同亚种、品种及粒间稻米品质差异等方面阐述了我国稻米品质的性状表现,在此基础上,综述了近年来在稻米品质遗传、生理研究中所取得的进展,着重分析了稻米主要品质性状的遗传特性、胚乳淀粉及蛋白质的物理结构、稻米品质形成的酶学机理以及环境因子和栽培措施对稻米品质形成的影响。

关键词：稻米品质差异遗传特性生理研究酶学机理

真菌免疫抑制剂霉酚酸侧链生物合成机制的研究

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真菌免疫抑制剂霉酚酸侧链生物合成机制的研究

作者：陈锡玮西南大学

学位级别：硕士

背景:丝状真菌是具有广泛生物活性药物主要来源之一,如抗生素青霉素(penicillin)、降胆固醇药洛伐他丁(lovastatin)和抗真菌药灰黄霉素(griseofulvin)等。真菌天然产物具有复杂的结构多样性,根据其生物来源和骨架类型主要分为聚酮类(pol... 详细信息

背景:丝状真菌是具有广泛生物活性药物主要来源之一,如抗生素青霉素(penicillin)、降胆固醇药洛伐他丁(lovastatin)和抗真菌药灰黄霉素(griseofulvin)等。真菌天然产物具有复杂的结构多样性,根据其生物来源和骨架类型主要分为聚酮类(polyketides)、萜类(terpenoids)、聚酮-萜杂合类(polyketide-terpenoids)、多肽类(peptides)、生物碱类(alkaloids)和莽草酸衍生物类(shikimate)。其中,聚酮-萜杂合类天然产物由聚酮和异戊烯基单元构成,其代表性化合物为免疫抑制剂霉酚酸(mycophenolic acid,MPA),抗血管生成药物烟曲霉素(fumagillin)以及抗增殖药aspernidine A。MPA对鸟嘌呤核苷酸生物合成途径中的限速酶次黄嘌呤核苷脱氢酶(inosine monophosphate dehydrogenase,IMPDH)有高效的抑制活性,从而阻断脱氧核糖核糖核酸(deoxyribonucleic acid,DNA)的合成。因此,鉴于MPA独特的作用机理,其具有诸如抗病毒、抗真菌、抗细菌、抗肿瘤、抗牛皮癣和免疫抑制活性等重要的生物活性。但是,MPA在免疫治疗时所引起的各种副反应,如腹泻、白细胞减少症、败血症、呕吐等,在一定程度上限制了MPA应用。目前,基于MPA异戊烯基侧链的修饰及改造,从而获得活性更高副反应更低的MPA衍生物是其化学结构改造的重点。目前,MPA生物合成基因簇(mpa gene cluster)相继在Penicillium brevicompactum IBT23078、*** NRRL 864、*** FM164和*** CECT中被克隆和鉴定。基因簇mpa含有7个开放阅读框(open reading frames,ORFs)MpaA-H,包括异戊烯基转移酶(MpaA)、非还原聚酮合酶(MpaC)、P450氧化酶-水解酶融合蛋白(MpaDE)、次黄嘌呤单核苷酸脱氢酶(MpaF)、O-甲基转移酶(MpaG)、α/β-水解酶(MpaH)和未知功能蛋白(MpaB)。1)通过在不产MPA的Aspergillus nidulans菌中异源表达MpaF,显著增加***的MPA抗性,证明了MpaF为MPA产生菌的自身抗性基因;2)经过体内遗传及体外酶学生化研究表明,MpaC催化1分子乙酰辅酶A、3分子丙二酰辅酶A和1分子S-腺苷甲硫氨酸(S-asenosylmethionine,SAM)合成5-甲基苷色酸(5-methylorsellinic acid,5-MOA)。融合蛋白酶(MpaDE)催化2步连续反应,将5-MOA转化为5,7-二羟基-4-甲基苯酞(5,7-dihydroxy-4-methylphthalide,DHMP)。MpaG催化脱甲基霉酚酸(demethylmycophenolic,DMMPA)中聚酮骨架结构DHMP的C-3位羟甲基化形成MPA;3)除此而外,剩下的MpaA、MpaH及其未知功能蛋白MpaB可能参与MPA异戊烯基侧链的上载和断裂过程,但从未见相关功能研究的报道。因此,本课题以MpaA/B/H为核心研究对象,试图通过体内基因敲除实验、相关中间体分离鉴定及化学回补、体外酶学表征等综合研究策略和方法,阐明MPA异戊烯基侧链生物合成的独特机制,从而完全揭示完整的MPA生物合成途径,为后续基于生物酶工程和代谢工程手段的MPA合成生物学的改造奠定坚实的理论基础。目的:1.在灰黄青霉菌(***)中鉴定合成MPA的生物合成基因簇。2.通过构建MpaA/B/C/H基因敲除突变株,检测其对应的积累产物。3.通过对MpaA/B/H的体外生化研究,阐明其在MPA异戊烯基侧链生物合成过程中的作用,并探讨其酶学反应机理。4.根据上述体外生化研究结果,进一步探索MpaA/B对于MPA异戊烯基侧链生物学改造的意义。方法:1.对***全基因组测序,通过本地Blast搜索MPA的生物合成基因簇mpa,应用2ndFind、Pfam和NCBI等软件对该基因簇mpa进行解析,得到簇中所有功能基因的编码序列。2.应用Snapgene软件设计引物,DNAMAN软件进行蛋白同源对比分析,Phery2在线进行蛋白同源建模,Clustalx 2.1和MEGA 6.0进行系统进化树构建,应用TMHMM Server v.2.0进行蛋白跨膜区预测。3.通过构建分裂标签敲出载体,利用原生质体转化方法获得MpaA/B/C/H基因突变株,高效液相色谱仪(high performance liquid chromatography,H

关键词：霉酚酸生物合成异戊烯基化修饰碳碳键断裂酶学机理