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胃酸响应型海洋生物水凝胶对酒精性损伤的保护作用

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胃酸响应型海洋生物水凝胶对酒精性损伤的保护作用

作者：卢思彤广东海洋大学

学位级别：硕士

在人们交际过程中,酒文化往往会形成一种餐桌文化,小酌怡情,但大酌伤身。过量酒精的摄入首先对人体胃黏膜有直接刺激的作用,引起胃炎、胃溃疡、胃穿孔和大出血等症状;随之酒精代谢产物乙醛会引起肝脏脂肪变性,酒精性脂肪肝、肝炎、肝纤... 详细信息

在人们交际过程中,酒文化往往会形成一种餐桌文化,小酌怡情,但大酌伤身。过量酒精的摄入首先对人体胃黏膜有直接刺激的作用,引起胃炎、胃溃疡、胃穿孔和大出血等症状;随之酒精代谢产物乙醛会引起肝脏脂肪变性,酒精性脂肪肝、肝炎、肝纤维化和肝硬化;同时也会对神经系统、泌尿系统等产生影响。本文通过制备巯基化壳聚糖(壳)-碳酸钙(核)包覆粒[CS-NAC(CaCO)],将其均匀分散至海藻酸钠(SA)溶液中,最后加入罗非鱼胶原肽(TCP)得到水凝胶前体溶液,遇胃酸后即原位形成水凝胶(CS-NAC/SA/TCP)。系统研究了CS-NAC/SA/TCP的化学结构、微观形态、体外粘附性、生物相容性和降解性等。在此基础上,探究了CS-NAC/SA/TCP对酒精性胃、肝和脑损伤的保护作用。主要研究内容与结果如下:(1)将壳聚糖(CS)进行巯基功能化后得到巯基化壳聚糖(CS-NAC),并用于包覆纳米碳酸钙(nano-CaCO),形成CS-NAC(CaCO),并对其进行结构表征。研究结果表明:通过分析CS-NAC的红外光谱(FTIR)和核磁共振氢谱(H NMR)结果可证明:CS-NAC已成功制备,且取代度为9.00%。通过分析CS-NAC(CaCO)的FTIR、扫描电镜(SEM)和粒径及Zeta电位结果可证明:CS-NAC与nano-CaCO是通过CS-NAC的粘附性和两者之间的静电作用来形成CS-NAC(CaCO)。(2)将CS-NAC(CaCO)均匀分散于SA溶液中,同时加入TCP,通过聚电解质共混方法(PEC),制得水凝胶前体溶液,其在胃酸的存在下,即可原位形成CS-NAC/SA/TCP。在单因素实验结果的基础上,结合Box-Behnken实验设计优化制备条件。研究结果表明:最优制备CS-NAC/SA/TCP的条件为:SA浓度为1%,CS-NAC与nano-CaCO的质量比(M/MCaCO)为1:1,SA与CS-NAC(CaCO)的质量比(MSA/MCS-NAC(CaCO))为15:1。(3)对优化制备的CS-NAC/SA/TCP进行FTIR与外貌形态表征,也开展了其体外性能分析,如乙醇吸附性、溶胀性、降解性、活性肽释放性、粘附性和抗氧化性等。结果表明:CS-NAC/SA/TCP呈现不规则的多孔结构特征,具有良好的乙醇吸附性和溶胀性,乙醇吸附率和溶胀率分别为56.23%和2350.00%;具有优越的机械性能和胃黏膜粘附性,黏膜粘附量为50.81±3.43%;具有优异的抗氧化活性,对2,2-二苯基-1-苦基肼基自由基(·DPPH),过氧自由基(O)和羟基自由基(·OH)的半数抑制浓度(IC50)分别为2.20,2.15和1.26 mg/m L;具有良好的缓释性,6小时累积释放量达到95.20%;具有较好的生物降解性,在模拟体液中,3天内能基本完全降解。(4)在小鼠急性和慢性酒精性胃黏膜损伤实验中,通过观察小鼠生存率和体重变化;病理学观察小鼠胃黏膜细胞情况和检测分析胃组织中抗氧化因子含量变化、炎症因子的表达量变化、胃黏膜保护因子的含量变化,进而探讨CS-NAC/SA/TCP对酒精性胃黏膜损伤的治疗效果。结果表明:CS-NAC/SA/TCP不影响小鼠生存率和体重变化,且能改善小鼠体内抗氧化系统,提高组织中超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)和还原型谷胱甘肽(GSH)的含量,清除由酒精引起的过量自由基;能抑制促炎症细胞因子白介素1β(IL-1β)与白介素6(IL-6)的表达和增加胃黏膜保护因子前列腺素E2(PGE2)和一氧化氮(NO)的产生,对小鼠酒精性胃黏膜损伤具有保护和修复作用。(5)在小鼠急性酒精性肝损伤实验中,检测小鼠肝脏系数变化;病理学观察小鼠肝组织出血、炎细胞浸润等情况;检测血清中转氨酶活性变化;检测肝脏中代谢酶活性变化,探讨CS-NAC/SA/TCP对酒精性肝损伤的治疗效果。研究结果表明:从病理学角度观察到CS-NAC/SA/TCP明显改善酒精性肝损伤情况,明显降低小鼠血清中谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)的含量和增强肝脏中乙醇脱氢酶(ADH)和乙醛脱氢酶(ALDH)的活性,从而减轻小鼠酒精性肝损伤。(6)在小鼠慢性酒精性脑损伤实验中,检测小鼠脑系数变化和通过Morris水迷宫实验对小鼠记忆能力进行评估,探讨CS-NAC/SA/TCP对酒精性脑损伤的治疗效果。研究结果表明:CS-NAC/SA/TCP能减轻小鼠因过量饮酒导致的脑水肿程度和改善小鼠在Morris水迷宫实验中记忆能力。因此,CS-NAC/SA/TCP对酒精性脑损伤的小鼠具有保护和修复作用。

关键词：胃酸响应型水凝胶酒精性损伤壳聚糖海藻酸钠

雨生红球藻破壁孢子粉对小鼠酒精性损伤肾脏的保护作用研究

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生命科学研究 2019年第2期23卷 122-127页

作者：魏芬芬王文娟贺青华张波北京联合大学健康与环境学院中国北京100191

为了研究雨生红球藻破壁孢子粉对酒精性损伤小鼠肾脏的保护作用,将小鼠随机分为正常对照组、模型组和雨生红球藻粉低、中、高剂量组(100 mg/kg、200 mg/kg、400 mg/kg)。其中,剂量组动物先灌胃受试物7 d,第8天开始,给予剂量组和模型组50... 详细信息

为了研究雨生红球藻破壁孢子粉对酒精性损伤小鼠肾脏的保护作用,将小鼠随机分为正常对照组、模型组和雨生红球藻粉低、中、高剂量组(100 mg/kg、200 mg/kg、400 mg/kg)。其中,剂量组动物先灌胃受试物7 d,第8天开始,给予剂量组和模型组50%酒精连续灌胃7 d,建立酒精性损伤模型。最后一次灌胃16 h后处死小鼠,取血清和相关脏器,测定小鼠血清尿素氮(blood urea nitrogen, BUN)和肌酐(creatinine, CREA)浓度,同时测定肾脏中超氧化物歧化酶(superoxide dismutase, SOD)活性以及谷胱甘肽(glutathione, GSH)、丙二醛(malondialdehyde, MDA)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α, TNF-α)和白细胞介素-1β(interleukin-1β, IL-β)含量。结果显示:与模型组相比,雨生红球藻破壁孢子粉各剂量组肾脏指数降低, BUN和CREA含量显著降低(P性和GSH含量显著升高(P性因子TNF-α和IL-β也显著降低(P酒精性肾脏损伤具有明显的保护作用。

关键词：雨生红球藻酒精性损伤氧化应激炎症反应小鼠

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中药防治酒精性损伤的实验研究概况

中医药通报 2007年第3期6卷 60-63,56页

作者：于文涛杨牧祥王少贤胡金宽河北医科大学中医学院 050091

酒精性损害呈日益增多趋势,本文从单味中药及其提取物和复方研究两方面对中药防治酒精性损害的实验研究进展进行了综述,指出运用现代分子生物学手段,深入研究中药多靶点、多途径防治酒精性损害的作用机制,具有一定的可行性。

关键词：酒精性损伤中药实验研究综述

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壳寡糖对大鼠酒精性肠道损伤的影响研究

壳寡糖对大鼠酒精性肠道损伤的影响研究

作者：徐颖江南大学

学位级别：硕士

饮酒导致的疾病和健康问题,特别是酒精性肝损伤等一直受到广泛关注,而很多伤害都与肠道屏障的健康状况息息相关。酒精可以通过破坏黏膜结构、氧化应激反应和炎症反应等方面损伤肠道屏障,使有害物质进入体内,进而损伤器官组织。壳寡糖（... 详细信息

饮酒导致的疾病和健康问题,特别是酒精性肝损伤等一直受到广泛关注,而很多伤害都与肠道屏障的健康状况息息相关。酒精可以通过破坏黏膜结构、氧化应激反应和炎症反应等方面损伤肠道屏障,使有害物质进入体内,进而损伤器官组织。壳寡糖（COS）作为一种天然的碱性低聚物,以其来源广、无毒害、易生物降解和解酒护肝等生理活性越来越受到重视。本论文以COS为主要研究对象,探究其对大鼠酒精性肠道损伤的干预作用,以期为COS功能的开发,以及开发安全有效的肠道保护产品提供理论支持。本论文的主要研究内容与结果如下:（1）通过对Wistar大鼠进行连续42 d的灌胃酒精处理建立肠道损伤模型,灌胃酒精前分别灌胃180 mg/kg谷氨酰胺、22.5 mg/kg、45 mg/kg和90 mg/kg COS。通过测定饲养过程中大鼠体重、进食量以及饲养结束大鼠器官指数和小肠重/长的值,并对小肠进行病理组织学检查,分析大鼠的生长状况以及小肠伸缩性和形态。结果表明:酒精对小肠中十二指肠的损伤较空肠和回肠严重。COS可以增加大鼠体重、降低酒精对器官的损伤,还可以改善大鼠饮酒后十二指肠和回肠伸缩性的变化,缓解大鼠的肠道不适;同时,通过维持绒毛形态、增加绒毛长度、降低肌层厚度,使绒毛长度与隐窝深度比值增加,缓解酒精对大鼠小肠结构和功能的损伤。（2）在大鼠酒精性肠道损伤模型中探讨了COS对肠粘膜屏障的保护作用。通过测定大鼠血浆中D-乳酸（D-LA）、内毒素（LPS）含量和二胺氧化酶（DAO）活性,以及小肠紧密连接蛋白的表达情况,探究壳寡糖的肠黏膜屏障保护效果。结果表明:COS的干预可以显著降低大鼠血浆中D-LA、LPS含量以及DAO活性,降低由酒精引起的肠粘膜通透性的增加。COS可以通过提高Occludin和ZO-1、降低Claudin-4的基因和蛋白表达水平,修复小肠上皮细胞间的紧密连接结构。（3）在大鼠酒精性肠道损伤模型中探讨了COS对小肠氧化应激的干预作用。通过测定小肠总抗氧化能力、超氧化物歧化酶（SOD）和谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）以及丙二醛（MDA）和蛋白质羰基含量表征小肠的氧化损伤情况。结果表明:COS摄入可以提高小肠组织的总抗氧化能力,显著提高大鼠小肠组织的SOD和GSH-Px活性,显著降低组织中MDA和蛋白质羰基含量,缓解灌胃酒精导致的小肠的氧化损伤。（4）在大鼠酒精性肠道损伤模型中探讨了COS对炎症反应的干预作用及机制。通过测定血浆中促炎因子含量,探究COS的抗炎水平;测定小肠中NO含量和iNOS活性,以及炎症相关因子的表达,探究壳寡糖对肠道炎症的调节作用。结果表明:COS可以下调血浆中IL-6、IL-1β和TNF-α水平,缓解全身炎症;此外,COS可以通过下调小肠IL-6、IL-1β和TNF-αmRNA表达以及降低iNOS活性下调小肠组织NO含量,缓解肠道炎症;同时,COS可以下调TLR4、TLR2和TRAF6 mRNA的表达量,下调TLR4和核内磷酸化NF-κB p65的蛋白表达,表明COS可能通过调控抑制TLR4蛋白表达、抑制NF-κB通路的激活实现缓解小肠炎症的作用。

关键词：壳寡糖酒精性损伤肠道屏障炎症氧化损伤

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枸杞多糖对酒精性肝损伤小鼠肾脏的保护作用

癌变．畸变．突变 2019年第2期31卷 148-152页

作者：魏芬芬王文娟张波北京联合大学健康与环境学院北京100191

目的:研究枸杞多糖对酒精性肝损伤小鼠肾脏的保护作用。方法:将60只小鼠随机分为正常对照组,模型组和枸杞多糖低、中、高剂量组(分别为75、150、300 mg/kg)。枸杞多糖组动物连续灌胃受试物16 d,第10天开始,给予枸杞多糖组和模型组50%酒... 详细信息

目的:研究枸杞多糖对酒精性肝损伤小鼠肾脏的保护作用。方法:将60只小鼠随机分为正常对照组,模型组和枸杞多糖低、中、高剂量组(分别为75、150、300 mg/kg)。枸杞多糖组动物连续灌胃受试物16 d,第10天开始,给予枸杞多糖组和模型组50%酒精连续灌胃7 d,建立酒精性肝损伤模型。最后一次灌胃16 h后处死小鼠,取血清和肾脏。用自动生化分析仪检测血清中葡萄糖(GLU)、尿素氮(BUN)和肌酐(CREA)浓度,用生化试剂盒测定肾脏中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽(GSH)和丙二醛(MDA)浓度,用ELISA方法测定肾脏中肿瘤杀伤因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)浓度。结果:与对照组相比,模型组小鼠体质量下降,肾脏指数均升高,血清GLU、BUN、CREA浓度升高,肾脏SOD活性、GSH浓度下降,而MDA上升,肾脏炎性因子TNF-α和IL-1β升高(P均酒精刺激后,机体健康受到影响,肾脏受到损伤。与模型组相比,枸杞多糖中剂量组小鼠体质量增加,各剂量组肾脏指数均降低,中、高剂量组小鼠血清GLU浓度(7.63、7.82 mmol/L)降低,高剂量组BUN浓度和CREA浓度降低,而SOD活力升高,各剂量组GSH浓度升高,MDA浓度下降,各剂量组TNF-α浓度降低(P酒精性肾脏损伤具有一定的保护作用。

关键词：枸杞多糖酒精性损伤肾脏保护作用

海兔素对大鼠原代肝细胞酒精性氧化损伤的保护作用

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中国药理学通报 2016年第2期32卷 251-257页

作者：苏爱朱红燕徐宏伟刘颖梁惠青岛大学医学院细胞与分子生物学实验室山东青岛266071 山东省青岛圣德脑血管病医院山东青岛266100 青岛市李沧区圣德老年护养院山东青岛266100 青岛大学医学院医学营养研究所山东青岛266021

目的探讨海兔素对大鼠原代肝细胞酒精性氧化损伤保护作用。方法门静脉胶原酶Ⅳ原位灌注及密度梯度离心获得大鼠原代肝细胞。MTT实验检测乙醇和海兔素最佳作用剂量及肝细胞活力。酶学实验检测细胞AST、LDH、SOD、MDA、GSH水平;流式细胞... 详细信息

目的探讨海兔素对大鼠原代肝细胞酒精性氧化损伤保护作用。方法门静脉胶原酶Ⅳ原位灌注及密度梯度离心获得大鼠原代肝细胞。MTT实验检测乙醇和海兔素最佳作用剂量及肝细胞活力。酶学实验检测细胞AST、LDH、SOD、MDA、GSH水平;流式细胞术检测细胞凋亡情况;单细胞凝胶电泳观察细胞DNA损伤状况;JC-1荧光探针检测细胞线粒体膜电位水平;比色法及Western blot检测细胞CYP2E1活性及蛋白表达。结果经30 mg·L^(-1)。海兔素预作用2 h,再与300 mmol·L^(-1)。乙醇共作用8 h后,肝细胞活力较酒精模型组明显上升,AST和LDH释放也得到明显抑制;同时,肝细胞SOD和GSH水平明显升高,MDA含量则明显降低,差异均具有显著性(P损伤及线粒体膜电位水平明显得到改善。海兔素干预后,肝细胞CYP2E1活性及蛋白表达水平明显受到抑制(P酒精性氧化损伤具有保护作用,其作用机制可能与海兔素抑制酒精对CYP2E1的活化,缓解氧化应激,提高机体抗氧化能力有关。

关键词：海兔素大鼠原代肝细胞酒精性损伤抗氧化凋亡 CYP2E1

超声造影评价慢性酒精性睾丸微血管改变及其生精功能损伤

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中国超声医学杂志 2020年第9期36卷 852-855页

作者：洪龙城薛恩生陈聪钱清富林文金苏唤忠福建省协和医院

目的探讨超声造影在慢性酒精性睾丸微血管改变所致生精功能损伤评价中的价值。方法 36只雄兔随机分为S(S1、S2、S3)、T(T1、T2、T3)组。T组给予60%酒精5 ml/kg/2 d灌胃,S组给予生理盐水。S1、T1饲养30 d,S2、T2饲养45 d,S3、T3饲养60 d... 详细信息

目的探讨超声造影在慢性酒精性睾丸微血管改变所致生精功能损伤评价中的价值。方法 36只雄兔随机分为S(S1、S2、S3)、T(T1、T2、T3)组。T组给予60%酒精5 ml/kg/2 d灌胃,S组给予生理盐水。S1、T1饲养30 d,S2、T2饲养45 d,S3、T3饲养60 d。行超声造影、血浆ET-1、NO检测、取睾丸组织行HE、Johnsen′s评分及MDA检测。结果 S组间各项造影参数、ET-1、NO、MDA、 Johnsen′s评分及光镜表现差异无统计学意义(P>0.05)。T2较T1、T3较T2造影PI、AUC减小(P性高浓度酒精摄入导致的睾丸微循环血流动力学改变,间接反映慢性酒精性生精功能损伤。

关键词：超声造影酒精性损伤睾丸微血管内皮细胞生精功能

超声造影评价慢性酒精性睾丸微血管改变及其生精功能损伤

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超声造影评价慢性酒精性睾丸微血管改变及其生精功能损伤

作者：洪龙城福建医科大学

学位级别：硕士

目的探讨超声造影定量分析技术在慢性酒精性睾丸微血管改变所致生精功能损伤评价研究中的应用价值。方法36只健康成年新西兰雄兔随机分为对照组(S1、S2、S3组)、酒精处理组(T1、T2、T3组),共6组,每组6只。适应性饲养一周后,各组每日予... 详细信息

目的探讨超声造影定量分析技术在慢性酒精性睾丸微血管改变所致生精功能损伤评价研究中的应用价值。方法36只健康成年新西兰雄兔随机分为对照组(S1、S2、S3组)、酒精处理组(T1、T2、T3组),共6组,每组6只。适应性饲养一周后,各组每日予等量正常饮食,同时酒精处理组每隔一日予60%酒精5ml/kg灌胃,建立睾丸酒精损伤模型,对照组每隔一日予等剂量生理盐水灌胃。S1组、T1组饲养30日,S2组、T2组饲养45日,S3组、T3饲养60日。各组实验兔于饲养结束后行超声造影,采用超声造影定量分析技术分析造影参数(包括PI、TP、Slope、MTT、DT/2及AUC),并进行组间对比统计。同时,各组兔子均行超声引导下心脏穿刺取血约5ml以检测血浆内皮素ET-1、一氧化氮N0。血液标本采集完成后均取同侧部分睾丸组织行HE染色切片、睾丸组织活检评分标准(Johnsen’s评分标准)评分及丙二醛(MDA)检测,对比观察各组间组织病理学改变及MDA水平的变化。结果超声造影表现:S组(S1组、S2组、S3组)各项超声造影参数之间差异不具有统计学意义(P>0.05)。T1组与S1组各项超声造影参数之间差异不具有统计学意义(P>0.05);相较S2组,T2组睾丸造影的峰值强度下降,PI减小(P0.05);相较S3组,T3组PI、AUC显著减小(P0.05)。相较T1组,T2组睾丸造影的峰值强度下降,PI减小(P0.05);相较T2组,T3组充盈量减小,AUC减小(P0.05)。血浆检测:各S组(S1组、S2组、S3组)之间血浆ET-1与NO含量差异不具有统计学意义(P>0.05)。相较S1组,T1组血浆ET-1与NO含量升高(P0.05)。相较S1组,T1组睾丸组织Johnsen’s评分结果差异不具有统计学意义(P>0.05);相较S2组,T2组睾丸组织Johnsen’s评分降低(P0.05);相较T2组,T3组睾丸组织Johnsen’s评分结果显著降低(P0.05)。相较S1组,T1组睾丸组织MDA含量升高(P酒精对睾丸生精功能的损伤作用具有时间依赖性。2.慢性高浓度酒精摄入可导致以容量减少为主要表现的睾丸微循环血流动力学改变,并导致相应的睾丸生精功能损伤。3.超声造影定量分析技术可评价慢性酒精性睾丸微循环血流动力学改变,用于间接反映睾丸酒精性生精功能损伤。

关键词：超声造影酒精性损伤睾丸微血管内皮细胞

牛樟芝固态发酵成分缓解L-O2细胞酒精损伤的研究

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工业微生物 2021年第3期51卷 1-9页

作者：夏永军衣振伟梁丽红赵创谦汤柳茜章羽杨怡琳王光强艾连中上海理工大学医疗器械与食品学院上海食品微生物工程技术研究中心上海200093

牛樟芝谷物固态发酵可产生多种生物活性成分,是具有良好应用潜力的培养方式。本文以牛樟芝青稞固态发酵物为原料,通过硅胶柱层析获得4种生物活性成分,然后利用人正常肝细胞L-O2酒精损伤模型对这4种活性成分进行功能评价。研究结果显示,... 详细信息

牛樟芝谷物固态发酵可产生多种生物活性成分,是具有良好应用潜力的培养方式。本文以牛樟芝青稞固态发酵物为原料,通过硅胶柱层析获得4种生物活性成分,然后利用人正常肝细胞L-O2酒精损伤模型对这4种活性成分进行功能评价。研究结果显示,酒精损伤能够导致L-O2细胞收缩,贴壁能力减弱。在所研究的4种活性成分中,AdA和Aq均能够有效抑制L-O2细胞形态变化并增强细胞的贴壁性能。进一步分析发现,这些活性成分能够通过提高肝细胞抗氧化能力缓解酒精性损伤,其中AdA和Aq具有较好的抗肝损伤能力,能显著降低细胞培养液中ALT(Alanine transaminase,谷丙转氨酶)和AST(Aspertate aminotransferase,谷草转氨酶)的活力,显著降低细胞中MDA(Molondialdehyde,丙二醛)的含量,并提升SOD(Super oxide dismutase,超氧化物歧化酶)和GSH(Glutathione,谷胱甘肽)的含量。本文为研究牛樟芝固态发酵产物缓解酒精性肝损伤机制奠定了基础。

关键词：牛樟芝固态发酵活性成分 L-O2细胞酒精性损伤