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全霉素生物合成途径中的非核糖体肽合成酶HlmE的功能研究

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中国科技论文在线精品论文 2021年第3期14卷 286-293页

作者：陈艳段炼武汉大学药学院武汉430072

目的:非核糖体肽合成酶(nonribosomal peptide synthetase,NRPS)是二硫吡咯酮类化合物骨架合成的关键,本研究对全霉素(holomycin)生物合成途径中的NRPS HlmE进行酶学功能研究,以期为二硫吡咯酮类化合物生物合成途径的解析奠定基础.方法... 详细信息

目的:非核糖体肽合成酶(nonribosomal peptide synthetase,NRPS)是二硫吡咯酮类化合物骨架合成的关键,本研究对全霉素(holomycin)生物合成途径中的NRPS HlmE进行酶学功能研究,以期为二硫吡咯酮类化合物生物合成途径的解析奠定基础.方法:利用原核表达系统表达NRPS HlmE,并通过亲和层析方法和快速蛋白质液相层析(fast protein liquid chromatography,FPLC)纯化仪器获得目的蛋白;利用高效液相色谱法(high performance liquid chromatography,HPLC)和基质辅助激光解吸电离-飞行时间质谱法(matrix-assisted laser desorption/ionization-time of flight mass spectrometry,MALDI-TOF MS)对HlmE的功能进行研究.结果:本研究成功在体外纯化得到高纯度HlmE,HPLC检测到了腺嘌呤核苷单磷酸(adenosine monophosphate,AMP)和半胱氨酰-AMP的产生,证明了HlmE中腺苷化(adenylation,A)结构域的活性;MALDI-TOF MS法证明HlmE具有挂载底物半胱氨酸的功能.结论:本研究纯化得到的NRPS HlmE可以活化并挂载底物半胱氨酸,为进一步研究NRPS的功能以及深入研究二硫吡咯酮类化合物的生物合成途径奠定基础.

关键词：生物化学非核糖体肽合成酶二硫吡咯酮类化合物蛋白纯化酶功能

磷酸二酯酶2(PDE2)结构及其选择性抑制剂的研究进展

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有机化学 2009年第2期29卷 159-165页

作者：赵新筠陈喜湛昌国华中师范大学化学学院农药与化学生物学教育部重点实验室武汉430079 Department of Pharmaceutical Sciences College of PharmacyUniversity of Kentucky725 Rose StreetLexingtonKY 40536USA

磷酸二酯酶2(PDE2)主要分布在大脑、心脏细胞中,作为潜在的药物靶标,通过水解细胞内第二信使cAMP和cGMP,对维持cAMP和cGMP的水平起着重要的作用,其选择性抑制剂有望在内皮渗透性和改善记忆力等方面发挥作用.综述了PDE2的组织分布、生理... 详细信息

磷酸二酯酶2(PDE2)主要分布在大脑、心脏细胞中,作为潜在的药物靶标,通过水解细胞内第二信使cAMP和cGMP,对维持cAMP和cGMP的水平起着重要的作用,其选择性抑制剂有望在内皮渗透性和改善记忆力等方面发挥作用.综述了PDE2的组织分布、生理功能、催化区域和调节区域晶体结构的特点以及选择性的抑制剂.最后,根据药物设计发展的趋势对未来PDE2抑制剂的设计进行了展望.

关键词：磷酸二酯酶2(PDE2) 酶功能酶分布调节区域催化区域选择性抑制剂

白细胞介素-1受体结合激酶功能型遗传变异性可对脓毒性休克严重程度产生影响

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中国危重病急救医学 2011年第1期23卷 31-31页

作者：钟毓贤(编译) 胡森(审校)

以往的研究表明，过度炎症反应可决定脓毒症的病情和预后，感染过程中白细胞介素-1受体结合激酶（IRAK1）是激活核转录因子-κ B信号通路的蛋白，所以法国学者研究了IRAK1相关遗传变异性对急性肺损伤的严重程度和病情发展以及脓毒性休... 详细信息

以往的研究表明，过度炎症反应可决定脓毒症的病情和预后，感染过程中白细胞介素-1受体结合激酶（IRAK1）是激活核转录因子-κ B信号通路的蛋白，所以法国学者研究了IRAK1相关遗传变异性对急性肺损伤的严重程度和病情发展以及脓毒性休克病死率的影响。研究人员选取843例脓毒性休克患者，同时选取800例性别相匹配的健康者作为对照组。

关键词：白细胞介素-1 脓毒性休克遗传变异性受体结合酶功能过度炎症反应病情发展核转录因子

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源自产碱杆菌DN25降氰酶催化功能的研究

源自产碱杆菌DN25降氰酶催化功能的研究

作者：尹业兴广西大学

学位级别：硕士

氰水解酶和氰水合酶属于腈超家族酶,二者均能有效水解氰化氢,但是产物不同(前者为甲酸和氨,后者为甲酰胺),目前已发现的两种酶均来源不同菌株。本课题组在前期研究中从菌株Alcaligenes sp. DN25中克隆并纯化出—氰降解酶(命名为cdE),水... 详细信息

氰水解酶和氰水合酶属于腈超家族酶,二者均能有效水解氰化氢,但是产物不同(前者为甲酸和氨,后者为甲酰胺),目前已发现的两种酶均来源不同菌株。本课题组在前期研究中从菌株Alcaligenes sp. DN25中克隆并纯化出—氰降解酶(命名为cdE),水解产物中同时包含甲酸、氨和甲酰胺。本论文因此对cdE所表现出来的双功能催化作用进行探讨。首先,采用梯度洗脱纯化的方法获得了纯度为97%的cdE,确定其水解反应最佳pH和温度分别为7和30℃,纯酶水解氰化钾的两种产物(甲酸和甲酰胺)的相对含量会受到pH和温度的影响。无组氨酸标签cdE水解实验结果证明了组氨酸标签对cdE的催化特性无影响。由此认为cdE既具有氰水解酶的功能也有氰水合酶的功能。cdE氨基酸序列与源自Pseudomonas stutzeri AK61的氰水解酶的相似度为99%,经突变实验对比分析,认为两者催化功能的差异不是由于基因突变引起的。提出cdE的催化机理为：底物与催化三联体Cys163-Glu47-Lys129形成的中间体可同时以途径A(表现为氰水解酶功能)和途径B(表现为氰水合酶功能)完成水解反应,且途径A和途径B在氰水解过程中具有选择性。进一步以同源建模和分子对接技术为手段,通过定点突变手段筛选到几个对cdE的催化功能起到重要作用的突变体。这些突变体中除了Trp164A1a、 Met162His和Glu136Ala利于甲酰胺的生成,三个突变体水解产物中甲酰胺和甲酸之比分别是cdE的5.5倍、1.24倍和1.76倍,其余突变体(Met162Ala,Met162Cys, Met162Ser, Met162Glu, Met162Asn, Met162Phe, His166Asn, Ser101Ala)均利于甲酸的生成,突变体水解产物中甲酸和甲酰胺之比分别是cdE的2.9倍、2.8倍、7.8倍、3.2倍、1.8倍、1.3倍、1.7倍和2.8倍;组合突变体(Met162Ala/Ser101Ala,Met162Cys/Ser101Ala)具有一定的组合效果,其水解产物中甲酸和甲酰胺之比分别是cdE的4.9倍和5.1倍。碳端缺失突变体△310和A307的水解产物中甲酸和甲酰胺之比分别是cdE的1.27倍和1.35倍。用Alcaligenes sp. DN25处理某选矿厂含氰废水,对总氰的降解率可达100%(反应23h后);选矿矿渣浸出液总氰浓度为8.8mg/L时,Alcaligenes sp. DN25对总氰的去除效率可达95%,总氰浓度为5-20mg/L且同时外加碳源氮源时,菌株生长和自身解毒过程同时进行,培养至67h,游离氰去除率达87%以上。

关键词：产碱杆菌氰水解酶氰水合酶酶功能同源建模氰生物降解

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培养料pH值对菌丝生长影响的研究

中国食用菌 2000年第2期19卷 36-37页

作者：陈志松广东省珠海市西部华珠食用菌厂广东珠海519040

培养料作为微生物生活的外部环境,pH值的高低直接影响微生物细胞的新陈代谢,影响整个微生物的生命活动.因此,我们在栽培食用菌时务必使之在适宜的酸碱度环境下生长发育.不同的食用菌类型,其新陈代谢的酶特性不同,需要的pH值环境也不同.... 详细信息

培养料作为微生物生活的外部环境,pH值的高低直接影响微生物细胞的新陈代谢,影响整个微生物的生命活动.因此,我们在栽培食用菌时务必使之在适宜的酸碱度环境下生长发育.不同的食用菌类型,其新陈代谢的酶特性不同,需要的pH值环境也不同.大多数食用菌同一般真菌一样,喜酸性环境,适宜菌丝生长的pH值在3～8之间.不同食用菌最适合的pH值是:木耳5.0～5.4,香菇4.0～5.4,金针菇5.4～6.2,银耳5.0～6.0,草菇7.5～8.2,猴头3.8～***值过高或过低,都会导致菌丝生长不良,造成食用菌生产产质下降.以金针菇为例,适宜pH值为5.5～6.2,pH值超过6.5,菌丝生长稀疏纤细,生长速度变慢,超过7.5,生长基本停止.培养料散发一种臭味,容易感染杂菌.

关键词：培养料 pH值食用菌菌丝生长酶功能