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畜禽养殖场工人鼻腔携带金黄色葡萄球菌抗生素耐药性及遗传分型研究

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畜禽养殖场工人鼻腔携带金黄色葡萄球菌抗生素耐药性及遗传分型研...

作者：林富艳河南师范大学

学位级别：硕士

近年来,随着我国经济的不断发展和人们饮食结构的改变,现代化畜禽养殖场的数量也随之不断增多。这些养殖场的主要养殖模式是集约化和工厂化。养殖过程中抗生素的使用频率和总量也迅速攀升,由此诱导产生的抗生素耐药菌对生态环境以及人... 详细信息

近年来,随着我国经济的不断发展和人们饮食结构的改变,现代化畜禽养殖场的数量也随之不断增多。这些养殖场的主要养殖模式是集约化和工厂化。养殖过程中抗生素的使用频率和总量也迅速攀升,由此诱导产生的抗生素耐药菌对生态环境以及人类健康都造成了巨大的威胁。本课题针对其中一种典型的抗生素耐药菌—金黄色葡萄球菌展开研究。课题采集了北京、河北、黑龙江地区养殖场工人鼻腔、社区人员鼻腔样本及养殖场动物粪便样本。通过K-B药敏纸片法对分离出的金黄色葡萄球菌进行了17种抗生素的耐药性试验,并运用金葡菌蛋白A基因多态性分型（Spa分型）和多位点序列分析（MLST分型）方法对金黄色葡萄球菌进行遗传分型研究。研究主要结论如下:（1）经系统的筛选鉴定后,从养殖场工人鼻腔和养殖场动物粪便、社区人员鼻腔样本中共筛选出48株金黄色葡萄球菌。从养殖场工人鼻腔样本中分离出33株,其中鸡场工人鼻腔中19株、猪场工人鼻腔中10株、鸽场工人鼻腔中4株;粪便样本中分离出4株,其中牛粪、鸡粪各2株;社区人员鼻腔样本分离出11株。从养殖场工人鼻腔和养殖场动物粪便、社区人员鼻腔样本中共筛选出28株耐甲氧西林金黄色葡萄球菌。从养殖场工人鼻腔样本中分离出24株,其中鸡场工人鼻腔中18株、猪场工人鼻腔中4株、鸽场工人鼻腔中2株;粪便样本中分离出4株,其中牛粪、鸡粪各2株。（2）本课题所分离到的金黄色葡萄球菌和耐甲氧西林金黄色葡萄球菌都对氨苄西林完全耐药;都对青霉素、链霉素、红霉素、环丙沙星、诺氟沙星、四环素、克林霉素高度耐药且耐药率在90%以上;都对强力霉素有相对较高的耐药性耐药率在40%以上;都对头孢哌酮、庆大霉素有一定的耐药性耐药率在25%以下;都对磺胺甲恶唑、氯霉素高度敏感,都对阿米卡星、万古霉素、利福平完全敏感。金黄色葡萄球菌和耐甲氧西林金黄色葡萄球菌都对β-内酰胺类、大环内酯类、喹诺酮类、四环素类、林可霉素类抗生素表现出较高的耐药性;都对氨基糖苷类、磺胺类、氯霉素类抗生素的敏感性较高;都对多肽类、利福霉素类抗生素完全敏感。且整体上,耐甲氧西林金黄色葡萄球菌对不同种类抗生素的耐药性要高于金黄色葡萄球菌。（3）Spa分型共检测出3种spa型,包括t034、t899、t011。在鸡场工人鼻腔、社区人员鼻腔、牛粪、鸡粪中分离的金黄色葡萄球菌和耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的spa型均为t034;在猪场工人鼻腔中分离的金黄色葡萄球菌t899的比例为90.91%、t034的比例为9.09%、而MRSA均为t899;在鸽场工人鼻腔中分离的金黄色葡萄球菌和耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的spa型均为t011。分离出的金黄色葡萄球菌和耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的spa型与其对17种抗生素的耐药性有一定的相关性。MLST分型共检测出5种ST型,包括ST398、ST5、ST59、ST10、ST9。在鸡场工人鼻腔中分离的金黄色葡萄球菌中ST398的比例为52.63%、ST5的比例为15.79%、ST59的比例为10.53%、ST10的比例为21.05%、在鸡场工人鼻腔中分离的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌中ST398的比例为50%、ST5比例为16.67%、ST59的比例为11.11%、ST10的比例为22.22%;在猪场工人鼻腔中分离的金黄色葡萄球菌和耐甲氧西林金黄色葡萄球菌均为ST9;鸽场工人鼻腔中分离的金黄色葡萄球菌和耐甲氧西林金黄色葡萄球菌均为ST398;在社区人员鼻腔中分离的金黄色葡萄球菌中ST398的比例为81.82%、ST59的比例为18.18%;牛粪、鸡粪分离的金黄色葡萄球菌和耐甲氧西林金黄色葡萄球菌均为ST398。分离出的金黄色葡萄球菌和耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的ST型与其对17种抗生素的耐药性有一定的相关性。本研究结果可以为评估养殖环境中金黄色葡萄球菌对周围人类及环境的危害及制定相应的控制措施提供现实依据。

关键词：畜禽养殖场金黄色葡萄球菌鼻腔抗生素耐药性遗传分型

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猪瘟病毒广东流行毒株遗传分型及序列分析

中国动物检疫 2011年第10期28卷 27-31页

作者：李儒曙苏惠龙杨傲冰禹思宇黄岩向华张健騑珠海市动植物防疫监督检验中心广东珠海519000 珠海出入境检验检疫局广东珠海519000 广东省农业科学院兽医研究所广东省兽医公共卫生公共实验室广东广州510000

2006年至2009年期间,从广东省各地采集病、死猪的脾脏、淋巴结、或扁桃体,用RT-PCR的方法扩增猪瘟病毒的E2全基因,用国际通用的进化分析软件对这6株病毒进行遗传分型,结果显示这6株猪瘟野毒均属于基因2.1亚群。推测广东省猪瘟病毒流行... 详细信息

2006年至2009年期间,从广东省各地采集病、死猪的脾脏、淋巴结、或扁桃体,用RT-PCR的方法扩增猪瘟病毒的E2全基因,用国际通用的进化分析软件对这6株病毒进行遗传分型,结果显示这6株猪瘟野毒均属于基因2.1亚群。推测广东省猪瘟病毒流行毒株目前主要以2.1亚群为主。

关键词：猪瘟病毒遗传分型序列分析

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肠外致病性大肠埃希菌不同克隆株致病能力差异的机制

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肠外致病性大肠埃希菌不同克隆株致病能力差异的机制

作者：何清雯福建医科大学

学位级别：硕士

目的:大肠埃希菌(Escherichia coli,E.coli)是最常见的革兰阴性致病菌之一,可引起多种人类感染性疾病,包括尿路感染,败血症,新生儿脑膜炎,皮肤组织感染,骨髓炎等。由E.coli引起的疾病影响着人们的健康,每年给全球带来巨大的经济损失,已... 详细信息

目的:大肠埃希菌(Escherichia coli,E.coli)是最常见的革兰阴性致病菌之一,可引起多种人类感染性疾病,包括尿路感染,败血症,新生儿脑膜炎,皮肤组织感染,骨髓炎等。由E.coli引起的疾病影响着人们的健康,每年给全球带来巨大的经济损失,已引起全世界的关注。本研究以临床不同分离部位的大肠埃希菌以及健康人肠道中分离的共生型E.coli为研究对象,分析不同感染部位的E.coli菌株特征和分子生物学特征,通过比较基因组学的方法对不同感染部位来源的分离株基因组特点进行分析,初步探索E.coli不同感染部位克隆株感染能力差异的机制。方法:1.菌株收集:于2014年8月-2015年7月期间,在福建医科大学附属协和医院检验科微生物室收集大肠埃希菌临床分离株。2015年11月-2015年12月随机招募福建医科大学志愿者50名,并每人采集一份粪便标本,分离其中的E.coli作为对照组。2.遗传谱系分型:多重PCR扩增chu A、yja A、TSPE4.C2,根据这三个基因的存在与否将E.coli分为四型(A、B1、B2、D),并将阳性产物进行测序。3.O抗原分型:PCR扩增16种引起肠外感染E.coli的常见菌体O抗原基因,包括O1、O2、O4、O6、O7、O8、O12、O15、O16、O18、O21、O22、O25、O75、O83、O157。4.毒力因子检测:多重PCR扩增26对常见的毒力基因,包括黏附素(pap AH,pap EF,pap C,pap G allele I,pap G II/III,pap G allele II,sfa/foc DE,afa/dra BC,fim H,gaf D,sfa S,foc G,nfa E),毒素(hly A,cnf1,cdt B),铁载体(fyu A,iut A),保护和侵袭素(kps MTⅡ,kps MTⅢ,tra T,cva C,kps MT K1/K5)和其他(rfc,PAI)。5.比较基因组学:选取两株临床分离株和一株肠道分离株进行全基因组测序。临床分离株分别分离自中段尿和血液。入选标准:在最常见感染部位的E.coli中选取优势系统发育型中的优势血清型。两株细菌均属于B2-O25型。提取细菌基因组DNA送往上海泽塔生物有限公司进行二代测序,进行基因组注释及分析。6.统计学分析:使用SPSS19.0统计分析软件,根据条件选择统计学四格表中的卡方检验或者Fisher确切概率法对数据进行分析比较。P遗传谱系分型:700株E.coli临床株中B2型为247株(35.3%),D型232株(33.1%),A型137株(19.6%)和B1型84株(12%)。50例健康对照株中A型30株(60%),B1型7株(14%),B2型9株(18%),和D型4株(8%)。3.O抗原分型:700株临床株中,最常见型别为O25(11.9%),O1型(9.4%)和O75型(7.6%)。其中未检出O22型和O157型。在50例健康对照株中,仅有8株可以分型,结果如下:O6型(1株,2%),O7型(1株,2%),O12型(2株,4%),O16型(1株,2%),O21型(1株,2%),O25型(1株,2%),O75型(1株,2%)。4.毒力因子检测:700株临床菌株中,毒力基因fim H、fyu A、iut A、kps MT II和tra T检出率均高于50%。毒力基因pap G allele I、gaf D、nfa E、和rfc的检出率均低于3%,cdt B在所有菌株中均未检出。B2型和D型所携带的毒力因子多于A型

关键词：大肠埃希菌肠外致病性大肠埃希菌毒力因子遗传分型 O血清分型全基因组测序比较基因组学分析

微分化急性髓系白血病病人MICM特征分析(附1例报告)

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分子诊断与治疗杂志 2008年第2期 4-10页

作者：翟洪顺邹德学聂李平刘延涛周宇北京大学深圳医院血液实验室深圳阳光医院检验科

目的探讨微分化急性髓系白血病AML-M0MICM特征并与其他类型白血病鉴别。方法常规细胞染色,流式分析,染色体核型,FISH及分子生物学方法。结果用MPO mRNA进行基因分型是一种新的更加敏感、特异的白血病诊断分型手段。原始细胞免疫表型对诊... 详细信息

目的探讨微分化急性髓系白血病AML-M0MICM特征并与其他类型白血病鉴别。方法常规细胞染色,流式分析,染色体核型,FISH及分子生物学方法。结果用MPO mRNA进行基因分型是一种新的更加敏感、特异的白血病诊断分型手段。原始细胞免疫表型对诊断M0有重要意义;M0的原始细胞形态学特点不明显,其过氧化物酶(POX)、苏丹黑(SBB)、特异性酯酶(CE)染色均为阴性,而酸性非特异性酯酶(ANAE),酸性磷酸酶(ACP)及糖原(PAS)染色呈阴性或弱阳性,ANAE酶型与M1、急性淋巴细胞白血病(ALL)相似,表现为局灶型且不被氟化钠(NaF)抑制,PAS酶型为细颗粒弥散状分布,在此基础上夹有珠状、块状,而ALL酶型为细颗粒、中粗颗粒和粗颗粒散在分布,部分细胞可见珠状、块状且背景较清晰干净。结论ANAE、PAS在细胞化学染色中对AML-M0的诊断有很重要的参考价值。将基因分型,免疫分型,与细胞形态学、遗传学四者相结合,能极大地提高AML-M0的诊断率。

关键词：白血病微分化 MICM 遗传分型免疫分型

微分化急性髓系白血病病人MICM特征分析(附1例报告)

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现代医学仪器与应用 2008年第2期20卷 4-10页

作者：翟洪顺邹德学聂李平刘延涛周宇北京大学深圳医院血液实验室广东深圳518036 北京大学深圳医院血液实验室广东深圳518036 北京大学深圳医院血液实验室广东深圳518036 深圳阳光医院检验科广东深圳518008 北京大学深圳医院血液实验室广东深圳518036

目的探讨微分化急性髓系白血病AML-M0 MICM特征并与其他类型白血病鉴别.方法常规细胞染色,流式分析,染色体核型,FISH及分子生物学方法.结果用MPO mRNA进行基因分型是一种新的更加敏感、特异的白血病诊断分型手段.原始细胞免疫表型对... 详细信息

目的探讨微分化急性髓系白血病AML-M0 MICM特征并与其他类型白血病鉴别.方法常规细胞染色,流式分析,染色体核型,FISH及分子生物学方法.结果用MPO mRNA进行基因分型是一种新的更加敏感、特异的白血病诊断分型手段.原始细胞免疫表型对诊断M0有重要意义;M0的原始细胞形态学特点不明显,其过氧化物酶(POX)、苏丹黑(SBB)、特异性酯酶(CE)染色均为阴性,而酸性非特异性酯酶(ANAE),酸性磷酸酶(ACP)及糖原(PAS)染色呈阴性或弱阳性,ANAE酶型与M1、急性淋巴细胞白血病(ALL)相似,表现为局灶型且不被氟化钠(NaF)抑制,PAS酶型为细颗粒弥散状分布,在此基础上夹有珠状、块状,而ALL酶型为细颗粒、中粗颗粒和粗颗粒散在分布.部分细胞可见珠状、块状且背景较清晰干净.结论 ANAE、PAS在细胞化学染色中对AML-M0的诊断有很重要的参考价值.将基因分型,免疫分型,与细胞形态学、遗传学四者相结合,能极大地提高AML-M0的诊断率.

关键词：白血病微分化 MICM 遗传分型免疫分型

中国人红细胞PGM(PGM位点1)多态性的等电聚焦电泳研究

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生物化学杂志 1985年第Z1期 111-115页

作者：党进军孙志贤姜国芝军事医学科学院放射医学研究所军事医学科学院放射医学研究所北京

用等电聚焦电泳技术对北京地区180人进行红细胞葡萄糖磷酸变位酶（PGM1）遗传表型的分析鉴定。共检测出九个PGM1亚型,可能由于检测样本数还不够多,目前尚未检测到PGM1 2-亚型。根据测定结果,观察了我国人群中PGM1亚型的分布情况,并计算... 详细信息

用等电聚焦电泳技术对北京地区180人进行红细胞葡萄糖磷酸变位酶（PGM1）遗传表型的分析鉴定。共检测出九个PGM1亚型,可能由于检测样本数还不够多,目前尚未检测到PGM1 2-亚型。根据测定结果,观察了我国人群中PGM1亚型的分布情况,并计算出决定PGM1亚型的四个等位基因频率为:PGM1+10617,PGM1-1 0.100,PGM2+1 0.236,PGM2-10.047。采用等电聚焦电泳可将PGM1的个体识别能力（DP值）由用普通淀粉胶电泳分型的0.558提高到0.742。结果与世界上其他国家和地区人群相似,PGM1在我国人群中同样是一个个体识别能力很高的多态性酶类。

关键词：葡萄糖磷酸变位酶等电聚焦同工酶遗传分型

遗传性红细胞协同转运机能缺陷与原发性高血压发病机制间关系的初步探讨(谱系调查)

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上海第二医学院学报 1982年第4期 24-27页

作者：赵光胜孔德汶李迪元朱鼎良黄友文史秉璋何清波上海市高血压研究所上海第二医学院医用数学教研室上海第二医学院医用数学教研室研究生

本文以细胞外K~+刺激、哇巴因不敏感的Na~+内向净增流量(△Na)估计红细胞协同转运功能,通过对30个家系、144人作谱系调查发现:①双亲中一方、双方异常的家系子代△Na异常率与盂德尔理想遗传比值间无显著统计学差异;②在家系的连续三代... 详细信息

本文以细胞外K~+刺激、哇巴因不敏感的Na~+内向净增流量(△Na)估计红细胞协同转运功能,通过对30个家系、144人作谱系调查发现:①双亲中一方、双方异常的家系子代△Na异常率与盂德尔理想遗传比值间无显著统计学差异;②在家系的连续三代人中均见有△Na异常者;③△Na频数分布曲线呈现双峰,提示存在两个不同“质”的群体;④受测者△Na值与原发性高血压的发生间经统计学测验关系十分密切。我们认为,按盂德尔显性单基因遗传规律传递的细胞膜协同转运功能缺陷与原发性高血压密切有关。它对预报、预防、遗传分型及鉴别诊断等可能有重要启示。

关键词：哇巴因协同转运盂德尔理想遗传比值分布曲线遗传分型

聚丙烯酰胺凝胶电泳同时对Gc和Hp蛋白的分型研究

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军事医学 1986年第3期 238-240页

作者：姜国芝党进军孙志贤军事医学科学院放射医学研究所

本文采用聚丙烯酰胺凝胶电泳同时进行Gc和Hp的遗传表型研究。观察测定中国人群(北京地区)中Gc基因频率为:Gc~1=0.671,GC~2=0.329。除三种Hp普通表型以外,我们还观测到了2-1S变异体(到目前为止,尚未见到有关这种变异体的报道)。实验中采... 详细信息

本文采用聚丙烯酰胺凝胶电泳同时进行Gc和Hp的遗传表型研究。观察测定中国人群(北京地区)中Gc基因频率为:Gc~1=0.671,GC~2=0.329。除三种Hp普通表型以外,我们还观测到了2-1S变异体(到目前为止,尚未见到有关这种变异体的报道)。实验中采用愈创木酚染色法进行Hp蛋白染色,取代了含有致癌剂的邻联(二)茴香胺染色法。

关键词：结合珠蛋白血型特异性成分遗传分型聚丙烯酰胺凝胶电泳