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毛囊黑素细胞酪氨酸酶及相关蛋白1和2等分化标记分子的研究

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临床皮肤科杂志 2003年第6期32卷 318-320页

作者：谭城朱文元鲁严南京医科大学第一附属医院皮肤科江苏南京210029

目的:研究毛囊黑素细胞生物学特性,特别是与黑素合成相关酶蛋白和黑素小体结构蛋白在毛囊中的表达及分布情况。方法:取正常人头皮,采用HMB-45和识别酪氨酸酶(TYR)、酪氨酸酶相关蛋白1(TRP1)、酪氨酸酶相关蛋白2(TRP2)等抗体免疫组化染... 详细信息

目的:研究毛囊黑素细胞生物学特性,特别是与黑素合成相关酶蛋白和黑素小体结构蛋白在毛囊中的表达及分布情况。方法:取正常人头皮,采用HMB-45和识别酪氨酸酶(TYR)、酪氨酸酶相关蛋白1(TRP1)、酪氨酸酶相关蛋白2(TRP2)等抗体免疫组化染色黑素细胞,研究毛囊中黑素细胞的分布、形态及TYR、TRP1和TRP2等黑素细胞分化标记分子的表达情况。结果:有功能的黑素细胞位于毛漏斗部基底层和生长期毛母质内接近毛乳头处,毛母质黑素细胞树突计数均值为5.1,高于表皮黑素细胞(P0.05)。结论:毛囊中有活性的黑素细胞主要位于毛球和毛漏斗部,它们均表达黑素细胞分化标记抗原gp100、TYR、TRP1和TRP2。而且毛母质黑素细胞前3种分子表达量高于表皮黑素细胞。

关键词：毛囊黑素细胞酪氨酸酶酪氨酸酶相关蛋白1 酪氨酸酶相关蛋白2

异种黑色素瘤相关抗原诱发抗肿瘤免疫伴发自身免疫性损伤

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中华医学杂志 2005年第23期85卷 1596-1600页

作者：谭晓华万永红北京军区总医院肿瘤诊疗中心 100700 加拿大麦克玛斯特大学病理分子医学系基因治疗中心

目的探讨腺病毒载体(Ad)介导异种黑色素瘤相关抗原酪氨酸酶相关蛋白2(TRP2)诱发抗肿瘤免疫与自身免疫性损伤的关系。方法用Ad编码的人或小鼠TRP2(AdhTRP2或AdmTRP2)皮内免疫C57BL/6小鼠,将小鼠分为正常对照组(d1703)、AdhTRP2和AdmTRP2... 详细信息

目的探讨腺病毒载体(Ad)介导异种黑色素瘤相关抗原酪氨酸酶相关蛋白2(TRP2)诱发抗肿瘤免疫与自身免疫性损伤的关系。方法用Ad编码的人或小鼠TRP2(AdhTRP2或AdmTRP2)皮内免疫C57BL/6小鼠,将小鼠分为正常对照组(d1703)、AdhTRP2和AdmTRP2免疫组。体内细胞毒性T淋巴细胞(CTL)杀伤试验和细胞内干扰素γ(IFNγ)染色(ICS)分析CTL杀伤活性和IFN-γ的产生(每组3只小鼠);皮下接种B16.F10黑色素瘤细胞(每组10只小鼠),观察荷瘤小鼠成活情况。结果AdhTRP2诱发小鼠CTL杀伤活性与免疫时间相关,免疫后1周活性达到最大,随后逐渐降低;AdhTRP2诱导的CTL杀伤活性具有剂量效应关系。AdhTRP2免疫小鼠1周其6hCTL杀伤率为94%±5%,脾脏产生IFNγ的CD8+T细胞占总CD8+T细胞的0.87%±0.12%,而相应地AdmTRP2分别为22%±8%和0.15%±0.05%。接种1×106B16.F10细胞,AdhTRP2免疫的小鼠观察3个月100%无瘤生长,但在病毒注射部位有白癜风形成;而接种1×105B16.F10细胞的AdmTRP2免疫小鼠3个月只有20%的成活率,并不伴局部白癜风形成。结论用Ad介导异种TRP2能有效地打破对自身TRP2的免疫耐受,诱发强烈的抗原特异性细胞免疫反应,同时伴发自身免疫性损伤。

关键词：异种黑色素瘤相关抗原诱发抗肿瘤免疫自身免疫性损伤酪氨酸酶相关蛋白2

负载抗原肽的树突状细胞增强腺病毒载体介导hTRP2诱发抗小鼠黑色素瘤免疫

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中华肿瘤杂志 2006年第9期28卷 658-661页

作者：谭晓华刘畅万永红北京军区总医院血液科 100700 加拿大麦克玛斯特大学病理分子医学系基因治疗中心

目的探讨人黑色素瘤相关抗原TRP2(hTRP2)MHCⅠ多肽TRP2p180-188 (SVYDFFVWL)修饰小鼠骨髓来源的树突状细胞(DC),增强腺病毒载体介导hTRP2(Ad hTRP2)诱发的抗小鼠黑色素瘤免疫效果。方法Ad hTRP2免疫C57BL／6小鼠,3周后分别用Ad hTRP2或D... 详细信息

目的探讨人黑色素瘤相关抗原TRP2(hTRP2)MHCⅠ多肽TRP2p180-188 (SVYDFFVWL)修饰小鼠骨髓来源的树突状细胞(DC),增强腺病毒载体介导hTRP2(Ad hTRP2)诱发的抗小鼠黑色素瘤免疫效果。方法Ad hTRP2免疫C57BL／6小鼠,3周后分别用Ad hTRP2或DC／SVYDFFVWL再免疫一次。用体内细胞毒性T淋巴细胞(CTL)杀伤实验和细胞内IFNγ染色(ICS)分析CTL杀伤活性和IFNγ的产生;或给免疫小鼠皮下接种B16．F10细胞,观察荷瘤小鼠的成活情况。结果测定脾脏中6 h CTL杀伤率和产生IFNγ的CD8+T细胞比例,结果分别是:Ad hTRP2(初免)- Ad hTRP2(加强)组为68．40％±5．50％和0．67％±0．16％,DC／SVYDFFVWL(初免)-DC／SVYDFFVWL(加强)组为28．50％±6．40％和0．22％±0．07％,而Ad hTRP2(初免)-DC／SVYDFFVWL(加强)组为98．90％±0．90％和1．05％±0．21％。荷瘤实验显示,小鼠接种1×106 B16．F10细胞后3个月,DC／SVYDFFVWL(初免)-DC／SVYDFFVWL(加强)组小鼠无一成活,Ad hTRP2(初免)-Ad hTRP2(加强)组只有40％的小鼠存活,而Ad hTRP2(初免)-DC／SVYDFFVWL(加强)组小鼠100％存活。结论用DC／SVYDFFVWL加强免疫能显著地增强Ad hTRP2初次免疫的效果,表明Ad hTRP2(初免)-DC／SVYDFFVWL(加强)免疫是一种克服重复应用腺病毒并不能提高抗肿瘤免疫效应的有效方式。

关键词：腺病毒载体树突状细胞酪氨酸酶相关蛋白2 抗原肽初免-加强免疫方式

非洲爪蟾TGF-β5和小鼠TRP-2联合免疫诱导抗原特异性CTLs

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免疫学杂志 2004年第3期20卷 165-168页

作者：贾正才吴玉章邹丽云倪兵周伟第三军医大学基础部全军免疫学研究所重庆400038

目的　研究非洲爪蟾转化生长因子 β5 (aTGF β5 )基因免疫是否能增强肿瘤治疗性DNA疫苗诱导抗原特异性细胞毒性T淋巴细胞的能力。方法　构建编码小鼠肿瘤抗原酪氨酸酶相关蛋白 2 (mTRP 2 )的真核表达质粒 ,与aTGF β5真核表达质粒联... 详细信息

目的　研究非洲爪蟾转化生长因子 β5 (aTGF β5 )基因免疫是否能增强肿瘤治疗性DNA疫苗诱导抗原特异性细胞毒性T淋巴细胞的能力。方法　构建编码小鼠肿瘤抗原酪氨酸酶相关蛋白 2 (mTRP 2 )的真核表达质粒 ,与aTGF β5真核表达质粒联合免疫C5 6BL 6小鼠 ,采用标准51 Cr释放试验检测抗原特异性细胞毒性T淋巴细胞的诱导。结果　aTGF β5和mTRP 2联合免疫可在体外诱导H 2Kb 限制的mTRP 2 aa1 80 - 1 88特异性细胞毒性T淋巴细胞产生。结论　aTGF

关键词：转化生长因子-β 酪氨酸酶相关蛋白2 DNA疫苗细胞毒性T淋巴细胞肿瘤

非洲爪蟾TGF-β5和小鼠TRP-2联合免疫诱导产生抗肿瘤免疫应答

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第三军医大学学报 2005年第3期27卷 189-191页

作者：贾正才吴玉章邹丽云万瑛吕燕波第三军医大学基础医学部全军免疫学研究所重庆400038

目的　研究非洲爪蟾转化生长因子 β5 (aTGF β5 )基因免疫对肿瘤治疗性质粒DNA疫苗诱导抗肿瘤免疫应答的效能的影响 ,探讨所诱导免疫应答的抗肿瘤机制。方法　用aTGF β5真核表达质粒和小鼠酪氨酸酶相关蛋白 2 (mTRP 2 )真核表达质粒... 详细信息

目的　研究非洲爪蟾转化生长因子 β5 (aTGF β5 )基因免疫对肿瘤治疗性质粒DNA疫苗诱导抗肿瘤免疫应答的效能的影响 ,探讨所诱导免疫应答的抗肿瘤机制。方法　用aTGF β5真核表达质粒和小鼠酪氨酸酶相关蛋白 2 (mTRP 2 )真核表达质粒联合免疫野生型C5 7BL/6小鼠、CD4缺陷的C5 7BL/6小鼠和CD8缺陷的C5 7BL/6小鼠 ,于免疫前或免疫后接种黑色素瘤细胞B16F10 ,观测肿瘤生长和小鼠存活情况。结果　两种质粒联合免疫能在野生型C5 7BL/6小鼠体内诱导产生保护性和治疗性抗肿瘤免疫 ,而mTRP 2真核表达质粒单独免疫野生型C5 7BL/6小鼠及两种质粒联合免疫CD4或CD8缺陷的C5 7BL/6小鼠均不能诱导产生抗肿瘤免疫应答。结论　aTGF β5基因免疫能增强编码mTRP 2的肿瘤治疗性质粒DNA疫苗诱导抗肿瘤免疫应答的能力 ;T细胞免疫应答的诱导是抗小鼠黑色素瘤免疫应答所必需的。

关键词：转化生长因子—β DNA疫苗酪氨酸酶相关蛋白2 细胞毒性T淋巴细胞肿瘤

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中药何首乌促进黑色素生成的作用机理研究

南京中医药大学学报 2010年第3期26卷 190-192,I0001,I0002页

作者：姜泽群吴琼徐继敏何光源华中科技大学生命学院湖北武汉430074

目的研究中药何首乌在B16黑素瘤细胞中促进黑色素生成的作用机理。方法用MTT法、多巴氧化法及NaOH裂解法测定何首乌对细胞增殖、酪氨酸酶活性及黑素合成的影响。RT-PCR和Western blotting法分别检测何首乌作用前后酪氨酸酶、小眼相关转... 详细信息

目的研究中药何首乌在B16黑素瘤细胞中促进黑色素生成的作用机理。方法用MTT法、多巴氧化法及NaOH裂解法测定何首乌对细胞增殖、酪氨酸酶活性及黑素合成的影响。RT-PCR和Western blotting法分别检测何首乌作用前后酪氨酸酶、小眼相关转录因子(MITF),酪氨酸酶相关蛋白1(TRP-1)和酪氨酸酶相关蛋白2(TRP-2)基因表达和蛋白合成的变化。结果随何首乌加药浓度的增大,细胞增殖率、酪氨酸酶活性和黑素合成能力明显增强;何首乌可明显促进酪氨酸酶和MITF的基因表达和蛋白合成,但对TRP-1、TRP-2的表达几乎没有影响。结论何首乌在体外能显著刺激B16细胞中黑色素的生成,上述变化可能是通过促进酪氨酸酶和MITF的基因表达和蛋白合成以及激活酪氨酸酶的活性来实现的。

关键词：何首乌酪氨酸酶小眼相关转录因子酪氨酸酶相关蛋白1 酪氨酸酶相关蛋白2

口服减毒沙门氏菌介导黑色素瘤DNA疫苗的研究

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口服减毒沙门氏菌介导黑色素瘤DNA疫苗的研究

作者：蔡建国复旦大学

学位级别：硕士

以减毒沙门氏菌作为载体的肿瘤疫苗,可以有效地把特异性肿瘤抗原递呈给免疫细胞,激发机体对肿瘤细胞的特异性免疫反应,从而为抑制和治疗肿瘤提供了新的思路。热休克蛋白Hsp70可以有效将抗原肽递呈至抗原递呈细胞(APC)并将其激活,打破机... 详细信息

以减毒沙门氏菌作为载体的肿瘤疫苗,可以有效地把特异性肿瘤抗原递呈给免疫细胞,激发机体对肿瘤细胞的特异性免疫反应,从而为抑制和治疗肿瘤提供了新的思路。热休克蛋白Hsp70可以有效将抗原肽递呈至抗原递呈细胞(APC)并将其激活,打破机体对肿瘤相关性抗原的免疫耐受。本实验将编码热休克蛋白Hsp70和小鼠黑色素瘤特异性抗原酪氨酸酶相关蛋白2基因(Trp2)的重组质粒(pcDNA3.1-Hsp70-Trp2)导入减毒鼠伤寒沙门氏菌SL3261菌株。该重组减毒沙门氏菌疫苗以口服形式免疫小鼠C57BL/6后,有效提高了黑色素瘤细胞特异性毒性T细胞反应,并显著激活了自然杀伤细胞。CTL反应活性达到44.6%(P＜0.01),是PBS对照组(8.4%)的5倍多,自然杀伤细胞占脾脏细胞比例达到4.0%(P＜0.01),是PBS对照组(0.8%)的5倍。在免疫预防实验中,发现减毒沙门氏菌介导的口服DNA疫苗能够明显延缓C57BL/6小鼠B16F10黑色素移植肿瘤的生长(P＜0.01)。

关键词：减毒沙门氏菌热休克蛋白抗原递呈细胞黑色素瘤酪氨酸酶相关蛋白2 口服DNA疫苗

miRNA-27a-3p对人表皮黑色素细胞的影响

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miRNA-27a-3p对人表皮黑色素细胞的影响

作者：黎悦苏州大学

学位级别：硕士

目的:研究miRNA-27a-3p对人表皮黑色素细胞（Melanocytes,MC）形态变化、运动轨迹及速率、黑素合成相关基因的表达以及黑色素含量的影响。方法:取得成人的包皮组织后,将表真皮分离,再用胰酶消化成单个细胞后获取原代表皮细胞,使用差别... 详细信息

目的:研究miRNA-27a-3p对人表皮黑色素细胞（Melanocytes,MC）形态变化、运动轨迹及速率、黑素合成相关基因的表达以及黑色素含量的影响。方法:取得成人的包皮组织后,将表真皮分离,再用胰酶消化成单个细胞后获取原代表皮细胞,使用差别胰酶消化法从原代表皮细胞中获得纯化的MC并进行培养。使用免疫荧光染色检测MC特异性标志物（糖蛋白100（gp100）、酪氨酸酶（Tyrosinase,TYR））的表达,从而对纯化后的MC进行鉴定。将MC接种到6孔板中,细胞密度达到50%左右时,使用miRNA-27a-3p的Mimic（过表达组）、Mimic-NC（Mimic的对照组）、Inhibitor（抑制组）、Inhibitor-NC（Inhibitor的对照组）对MC进行转染。转染后第1天,将细胞置于活细胞工作平台培养,每10min拍摄一次照片,连续拍摄12h,软件处理后获得转染后MC运动轨迹以及速率。转染后第2天,通过逆转录-聚合酶链反应（Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction,RT-PCR）测定 miRNA-27a-3p以及黑素合成相关基因的mRNA相对表达水平。转染后第4天,通过Western Blot检测黑素合成相关基因的蛋白表达水平。转染第5天时,利用NaOH法检测黑色素含量。结果:通过差别胰酶消化法获得了纯净的MC。通过检测转染后MC中miRNA-27a-3p的mRNA相对表达情况,发现Mimic组明显高于Mimic-NC组,Inhibitor组低于Inhibitor-NC组,即miRNA-27a-3p成功转染进了 MC。通过检测转染后MC的运动轨迹发现,Mimic组中MC的运动速率较慢,Mimic-NC、Inhibitor、Inhibitor-NC 3组无明显差异,即miRNA-27a-3p的过表达使得MC的运动速率受到了抑制。RT-PCR实验和Western Blot实验的结果表明了 miRNA-27a-3p的过表达能抑制黑素合成相关基因的表达,反之,miRNA-27a-3p Inhibitor组中黑素合成相关基因的表达升高。测定黑色素含量发现,Mimic组低于其他3组,即miRNA-27a-3p的过表达能降低MC的黑色素含量。结论:miRNA-27a-3p的过表达抑制人表皮MC的黑素合成相关基因的表达以及黑色素含量,而miRNA-27a-3p的降低能促进人表皮MC的黑素合成相关基因的表达以及黑色素含量。

关键词：黑色素细胞 miRNA 酪氨酸酶酪氨酸酶相关蛋白1 酪氨酸酶相关蛋白2