检索结果-南通市图书馆

广东石油化工学院学报 2024年第1期34卷 50-54页

作者：萧允艺赵晓梦于泽浩刘金丰广东石油化工学院生物与食品工程学院广东茂名525000 喀什大学生命与地理科学学院新疆喀什844006

酵母文库是研究蛋白互作及转录调控的重要基础,构建番石榴果实酵母cDNA文库,是研究番石榴果实采后成熟复杂分子机制的重要途径。首先提取高质量番石榴mRNA,接着合成双链cDNA文库,再通过Gateway位点特异性重组手段将cDNA文库构建至酵母pG... 详细信息

酵母文库是研究蛋白互作及转录调控的重要基础,构建番石榴果实酵母cDNA文库,是研究番石榴果实采后成熟复杂分子机制的重要途径。首先提取高质量番石榴mRNA,接着合成双链cDNA文库,再通过Gateway位点特异性重组手段将cDNA文库构建至酵母pGADT7-DEST表达载体上。检测结果显示,次级酵母cDNA文库库容量约为1.56×10^(7)cfu,插入cDNA片段长度为0.85~5.00kb,平均长度大于1.00 kb,且多态性丰富,表明文库质量较好。该酵母cDNA文库的构建为获取与果实成熟关键转录因子和系统性研究果实功能基因转录调控机制奠定了基础。

关键词：番石榴酵母文库文库构建转录调控

日本结缕草(Zoysia japonica)酵母杂交cDNA文库的构建及分析

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草地学报 2023年第11期31卷 3271-3277页

作者：李艳茹周丽莹董笛刘亚玲李舒文王梦迪晁跃辉北京林业大学草业与草原学院北京100083 北京理工大学生命学院北京100081 内蒙古草业技术创新中心有限公司内蒙古呼和浩特010010

酵母双杂交和单杂交技术是生物大分子互作和调控研究中的高效分子生物学技术,是蛋白质互作或蛋白质与DNA互作筛选的手段。本研究旨在构建高容量的日本结缕草(Zoysia japonica)酵母文库,以便后续深入挖掘日本结缕草相关基因,进行基因功... 详细信息

酵母双杂交和单杂交技术是生物大分子互作和调控研究中的高效分子生物学技术,是蛋白质互作或蛋白质与DNA互作筛选的手段。本研究旨在构建高容量的日本结缕草(Zoysia japonica)酵母文库,以便后续深入挖掘日本结缕草相关基因,进行基因功能及基因网络研究。本研究应用不同组织来源以及不同生长时期的日本结缕草,通过SMART技术构建了高容量的酵母杂交cDNA文库。质量检测结果显示:次级文库库容为4.0×10^(6)cfu·mL^(-1),总克隆数为1.6×10^(7),重组率>95%。最终获得的Y187酵母文库工作液细胞密度为3×10^(7)cells·mL^(-1),插入片段具有良好的多态性。以日本结缕草类胡萝卜素裂解双加氧酶ZjCCD7作为诱饵,从构建的酵母文库中筛选到一个与ZjCCD7互作的蛋白ZjatpG,证明该文库质量较高,符合酵母杂交筛选试验标准,可适用于调控和互作蛋白筛选。本研究为筛选日本结缕草的互作蛋白以及基因功能研究提供了基础。

关键词：日本结缕草酵母文库 SMART技术

冬瓜均一化酵母双杂交cDNA文库的构建及鉴定

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广东农业科学 2021年第8期48卷 58-64页

作者：陈凤闫晋强李梅兰江彪山西农业大学园艺学院山西晋中030801 广东省农业科学院蔬菜研究所/广东省蔬菜新技术研究重点实验室广东广州510640

【目的】通过构建冬瓜酵母双杂交cDNA文库,为开展冬瓜基因功能研究提供技术支撑。【方法】以冬瓜高代自交系B227(冬瓜参考基因组测序材料)的根、茎、叶、雄花、嫩果等不同组织为材料,利用CTAB法提取RNA、分离纯化获得mRNA并进行双链cDN... 详细信息

【目的】通过构建冬瓜酵母双杂交cDNA文库,为开展冬瓜基因功能研究提供技术支撑。【方法】以冬瓜高代自交系B227(冬瓜参考基因组测序材料)的根、茎、叶、雄花、嫩果等不同组织为材料,利用CTAB法提取RNA、分离纯化获得mRNA并进行双链cDNA合成和DSN均一化处理后,与pDONR222载体进行BP重组反应,转化大肠杆菌DH10B感受态细胞,构建初级文库;提取初级文库质粒,与pGADT7-DEST载体通过LR重组反应,转化大肠杆菌DH10B感受态细胞,构建酵母杂交cDNA次级文库。利用倍比稀释法计算文库库容量,并通过菌落PCR计算文库重组率和插入片段的大小。【结果】初级文库库容量为8.24×10^(6) CFU,冬瓜均一化酵母双杂交次级cDNA文库库容量为1.03×10^(7) CFU;次级文库中插入片段主要集中在850~3000 bp,重组率为100%,具有良好的多态性。【结论】成功构建了冬瓜均一化酵母双杂交cDNA文库,文库完整性较高、质量较好,符合酵母双杂交实验要求,可应用于后续相关基因产物互作蛋白的筛选等试验,为冬瓜基因功能研究提供前提条件。

关键词：冬瓜 DSN均一化 cDNA文库酵母文库

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甘蓝BoPID基因的克隆与分析

园艺学报 2021年第6期48卷 1123-1134页

作者：张贺翠王玉奎左同鸿刘倩莹张以忠胡燈科谢琴琴朱利泉西南大学农学与生物科技学院重庆400715

在通过酵母双杂交文库获得了与钙响应蛋白BoSPx相互作用蛋白BoPID的基础上,对BoPID的编码基因进行了克隆、时空特异性表达分析及筛选与其互作的蛋白,以期为BoSPx通过BoPID参与自交不亲和性分子过程提供依据。结果表明,BoPID包含2个外显... 详细信息

在通过酵母双杂交文库获得了与钙响应蛋白BoSPx相互作用蛋白BoPID的基础上,对BoPID的编码基因进行了克隆、时空特异性表达分析及筛选与其互作的蛋白,以期为BoSPx通过BoPID参与自交不亲和性分子过程提供依据。结果表明,BoPID包含2个外显子和1个内含子,编码439个氨基酸。激酶磷酸化预测分析显示具有激酶活性;系统进化和共线性分析显示BoPID具有较强的植物种属特异性,与芜菁、拟南芥和甘蓝型油菜等十字花科植物聚类在一起,BoPID与AtPID在染色体水平上高度同源。组织特异性表达分析显示BoPID在柱头中的表达量高于花器官中的其他部位。荧光定量PCR分析表明BoPID在甘蓝柱头自花授粉15 min显著上调表达,而后下调表达。启动子元件分析发现BoPID含有ABA、IAA、脱落酸、茉莉酸、水杨酸和胁迫响应等多个应答元件。BoPID蛋白定位于细胞膜和细胞质中,可能是一种泊位于膜上并突触于胞质中的双栖蛋白。酵母双杂交和GST-Pulldown结果表明BoPID与BoCML12、BoCaM2、BoPIN1能够发生相互作用。BoPID可能是BoSPx与Bo CML12、BoCaM2之间相互作用的桥梁蛋白,共同通过生长素调节钙响应的方式参与了自交不亲和分子过程。

关键词：甘蓝酵母文库自花授粉 BoSPx BoPID

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槟榔黄叶病毒1外壳蛋白的互作蛋白筛选

分子植物育种 2024年第12期22卷 3912-3921页

作者：邢增宇赵瑞白曹先梅王洪星海南大学三亚南繁研究院三亚572024 海南大学林学院海口570228

为明确槟榔黄化病致病机理,探究槟榔黄叶病毒1(areca palm leaf yellowing virus 1,APLYV 1)病毒与宿主蛋白之间相互作用的机制,本研究以槟榔叶片为材料,构建槟榔cDNA酵母双杂交文库,以APLYV 1的外壳蛋白(coat protein,CP)为诱饵,构建... 详细信息

为明确槟榔黄化病致病机理,探究槟榔黄叶病毒1(areca palm leaf yellowing virus 1,APLYV 1)病毒与宿主蛋白之间相互作用的机制,本研究以槟榔叶片为材料,构建槟榔cDNA酵母双杂交文库,以APLYV 1的外壳蛋白(coat protein,CP)为诱饵,构建诱饵载体pGBKT7-CP,采用酵母双杂交技术,从槟榔cDNA文库中筛选与其互作的蛋白。结果表明,成功构建槟榔酵母文库,文库容量达1.1×10^(7)以上,重组率为100%,插入片段平均长度>1000 bp。成功构建诱饵载体pGBKT7-CP,通过自激活实验检验,阳性对照在四缺培养基平板上能正常长菌且显蓝,阴性对照和实验组在二缺培养基平板上能正常长菌,在三缺和四缺培养基平板上未长菌,表示构建成功的重组诱饵载体无自激活活性,可用于筛库实验。共筛选出13个阳性克隆,经NCBI网站与槟榔转录组库进行比对,最终得到10个候选槟榔蛋白,包含sHSP(small Heat Shock Protein)与DnaJ蛋白等。选择DnaJ蛋白,通过理化性质分析和蛋白二级结构预测,发现该槟榔基因全长1035 bp,蛋白理论分子量为37.9 kD,等电点pI约为5.05,疏水性蛋白,其二级结构由无规则卷曲(49.13%)和α-螺旋(25.87%)构成,不存在信号肽,无跨膜结构域,主要定位在细胞核内。本研究结果为进一步研究APLYV 1蛋白功能和表达调控机制提供依据。

关键词：槟榔黄叶病毒1 酵母文库蛋白互作外壳蛋白CP 热休克蛋白

小麦及其近缘种属中抗白粉病基因及关键调控因子的挖掘与验证

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小麦及其近缘种属中抗白粉病基因及关键调控因子的挖掘与验证

作者：王娇娇烟台大学

学位级别：硕士

小麦是世界上重要的粮食作物之一,由禾本科布氏白粉病菌(Blumeria graminis *** tritici,Bgt)引起的小麦白粉病严重威胁着小麦的产量和品质。利用寄主抗性是控制该病害最为经济、有效、环保的措施。明确现有小麦种质资源的白粉病抗性及... 详细信息

小麦是世界上重要的粮食作物之一,由禾本科布氏白粉病菌(Blumeria graminis *** tritici,Bgt)引起的小麦白粉病严重威胁着小麦的产量和品质。利用寄主抗性是控制该病害最为经济、有效、环保的措施。明确现有小麦种质资源的白粉病抗性及抗病基因组成、发掘新的抗病基因或关键调控因子可为小麦抗病新品种的选育提供理论依据。本研究一方面系统评价了137份小麦近缘种属材料的白粉病抗性及抗病基因组成;另一方面对多个分离群体进行了批量化混池转录组测序(Bulked-segregang RNA-sequencing,BSR-Seq),发掘了一个抗白粉病通路上的关键调控因子。具体研究成果如下:(1)小麦近缘种属抗白粉病基因的评估本研究系统评价了137份小麦近缘种属的白粉病抗性及抗病基因组成,包括53份一粒小麦(Triticum monococcum L.)、6份乌拉尔图小麦(Triticum Urartu Thumanjan ex Gandilyan),9份提莫菲维小麦(Triticum timopheevii Zhuk),3份拟斯卑尔脱山羊草(Aegilops Speltoides),以及66份斯卑尔脱小麦(Triticum aestivum ***)。在137份材料中,83份(60.58%)在苗期对白粉菌株E09表现抗性,116份(84.67%)在成株期对白粉菌混合生理小种表现抗性,表明大多数材料对白粉病产生较高的抗性。随后,利用23个已知抗白粉病基因的31个标记对137份材料进行了检测,结果只检测到Pm2、Pm4、Pm6、Pm58和Pm68。在4个斯卑尔脱小麦中发现了3个Pm4的等位基因(Pm4a、Pm4b和Pm4f)。q RT-PCR进一步证实了Pm4等位基因在这4个材料中的抗病作用。然后,通过系统进化树分析表明Pm4和Pm24、Sr62存在较近的亲缘关系。本研究不仅为选育抗病小麦新品种提供了参考信息和宝贵的种质资源,也为丰富小麦抗白粉病遗传资源奠定了基础。(2)小麦抗白粉病调控因子的挖掘与功能鉴定本研究通过将抗病小麦449R2、66、MYC、TA5886分别与感病材料中国春、烟农1212、N24、济麦60构建分离群体,将抗感亲本与抗感池进行BSR-Seq测序获得DEGs,并对DEGs进行GO和KEGG富集分析,结合功能注释选取与抗病相关的基因利用q RT-PCR分析表达模式,结果表明有6个基因在接种白粉菌株E09之后在抗感亲本中存在显著差异,其中编码钙结合蛋白的Traes CS7A02G516700.1和Traes CS7A02G516900.1在接菌后显著上调,后续通过克隆比对序列发现基因Traes CS7A02G516900.1在抗病材料449R2中发生10个碱基突变,使得4个氨基酸变异,通过蛋白预测发现该突变蛋白疏水性和等电点提高。然后,利用沉默技术沉默该基因,结果显示沉默后的材料对白粉病抗性显著降低。随后,利用酵母文库筛选出50个互作蛋白,并选择抗病相关基因进行验证发现有4个相互作用的蛋白质。本研究通过挖掘抗白粉病相关调控因子可为解析抗病机制、分析小麦白粉菌互作提供了新的研究方向。

关键词：小麦近缘种属抗白粉病基因植物-病原体互作基因沉默酵母文库