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杨树ASE蛋白的生化功能研究

林业科学研究 2016年第4期29卷 487-493页

作者：钱婷婷杨志灵曾庆银中国科学院植物研究所北京100093 中国科学院大学北京100049 北京林业大学生物科学与技术学院北京100083

[目的]谷氨酰胺磷酸核糖焦磷酸转酰胺酶(ASE)在植物嘌呤合成中发挥着关键作用,本研究的目的是详细揭示杨树ASE蛋白的生化功能特性。[方法]通过半定量RT-PCR、蛋白质亚细胞定位以及测定纯化蛋白的催化活性等方法来研究其在体外的生化功能... 详细信息

[目的]谷氨酰胺磷酸核糖焦磷酸转酰胺酶(ASE)在植物嘌呤合成中发挥着关键作用,本研究的目的是详细揭示杨树ASE蛋白的生化功能特性。[方法]通过半定量RT-PCR、蛋白质亚细胞定位以及测定纯化蛋白的催化活性等方法来研究其在体外的生化功能,进一步通过互补拟南芥缺失突变体(atase2)来研究杨树ASE基因的体内生物学功能。[结果]从杨树基因组中鉴别出2个ASE基因,序列分析发现它们之间有很高的蛋白质序列相似性。半定量RT-PCR分析发现两个杨树ASE基因在根、茎、叶和芽中均表达。蛋白质亚细胞定位分析发现杨树ASE蛋白均定位在叶绿体中,而且两个杨树ASE蛋白均能完全互补拟南芥atase2突变体的表型。酶学性质分析表明,杨树两个ASE蛋白均能催化5-磷酸核糖-α-焦磷酸生成5-磷酸核糖-β-胺。[结论]本研究预示着两个杨树ASE蛋白在嘌呤合成中均发挥着重要作用。

关键词： ASE基因基因表达酶学功能突变体

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脯氨酰寡肽酶功能及抑制剂研究进展

中国药理学通报 2020年第3期36卷 300-303页

作者：冯芬张春平南昌大学基础医学院医学遗传与细胞生物学教研室江西南昌330006

脯氨酰寡肽酶(prolyl oligopeptidase,POP)又称为脯氨酰内肽酶,是一种脯氨酸后切割酶,主要存在于细胞质中,负责短神经肽和肽激素的成熟和降解,与神经相关性疾病密切相关。POP的活性位点位于三联体催化结构域和β-螺旋桨结构域的界面。PO... 详细信息

脯氨酰寡肽酶(prolyl oligopeptidase,POP)又称为脯氨酰内肽酶,是一种脯氨酸后切割酶,主要存在于细胞质中,负责短神经肽和肽激素的成熟和降解,与神经相关性疾病密切相关。POP的活性位点位于三联体催化结构域和β-螺旋桨结构域的界面。POP抑制剂具有神经保护、抗遗忘和增强认知的特性,同时对肿瘤、高血压等也有一定的治疗作用。本文就POP的功能、作用机制及其抑制剂的研究作一综述。

关键词：脯氨酰寡肽酶酶学功能非酶学功能帕金森病肿瘤抑制剂

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支架蛋白及其功能研究进展

生命的化学 2019年第5期39卷 979-986页

作者：李招王淑珍中国药科大学生命科学与技术学院

支架蛋白是细胞中的重要辅助分子,可通过与多种信号酶、受体或离子通道结合,招募各种信号分子影响细胞信号转导。虽然支架蛋白通常缺乏酶催化活性,但它们对控制信号信息流动仍有很大影响。近年来研究发现,有些支架蛋白可作为具有催化活... 详细信息

支架蛋白是细胞中的重要辅助分子,可通过与多种信号酶、受体或离子通道结合,招募各种信号分子影响细胞信号转导。虽然支架蛋白通常缺乏酶催化活性,但它们对控制信号信息流动仍有很大影响。近年来研究发现,有些支架蛋白可作为具有催化活性的酶发挥作用,而有些酶则可作为支架蛋白通过非酶活性发挥功能,进而参与不同的细胞信号转导过程。本文将对支架蛋白的特征、作用机制,具有酶催化活性支架蛋白的发现以及支架蛋白在细胞信号转导、物质代谢调控中的作用进行综述。

关键词：支架蛋白酶学功能信号转导代谢调控

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日本落叶松CSE和DHN基因功能分析

日本落叶松CSE和DHN基因功能分析

作者：王雪纯北京林业大学

学位级别：硕士

咖啡酰莽草酸酯酶(CSE)作为木质素单体生物合成重要酶之一,可通过调控木质素的合成来应对非生物胁迫。脱水素蛋白(DHN)是在脱水应激过程中过表达的亲水性蛋白,是参与抗逆胁迫的蛋白,与植物脱水的保护机制有关。本论文主要研究是日本落叶... 详细信息

咖啡酰莽草酸酯酶(CSE)作为木质素单体生物合成重要酶之一,可通过调控木质素的合成来应对非生物胁迫。脱水素蛋白(DHN)是在脱水应激过程中过表达的亲水性蛋白,是参与抗逆胁迫的蛋白,与植物脱水的保护机制有关。本论文主要研究是日本落叶松(Larix kaempferi)CSE和DHN基因的功能。根据北美落叶松(Larix laricina)转录组数据,成功从日本落叶松茎中克隆得到了1条CSE基因和4条DHN基因,分别为Lk CSE、Lk DHN1、Lk DHN2、Lk DHN3和Lk DHN4。同源性序列比对和系统进化树表明Lk CSE很有可能具有催化活性,并且CSE可能存在于被子植物和裸子植物分化之前,但大多数单子叶植物在进化过程中丢失了;Lk DHN1、Lk DHN2、Lk DHN3和Lk DHN4均属于SK型脱水素蛋白并可能具有抗逆性。通过烟草瞬时表达技术发现Lk CSE蛋白的亚细胞定位为内质网和质膜,Lk DHN蛋白的亚细胞定位主要在细胞核。利用原核载体和亲和层析技术成功表达纯化获得Lk CSE、Lk DHN、缺失K段的Lk DHN△K和缺失S段的Lk DHN△S突变蛋白。通过高效液相色谱法技术开展了日本落叶松Lk CSE的酶学性质研究,结果表明Lk CSE具有咖啡酰莽草酸酯酶的催化能力,可以水解咖啡酰莽草酸生成咖啡酸与莽草酸;Lk CSE蛋白最适反应温度和p H分别为30℃和6.0;Lk CSE的K值为82.08μM,V为13.04 n M min。通过凝胶阻滞实验结果显示了Lk DHN蛋白可以与DNA非特异性结合,可能具有保护或修复DNA的功能;缺失K段的Lk DHN△K与DNA的结合能力几乎消失了,表明K段在DHN与DNA互作中起到重要作用。本论文为日本落叶松CSE和DHN的进一步抗逆性研究提供了参考。

关键词：咖啡酰莽草酸酯酶(CSE) 脱水素蛋白(DHN) 日本落叶松(Larix kaempferi) 酶学功能凝胶阻滞实验(EMSA)

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酒用酸性蛋白酶的研究进展

酿酒科技 2005年第1期 41-44页

作者：唐胜球董小英许梓荣韶关学院英东生物工程学院广东韶关512005 浙江大学动物分子营养教育部重点实验室浙江杭州310029

酒用酸性蛋白酶在白酒酿造的发酵过程中起协同作用,具有溶解发酵原料的颗粒、促进微生物繁殖、分解蛋白质生成香味物质、降解酵母菌体蛋白等多种功能。综述了酒用酸性蛋白酶酶源研究及其酿酒中的酶学功能。

关键词：白酒酸性蛋白酶黑曲霉宇佐美曲霉酶源酶学功能

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苦荞凝集素的纯化及性质鉴定

苦荞凝集素的纯化及性质鉴定

作者：申剑山西大学

学位级别：硕士

荞麦是一种重要的蓼科杂粮作物,也是一种传统的药食同源植物。苦荞麦种子中蛋白质种类非常丰富,如,蛋白酶抑制剂及特异性抗原的研究已取得长足进展。近年来,凝集素由于其在生物识别、癌症、免疫应答等领域的各项成就,成为生物研究的新... 详细信息

荞麦是一种重要的蓼科杂粮作物,也是一种传统的药食同源植物。苦荞麦种子中蛋白质种类非常丰富,如,蛋白酶抑制剂及特异性抗原的研究已取得长足进展。近年来,凝集素由于其在生物识别、癌症、免疫应答等领域的各项成就,成为生物研究的新标杆。但有关荞麦中的更多生物活性成分,包括凝集素及其在植物源凝集素中的分类、功能等的研究还有待揭示。本文从云南苦荞种子中提纯出一种分子量为62 kDa的蛋白。并对其进行了一些性质及功能的鉴定。利用缓冲液浸提、硫酸铵沉淀、透析及DEAEFF层析等方法纯化苦荞凝集素;PAS(高碘酸-希夫)染色鉴定其蛋白种类,硫酸-苯酚法测定其糖含量;凝血实验和糖抑制实验检测其凝血活性和结合糖特异性;以pNPP(对硝基苯磷酸二钠)和几丁质为底物,分别测定其磷酸酯酶和几丁质酶活性;采用邻苯三酚自氧化法检测其SOD酶活性;以质粒DNA为底物,检测其切割质粒DNA活性;体外翻译抑制实验研究其对蛋白质翻译系统的影响;不同温度和pH对其磷酸酯酶活性的影响;利用HPLC和荧光光谱分析不同金属离子对其酶活性和结构的影响。实验结果表明,采用上述方法纯化的蛋白质是一种具有凝血功能的苦荞凝集素(TBL)。根据SDS-PAGE计算其相对分子质量约为62 kDa。PAS染色证明TBL为糖蛋白或糖结合蛋白,含糖量为5.8%。凝血实验表明TBL能特异性地凝集人的O型血红细胞,效价为15μg/mL,对其它血型的红细胞凝血效应不明显。糖抑制实验表明其血凝活性被D-甘露糖和D-葡萄糖抑制,推测其是一种甘露糖结合凝集素。酶学性质鉴定显示,TBL具有磷酸酯酶活性(米氏常数Km=9.86×10-3 mol/L)和几丁质酶活性(比活力为1.38U/mg)。以质粒为底物,发现TBL具有切割质粒DNA的活性。体外翻译抑制实验表明TBL能够阻止蛋白质的合成。HPLC研究表明,Mn2+对TBL的O-糖苷水解酶活性有促进作用,而Cu2+对其酶活性有抑制作用。凝集素在抗病、抑菌,抗癌及调节免疫活性等方面具有独特的作用。本论文首次获得一种具有酶性功能的苦荞麦凝集素,该凝集素兼具O-糖苷酶和N-糖苷酶活性,并能够切割质粒DNA及抑制蛋白质合成。通过功能分析及与已报道的几种植物源凝集素比对,推断TBL属于凝集素家族中的Ⅱ型核糖体失活蛋白。这些实验结果为深入研究TBL的功能及应用提供了理论基础。

关键词：苦荞凝集素糖蛋白酶学功能 HPLC 荧光光谱