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科学通报 1980年第9期25卷 412-413页

1965年Holley等发表了世界上第一个核酸——酵母丙氨酸转移核糖核酸的一级结构。经以后工作者的验证,该分子由76个核苷酸组成,其中含有七种稀有核苷酸(图1)。在完成了

关键词：酵母丙氨酸转移核糖核酸纸电泳核糖核酸酶分子

酵母丙氨酸转移核糖核酸3′-半分子(36—76)的合成

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中国科学(B辑化学生物学农学医学地学) 1983年第5期 399-409页

作者：王德宝裘慕绥梁镇和郑可沁吴仁龙汪成尧刘新垣郑宏大包永德朱心良郭礼和陈雅娣黄敬坚周风仪陈海宝徐保中张其玖华陵胡美浩中国科学院上海生物化学研究所中国科学院上海细胞生物学研究所中国科学院上海有机化学研究所中国科学院生物物理研究所北京大学生物系北京

本文报告用T4RNA连接酶将相应于酵母丙氨酸转移核糖核酸(tRNAyAla)3′-半分子（36—76）的三个寡核昔酸大片段——10（36—45）（Ⅰ）,12（46—57）（Ⅱ）和19p（58—76）（Ⅲ）——从3′-端向5′-端延伸逐个连接合成了这个tRNA的3′-... 详细信息

本文报告用T4RNA连接酶将相应于酵母丙氨酸转移核糖核酸(tRNAyAla)3′-半分子（36—76）的三个寡核昔酸大片段——10（36—45）（Ⅰ）,12（46—57）（Ⅱ）和19p（58—76）（Ⅲ）——从3′-端向5′-端延伸逐个连接合成了这个tRNA的3′-半分子（36—76）。首先在供受体配比为1:1.5的情况下,采取三步连续反应,即19p（Ⅲ）的5′-磷酸化,然后与12（Ⅱ）的连接和连接反应产物的5′-磷酸化等反应,一次制备分离的方法,以70％的总得率合成了5′-磷酸化的三十一核苷酸（46—76）（Ⅳ）。然后,以（Ⅳ）作为下一步反应的供体和三倍量的10（Ⅰ）连接,以67％的产率合成了具有四十一核苷酸的tRNAyAla的3′-半分子（36—76）（Ⅴ）。将这个合成的3′-半分子,5′-磷酸化以后,与天然的5′-半分子连接,人工半合成了tRNAyAla整分子,经生物活力测定,这个人工半合成的tRNAyAla具有接受[3H]-丙氨酸、并能将接受的丙氨酸转移到蛋白质分子中去的生物活力。

关键词：核昔酸磷酸化分子酵母丙氨酸转移核糖核酸

酵母丙氨酸转移核糖核酸中十三核苷酸(23～35)类似物(CpGpCpGpCpUpCpCpCpUpUpIpGp)的合成

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Acta Biochimica et Biophysica Sinica 1984年第1期 93-97页

作者：吴仁龙毛敏伟包俊茹梁镇和汪成尧陈常庆中国科学院上海生物化学研究所沈阳药学院生化教研室

本文报道了利用酶促合成的方法（RNase N1和T4 RNA连接酶）合成了酵母丙氨酸转移核糖核酸分子中第23位到第35位的十三核苷酸的类似物CpGpCpGpCpUpCpCpCpUpUpIp-Gp（天然酵母丙氨酸tRNA中第26位是m22G）。CpGpCpG是由CpG>p和CpG经RNase N... 详细信息

本文报道了利用酶促合成的方法（RNase N1和T4 RNA连接酶）合成了酵母丙氨酸转移核糖核酸分子中第23位到第35位的十三核苷酸的类似物CpGpCpGpCpUpCpCpCpUpUpIp-Gp（天然酵母丙氨酸tRNA中第26位是m22G）。CpGpCpG是由CpG>p和CpG经RNase N1酶催化合成的,产率为20%。十三核苷酸CpGpCpGpCpUpCpCpCpUpUpIpGp的合成是由T4 RNA连接酶催化CpGpCpG与pCpUpCpCpCpUpUpIpGp之间的连接反应实现的,产率为80%。产物经双向电泳层析分析为一点,用蛇毒磷酸二酯酶部分酶解后的双向图谱分析证明十三核苷酸的核苷酸排列顺序正确。

关键词：酵母丙氨酸转移核糖核酸 CpGpCpGpCpUpCpCpCpUpUpIpGp 双向电泳核昔酸层析分析纸电泳三核苷酸 tRNA 酶解类似物同型物

多核苷酸合成的研究——Ⅰ.酶促合成酵母丙氨酸转移核糖核酸3′-端接受茎区八核苷七磷酸CpUpCpGpUpCpCpA

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Acta Biochimica et Biophysica Sinica 1978年第2期 127-141页

作者： THE NUCLEIC ACID SYNTHESIS GROUP, SECOND LABORATORY, SHANGHAI INSTITUTE OF BIOCHEMISTRY, ACADEMIA SINICA 中国科学院上海生物化学研究所二室核酸合成组

本文报道了用RNase N1（核糖核酸酶、鸟嘌呤核苷酸-2’-移换酶,Neurospora Crassa,E.C.2.***.7.26）连接CpUpCpG>p与UpCpCpA合成酵母丙氨酸转移核糖核酸3’-端接受茎区八核苷七磷酸GpUpCpGpupCpCpA。反应条件包括:供体（CpUpCpG>p）,0.07～0.09M;受体（UpCpCpA）浓度为供体浓度的三至七倍;RNase N1,每毫升250单位;pH7.5磷酸缓冲液,0.1M;0°±2℃反应48小时。在这一反应中,CpUpCpGpUpCpCpA的产率随着受体与供体的克分子比例的增大而升高,当这一比例超过6,产率超过30%。本方法一次可得到纯的CpUpCpGpUpCpCpA数毫克。关于从最终产物中除去RNase N1的问题,我们发现在pH3.5条件下进行DEAESephadexA-25（Cl-型）柱层析或用pH2.7条件下的纸电泳法均可得到较满意的效果。当把反应物在6M NH4OH,0.04M DTP,37℃保温15分钟,或者在pH7.4 Tris-HCl缓冲液和0.04MDTP,0℃保温7小时以后,RNase N1即完全失活。可是,一旦除去上述DTP等抑制条件以后,失活后的RNase N1在空气中可以逐步恢复其大部分活力。在我们的实验中没有向反应物中加入0.1%的明胶蛋白,很可能底物本身对RNase N1具有一定的保护作用。在合成CpUpCpGpUpCpCpA的同时,我们还用RNase N1合成了GpC,GpΨ,GpU,GpUp,GpUpCpC及CpUpCpGpUpCpC等寡核苷酸,并且都得到了较好的产率。对RNase N1酶促合成CpUpCpGpUpCpCpA反应中产生的几个付产物进行了分离纯化和初步鉴定。

关键词：产物失活核昔酸 CpUpCpGpUpCpCpA 纸电泳法柱层析法缓冲液反应 DEAE 生物化学与生物物理学报酵母丙氨酸转移核糖核酸 DTP 层析色层分析中国科学院上海生物化学研究所 RNase 磷酸磷化合物

人工合成的酵母丙氨酸转移核糖核酸的生物活力测定

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中国科学:化学 1983年第5期 418-424页

作者：申庆祥余允华张孝勇郭礼和匡达人包俊茹谌章群中国科学院上海生物化学研究所中国科学院上海细胞生物学研究所

本文报道了用一种高灵敏度的方法测定人工合成的酵母丙氨酸转移核糖核酸(tRNA)的生物活力。tRNA在大鼠肝氨酰基tRNA合成酶的催化下接受丙氨酸后,用操作简便而回收率较高的酒精沉淀法回收氨酰化产物,最后,在兔网织红细胞裂解液无细胞蛋... 详细信息

本文报道了用一种高灵敏度的方法测定人工合成的酵母丙氨酸转移核糖核酸(tRNA)的生物活力。tRNA在大鼠肝氨酰基tRNA合成酶的催化下接受丙氨酸后,用操作简便而回收率较高的酒精沉淀法回收氨酰化产物,最后,在兔网织红细胞裂解液无细胞蛋白合成体系中,测定氨酰化产物中的丙氨酸转移到蛋白质中去的能力——参入活力。这方法不仅可以测定分离纯化的tRNA的活力,而且也可以测定经TRNA连接酶连接两个半分子后的反应混合物中产物tRNA的活力。利用这方法,已成功地测定了微至5—7 pmoles的人工全合成tRNA的接受活力和参入活力两组数据。测定结果表明,全合成tRNA的接受活力是天然分子的51.6—65.6％,是经拆合的天然分子的91.3—106.0％。其氨酰化产物中的[H]-Ala在兔网织红细胞裂解液中的利用率为61.6—63.1％,是天然分子的90.6—91.7％,是经拆合的天然分子的97.2—115.8％。

关键词：活力测定合成体系酵母丙氨酸转移核糖核酸细胞蛋白人工合成

多核苷酸合成的研究 Ⅺ.酵母丙氨酸转移核糖核酸5′-端半分子中含N,N-二甲基鸟苷的四核苷三磷酸（CpGpCpm2～2G）的合成

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Acta Biochimica et Biophysica Sinica 1980年第1期 87-92页

作者： THE NUCLEIC ACID SYNTHESIS GROUP, SECOND LABORATORY, SHANGHAI INSTITUTE OF BIOCHEMISTRY, ACADEMIA SINICA 中国科学院上海生物化学研究所二室核酸合成组

(1)参照已报道方法,从鸟苷合成了N,N-二甲基鸟苷（m2～2G）。（2）N、2′、5′-O-三苯甲酰胞苷酸[BzCBz（OBz）p],与2′、3′-O-二乙酰基-N,N-二甲基鸟苷[m2～2（OAc）2]经DCC缩合,脱去保护基后可分离出胞苷酰-（3′→5′）-N,N-二甲基... 详细信息

(1)参照已报道方法,从鸟苷合成了N,N-二甲基鸟苷（m2～2G）。（2）N、2′、5′-O-三苯甲酰胞苷酸[BzCBz（OBz）p],与2′、3′-O-二乙酰基-N,N-二甲基鸟苷[m2～2（OAc）2]经DCC缩合,脱去保护基后可分离出胞苷酰-（3′→5′）-N,N-二甲基鸟苷（Cpm2～2G）。（3）BzCBz（OBz）p与N-二甲基氨基甲叉鸟苷酸(GPDMM),用DCC缩合,脱保护基后可得到胞苷酰-（3′→5′）-鸟苷-2′,3′-环状磷酸（CpG>p）。（4）用RNase N1（E.C.2.***.7.26）催化CpG>p与Cpm2～2G反应生成26%产率的CpGpCpm2～2G。经纯化后产物不含酶,用RNase N1水解得到等克分子的CpGp+CpG>p和Cpm2～2G,碱解可分离出Cp（2′+3′）,Gp（2′+3′）及m2～2G,克分子比为2.07:1.0:1.1。

关键词：中国科学院上海生物化学研究所鸟苷 N,N 核苷三磷酸二甲基二烷基生物化学与生物物理学报克分子比保护基分离条件柱层析分离酵母丙氨酸转移核糖核酸分子

多核苷酸合成的研究——酵母丙氨酸转移核糖核酸3′端CpGpGpA32pCpUpCpGpUpCpCpA核糖十二核苷十一磷酸及ApUpUpC32pCpGpGpA32pCpUpCpGpUpCpCpA核糖十六核苷十五磷酸的合成

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中国科学 1978年第6期 679-686页

作者：人工合成核酸协作组

本文以特定顺序的寡核糖核苷酸片段为材料,着重对RNA连接酶连接反应的苌些条件进行了探索.在此基础上以32pCpUpCpGpUpCpCpA1)为供体,CpGpGpA为受体,用较低的受体分子过量倍数,成功地合成了酵母丙氨酸转移核糖核酸3′端CpGpGpA32pCpUpCpG... 详细信息

本文以特定顺序的寡核糖核苷酸片段为材料,着重对RNA连接酶连接反应的苌些条件进行了探索.在此基础上以32pCpUpCpGpUpCpCpA1)为供体,CpGpGpA为受体,用较低的受体分子过量倍数,成功地合成了酵母丙氨酸转移核糖核酸3′端CpGpGpA32pCpUpCpGpUpCpCpA核糖十二核苷酸,产率和产物纯度都在90％以上.进一步以32pCpGpGpA32pCpUpCpGpUpCpCpA为供体,以ApUpUpCp为受体,合成了3′端ApUpUpC32pCpGpGpA32pCpUpCpGpUpCpCpA核糖十六核苷酸,产率为60％.

关键词：核糖戊糖碱基组成 C_pG_pG_pA pC_pG_pG_pA pC_pU_pC_pG_pU_pC_pC_pA A_pU_pU_pC 受体分子酵母丙氨酸转移核糖核酸电泳层析法磷酸磷化合物

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漫谈酵母丙氨酸转移核糖核酸的人工合成

化学通报 1982年第12期 28-33页

作者：陈常庆中国科学院上海生物化学研究所

1981年11月19日,由中国科学院上海生物化学研究所、细胞生物研究所、有机化学研究所、北京生物物理研究所、北京大学生物系和上海试剂二厂等六个单位共同协作完成了酵母丙氨酸转移核糖核酸(简称酵母丙氨酸 tRNA)的

关键词：连接酶丙氨酸合成酶 α-氨基丙酸核糖核酸酶 tRNA mRNA 核昔酸酵母丙氨酸转移核糖核酸核酸分子大分子结构基因全合成合成产物

多核苷酸合成的研究 Ⅴ.酵母丙氨酸转移核糖核酸3′-端半分子反密码区GpCpm~1Ipψ的合成

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Acta Biochimica et Biophysica Sinica 1978年第2期 175-183页

作者： THE NUCLEIC ACID SYNTHESIS GROUP, SECOND LABORATORY, SHANGHAI INSTITUTE OF BIOCHEMISTRY, ACADEMIA SINICA 中国科学院上海生物化学研究所二室核酸合成组

本文报道用化学方法合成酵母丙氨酸转移核糖核酸3’-端半分子反密码区中的GpCpm1IpΨ四核苷三磷酸片段。合成路线是由HoΨBz（OBz）2开始,采用逐个伸长的方式,依次同保护单核苷酸MMTm1I（OBz）-p,MMTCBz（OBz）-p和iBuGiBu（OiBu）-p缩... 详细信息

本文报道用化学方法合成酵母丙氨酸转移核糖核酸3’-端半分子反密码区中的GpCpm1IpΨ四核苷三磷酸片段。合成路线是由HoΨBz（OBz）2开始,采用逐个伸长的方式,依次同保护单核苷酸MMTm1I（OBz）-p,MMTCBz（OBz）-p和iBuGiBu（OiBu）-p缩合得到全酰化的保护四核苷三磷酸,最后用NH3/甲醇溶液脱去全部酰基保护基并经柱层析分离纯化得GpCpm1IpΨ。所用缩合剂均为DCC。纯化后的GpCpm1IpΨ层析电泳鉴定均一,碱解和酶解得到预期的核苷酸组成比例。

关键词：层析溶剂小体积反密码保护基酵母丙氨酸转移核糖核酸减压浓缩柱层析分离 GpCpm~1Ip 分子

多核苷酸合成的研究——ⅩⅢ.酵母丙氨酸转移核糖核酸3′端半分子中Cpm~1IpψpG的酶促合成

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Acta Biochimica et Biophysica Sinica 1981年第1期 35-40页

作者： THE NUCLEIC ACID SYNTHESIS GROUP, SECOND LABORATORY, SHANGHAI INSTITUTE OF BIOCHEMISTRY, ACADEMIA SINICA 中国科学院上海生物化学研究所二室核酸合成组

本文报道了酵母丙氨酸转移核糖核酸3′端半分子反密码区的四核苷酸片段Cpm1IpψpG的合成。先以Cpm1Ipψ为引物,GDP为底物,在PNPase和RNase T1两个酶的协同作用下,生成Cpm1IpψpGp,对应用这两个酶进行合成的规律作了摸索与归纳,使合成Cpm... 详细信息

本文报道了酵母丙氨酸转移核糖核酸3′端半分子反密码区的四核苷酸片段Cpm1IpψpG的合成。先以Cpm1Ipψ为引物,GDP为底物,在PNPase和RNase T1两个酶的协同作用下,生成Cpm1IpψpGp,对应用这两个酶进行合成的规律作了摸索与归纳,使合成Cpm1IpψpGp的产率达到90%以上,它再经固定化碱性磷酸单酯酶脱磷得到Cpm1IpψpG,脱磷率达到98%,此工作通过合成方法旁证了RNase T1不水解mIp-N键。

关键词：酵母丙氨酸转移核糖核酸引物底物人工合成 Cpm~1Ip pG 分子酶促合成