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基于NP和M1蛋白的甲型流感通用疫苗的初步研究

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免疫学杂志 2013年第5期29卷 376-381页

作者：王文娟刘坤段跃强高啸邢丽张良艳王希良杨鹏辉安徽医科大学研究生学院合肥230032 军事医学科学院微生物流行病研究所免疫学研究室病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的克隆、表达并纯化NP-M1-HSP60融合蛋白,免疫Balb/c小鼠,评价其免疫原性及免疫保护性,为候选甲型流感通用疫苗抗原提供新靶标。方法合成NP-M1-HSP60融合基因,构建pET28a-NP-M1-HSP60重组质粒,表达并纯化NP-M1-HSP60融合蛋白,抗原与S... 详细信息

目的克隆、表达并纯化NP-M1-HSP60融合蛋白,免疫Balb/c小鼠,评价其免疫原性及免疫保护性,为候选甲型流感通用疫苗抗原提供新靶标。方法合成NP-M1-HSP60融合基因,构建pET28a-NP-M1-HSP60重组质粒,表达并纯化NP-M1-HSP60融合蛋白,抗原与SP01水包油佐剂混匀,制备候选甲型流感通用疫苗,滴鼻免疫Balb/c小鼠,评价其免疫原性及免疫保护性。结果成功构建pET28a-NP-M1-HSP60表达载体,表达并纯化了NP-M1-HSP60融合蛋白;与SP01水包油乳剂佐剂混合免疫小鼠后,小鼠血清IgG抗体效价较对照组显著提升,鼻、肺灌洗液中sIgA水平显著升高,IgG亚型分析及细胞因子分泌细胞实验表明该候选疫苗可诱导相对均衡的Th1和Th2反应。免疫后小鼠分别对100LD50剂量的A/Beijing/501/2009(H1N1)毒株,100LD50剂量的PR8(H1N1)毒株和50LD50剂量的A/ostrich/Suzhou/097/2003(H5N1)毒株的攻击分别具有100%、100%和67%保护效果。结论 NP-M1-HSP60融合蛋白抗原具有一定的效果,为发展甲型流感通用疫苗提供了实验依据。

关键词： NP M1 HSP60 流感病毒通用疫苗

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临床试验中的流感通用疫苗研发进展

病毒学报 2022年第2期38卷 489-493页

作者：刘泽廖国阳中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所昆明650118

人类与流感病毒的斗争史已经过去一百多年,在人群抗体选择的压力下,流感病毒不断发生突变、重组等方式的进化和流行,在流感病毒的危险因素下,人类的预防医学、病原生物学和疫苗学也取得了巨大进步。对流感通用疫苗的研发成为流感疫苗研... 详细信息

人类与流感病毒的斗争史已经过去一百多年,在人群抗体选择的压力下,流感病毒不断发生突变、重组等方式的进化和流行,在流感病毒的危险因素下,人类的预防医学、病原生物学和疫苗学也取得了巨大进步。对流感通用疫苗的研发成为流感疫苗研发的下一个征程,同时需要全球范围内的广泛协作和科技发展。为此本文综述了近期流感通用疫苗的研究进展,并对已经进入临床试验阶段的通用疫苗进行了分析,为流感疫苗研究提供参考。

关键词：流感通用疫苗

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应对高致病性禽流感病毒H5N1抗原漂移的通用疫苗策略

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动物医学进展 2015年第5期36卷 111-115页

作者：马勇徐晓龙王秀荣陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室兽医生物国家重点开放实验室黑龙江哈尔滨150001

高致病性禽流感病毒(HPAIV)H5N1不仅能造成严重的病理损伤,而且能够跨越种间隔离从禽类直接传播给人类,对人类健康造成巨大的威胁。疫苗免疫是应对HPAIV H5N1最常用的防控手段。但由于流感病毒具有抗原漂移和抗原转变的能力,只针对特定... 详细信息

高致病性禽流感病毒(HPAIV)H5N1不仅能造成严重的病理损伤,而且能够跨越种间隔离从禽类直接传播给人类,对人类健康造成巨大的威胁。疫苗免疫是应对HPAIV H5N1最常用的防控手段。但由于流感病毒具有抗原漂移和抗原转变的能力,只针对特定流行株的常规疫苗不能够有效的应对毒株的不断变异。研制能够激发广泛保护作用的通用疫苗是应对HPAIV H5N1抗原漂移的一种有力措施,该类疫苗以流感病毒中高度保守的蛋白结构域,如M2蛋白胞外域(M2e)、HA蛋白的茎部结构域以及其他的保守抗原表位为免疫原,激发机体产生广泛的保护以应对不断变异的流感病毒。论文主要对现阶段通用疫苗的研究思路及进展做一梳理,以期能够为禽流感疫苗的研制提供有益的帮助。

关键词：高致病性禽流感病毒H5N1 抗原漂移通用疫苗

H1亚型流感病毒通用疫苗的构建及免疫保护效力研究

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H1亚型流感病毒通用疫苗的构建及免疫保护效力研究

作者：杨馥如中国农业科学院

学位级别：硕士

猪流感（swine influenza, SI）是由隶属于正黏病毒科的猪流感病毒（swine influenza virus, SIV）引起的猪急性高度传染性疾病。主要临床症状表现为体温升高、食欲不振、呼吸困难、咳嗽、流产以及延迟出栏等，是目前危害全世界养猪业... 详细信息

猪流感（swine influenza, SI）是由隶属于正黏病毒科的猪流感病毒（swine influenza virus, SIV）引起的猪急性高度传染性疾病。主要临床症状表现为体温升高、食欲不振、呼吸困难、咳嗽、流产以及延迟出栏等，是目前危害全世界养猪业的重要疫病之一。猪流感曾多次在世界上引起大的爆发和流行，其中最严重的一次是1918年西班牙大流感，全球近2100万人感染死亡。2009年墨西哥和北美爆发了甲型H1N1流感，其传染性很强，传播范围很广，再次突显了流感病毒对人类社会造成的巨大危害。目前预防流感发生与传播的最有效方式是疫苗接种，但是由于流感病毒亚型多，变异快，所以要定期更改疫苗株，这不仅消耗大量的人力和物力，并且还存在新疫苗研制滞后于病毒变异这一重大问题。因此，研制一种能够应对流感病毒快速变异，并具有广泛保护作用的“通用型”疫苗具有重要的应用价值。 DNA疫苗因其能够同时诱导机体产生特异性的体液免疫应答和细胞免疫应答而受到了广泛的关注，基于HA基因的流感DNA疫苗也得到了一定的研究，但由于DNA疫苗存在转染效率不高，抗原表达量低的缺点，制约了其在流感通用疫苗研究中的发展。本研究首先探讨了密码子的优化对流感病毒HA基因DNA疫苗在小鼠体内免疫原性及保护效力的影响，进而研究了基于HA基因共有序列的H1亚型流感通用疫苗对异源流感病毒的保护效力，同时也对本实验室之前设计的M2e分支肽疫苗对异源流感病毒的保护效力进行了研究。 1、密码子优化的流感病毒HA基因DNA疫苗在小鼠体内免疫保护效力研究。由于DNA疫苗存在转染效率不高，抗原表达量低的缺点，本实验通过密码子优化的方法提高病毒HA基因的免疫原性。将H1亚型猪流感病毒A/Swine/Guangdong/1/01（H1N1）和rPan09（HA和NA来自A/California/04/09,其余六个片段来自PR8的重组病毒）的HA基因密码子进行优化，连入pCAGGS真核表达载体中，获得pCA-opti-G11和pCA-opti-r09重组质粒。同时将野生型的A/Swine/Guangdong/1/01（H1N1）和rPan09的HA基因与载体pCAGGS相连接，得到pCA-G11和pCA-r09重组质粒，在小鼠体内验证免疫效果和攻毒保护效果。实验表明：HA基因密码子的优化不仅可显著提高DNA疫苗诱导的保护性体液免疫应答和细胞免疫应答的水平，还可有效抑制病毒在小鼠肺脏的复制同时减轻肺脏的病理学变化，能够提供较好的免疫保护。 2、H1亚型流感病毒通用疫苗的免疫保护效力研究。HA是流感病毒最主要的表面抗原，它能够诱导机体产生相应的中和抗体，产生免疫保护作用。本研究从经典H1亚型流感病毒和甲型流感病毒的主要靶抗原HA基因入手，分析获得HA基因的共有序列，进行密码子优化后（optimized consensus, opti-CS）与实验另外两株病毒（A/Swine/Guangdong/1/01（H1N1）和rPan09）优化后的HA基因连入pCAGGS真核表达载体中，构成三种重组质粒，命名为pCA-opti-CS，pCA-opti-G11和pCA-opti-r09，在小鼠体内验证免疫效果以及对异源病毒的保护效果。结果显示：HA基因共有序列密码子优化的DNA疫苗能够诱导小鼠产生较高的抗体滴度和细胞免疫应答水平，并可有效抑制流感病毒A/Swine/Guangdong/1/01（H1N1）和rPan09HA在肺脏中的复制，减轻肺脏病理变化，具有较好的交叉保护效力，能够保护小鼠抵抗异源流感病毒的攻击。 3、流感病毒M2蛋白N端的24个氨基酸M2e在流感病毒中十分保守，是诱导交叉保护性免疫的理想靶抗原。本研究将4个拷贝的M2e通过赖氨酸与通用Th细胞表位偶联获得M2e分支肽（M2e-MAP），添加弗氏佐剂制备了M2e分支肽疫苗（M2e-MAP+Freund），通过建立的攻毒保护试验的小鼠模型对M2e分支肽疫苗进行免疫保护效果评价。结果表明：M2e分支肽疫苗可刺激小鼠产生高滴度的M2e特异性IgG抗体，并对异源病毒H9N2的攻击提供有效的交叉保护。上述结果证实：通过密码子的优化可以显著提升基于流感HA基因DNA疫苗的免疫原性及免疫保护效果，表达H1亚型HA基因共有序列的DNA疫苗能够对异源流感病毒提供有效的交叉保护，作为通用疫苗具有广阔的应用前景。同时M2e分支肽也可作为猪流感的候选疫苗。本实验为流感通用疫苗的研制探索了新的思路，提供了理论基础。

关键词： HA基因密码子优化共有序列 M2e 通用疫苗

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基于流感病毒血凝素的通用疫苗研究进展

湖北农业科学 2021年第14期60卷 10-16页

作者：孟薇张蕾黄金海天津大学生命科学学院天津300072

流感病毒因其传染性强、流行面广、潜伏期短、发病率高等特点对人类和动物健康构成严重威胁。目前的季节性疫苗只能预防相同亚型的流感病毒的感染,对不同亚型流感病毒不能提供有效的保护,因此能够提供广泛保护性的通用流感疫苗的开发成... 详细信息

流感病毒因其传染性强、流行面广、潜伏期短、发病率高等特点对人类和动物健康构成严重威胁。目前的季节性疫苗只能预防相同亚型的流感病毒的感染,对不同亚型流感病毒不能提供有效的保护,因此能够提供广泛保护性的通用流感疫苗的开发成为流感疫苗研究的重点。简要介绍目前通用流感疫苗的各种制备方法并对基于HA的通用疫苗的研究进展进行综述。

关键词：甲型流感病毒血凝素通用疫苗

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M2e合成肽流感通用疫苗的研究

中国动物传染病学报 2013年第1期21卷 1-7页

作者：杨馥如于海马继红周艳君童光志中国农业科学院上海兽医研究所上海200241

M2蛋白是甲型流感病毒的跨膜蛋白,其优点为不易变异,且N端24个氨基酸组成的胞外区(M2e)十分保守,适合作为通用流感疫苗的靶标。因此本实验将4个拷贝的M2e通过赖氨酸与通用Th细胞表位偶联获得M2e分支肽(M2e-MAP),添加弗氏佐剂制备成合成... 详细信息

M2蛋白是甲型流感病毒的跨膜蛋白,其优点为不易变异,且N端24个氨基酸组成的胞外区(M2e)十分保守,适合作为通用流感疫苗的靶标。因此本实验将4个拷贝的M2e通过赖氨酸与通用Th细胞表位偶联获得M2e分支肽(M2e-MAP),添加弗氏佐剂制备成合成肽疫苗免疫小鼠,评价其免疫原性及异源攻毒保护效力。ELISA实验结果表明,该疫苗能刺激机体产生高水平的抗M2e特异性IgG抗体;细胞因子IL-4的检测进一步说明了其能诱导产生高的体液免疫应答水平,ELISPOT实验从IL-4和IFN-γ两个方面分别说明了该疫苗不仅可以诱导高的体液免疫应答,而且能刺激机体产生高水平的细胞免疫应答。对免疫小鼠攻H9N2,通过肺病毒分离滴定和肺组织病理切片等方法检测攻毒保护效果,结果均表明,M2e分支肽疫苗能对异源病毒的攻击产生较好的保护效力。上述结果为流感通用疫苗的研究提供了一种参考思路。

关键词： M2e 通用疫苗免疫交叉保护

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流感病毒血凝素表位通用疫苗设计的研究进展

临床医学进展 2024年第4期14卷 562-567页

作者：郭志杰郭春艳徐翠香西安医学院研究生工作部陕西西安陕西省人民医院中心实验室陕西西安

尽管流感是一个可预防性疾病,但它仍然是一个持续性的公共卫生问题,据统计每年可导致数十万人死亡。由于流感病毒的高度可变性,不可避免地存在疫苗与流行毒株抗原不一致的风险,迫切需要一种具有广泛保护作用或通用的流感病毒疫苗,以预... 详细信息

尽管流感是一个可预防性疾病,但它仍然是一个持续性的公共卫生问题,据统计每年可导致数十万人死亡。由于流感病毒的高度可变性,不可避免地存在疫苗与流行毒株抗原不一致的风险,迫切需要一种具有广泛保护作用或通用的流感病毒疫苗,以预防所有季节性、人畜共患和新出现的大流行流感病毒。流感病毒表面糖蛋白血凝素具有广谱中和抗体识别的位点,被认为是通用疫苗研发的关键靶标,因此血凝素保守保护性表位及中和表位的鉴定对于设计通用流感疫苗和新的靶向治疗至关重要。在这里,本文综述了基于流感病毒血凝素保守表位及中和表位的通用疫苗设计研究进展。

关键词：流感病毒通用疫苗血凝素保守表位中和表位

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甲型流感病毒M2e通用疫苗的研究进展

生物技术通讯 2014年第6期25卷 857-861页

作者：谭伟谢芝勋广西壮族自治区兽医研究所广西畜禽疫苗新技术重点实验室广西南宁530001

流感严重地影响人们的身体健康和工作生活,给社会带来巨大经济损失。疫苗接种是预防流感的有效措施之一,市场上的流感疫苗包括流感灭活疫苗、减毒活疫苗和亚单位疫苗等。这些流感疫苗只能预防相同亚型流感病毒的感染,无法预防不同亚型... 详细信息

流感严重地影响人们的身体健康和工作生活,给社会带来巨大经济损失。疫苗接种是预防流感的有效措施之一,市场上的流感疫苗包括流感灭活疫苗、减毒活疫苗和亚单位疫苗等。这些流感疫苗只能预防相同亚型流感病毒的感染,无法预防不同亚型流感病毒引起的季节性流感和流感大流行,因此迫切需要研发广谱的能预防不同亚型的甲型流感病毒感染的通用疫苗。在此简要介绍甲型流感病毒M2e通用疫苗的研究进展。

关键词：甲型流感病毒 M2e短肽通用疫苗交叉保护

甲型流感病毒基质蛋白2胞外功能区通用疫苗的研究进展

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国际生物制品学杂志 2023年第3期46卷 171-174页

作者：张豫宁杨雪杨娅春杨海涛昆明医科大学公共卫生学院流行病与卫生统计学系昆明650500 昆明医科大学公共卫生学院毒理学系昆明650500 云南省疾病预防控制中心疫苗临床研究中心昆明650034

甲型流感病毒基质蛋白2胞外功能区(matrix protein 2 ectodomain,M2e)通用疫苗的确切保护机制尚未明确,但其能减轻流感症状,抑制病毒的复制、存活和传播.通过使用M2e四聚体通用疫苗、M2e病毒样颗粒疫苗以及M2e多表位通用疫苗联合佐剂等... 详细信息

甲型流感病毒基质蛋白2胞外功能区(matrix protein 2 ectodomain,M2e)通用疫苗的确切保护机制尚未明确,但其能减轻流感症状,抑制病毒的复制、存活和传播.通过使用M2e四聚体通用疫苗、M2e病毒样颗粒疫苗以及M2e多表位通用疫苗联合佐剂等,可提高保护效果,未来具有较大的应用价值.此文通过收集相关文献资料、结合临床实践以及相关动物实验等,综述甲型流感病毒M2e通用疫苗的研究现状、免疫机制及其特点,以期为相关研究提供理论基础.

关键词：流感病毒A型病毒基质蛋白质类通用疫苗免疫效果