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适配子修饰去细胞瓣支架促进再内皮化

适配子修饰去细胞瓣支架促进再内皮化

作者：陈雪华中科技大学

学位级别：硕士

目的:将特异性捕获内皮祖细胞的适配子固定在去细胞瓣支架表面加速再内皮化。方法:制备3组组织工程瓣膜支架:去细胞瓣组、适配子固定的去细胞瓣组(适配子组)、戊二醛交联的去细胞瓣组(戊二醛组)。用流式细胞术检测适配子与内皮祖细胞的... 详细信息

目的:将特异性捕获内皮祖细胞的适配子固定在去细胞瓣支架表面加速再内皮化。方法:制备3组组织工程瓣膜支架:去细胞瓣组、适配子固定的去细胞瓣组(适配子组)、戊二醛交联的去细胞瓣组(戊二醛组)。用流式细胞术检测适配子与内皮祖细胞的结合效率;用荧光显微镜检测适配子在去细胞瓣支架表面的固定。在静态条件下通过细胞单独和混合培养黏附实验检测内皮祖细胞在支架上的黏附能力。用细胞增殖实验评估内皮祖细胞在3组支架上的增殖情况;通过流体生物反应器动态培养检测适配子组支架在流体环境下对内皮祖细胞的捕获能力。结果:流式细胞术结果显示,与成纤维细胞和平滑肌细胞相比,内皮祖细胞与适配子的结合效率最高,表明适配子对内皮祖细胞具有特异性;荧光显微镜结果显示适配子被成功固定在去细胞瓣支架表面。细胞单独和混合培养黏附实验的结果显示适配子组支架上黏附的内皮祖细胞数量高于其余两组支架,表明适配子能够特异性促进内皮祖细胞在去细胞瓣支架上的黏附。细胞增殖实验结果显示适配子能够在短时间内促进内皮祖细胞在去细胞瓣支架上的增殖。流体动态培养结果显示适配子组支架表面黏附的内皮祖细胞数量高于其余两组支架,表明适配子组支架能在流体环境下捕获内皮祖细胞。结论:适配子可促进内皮祖细胞在去细胞瓣支架上的特异性黏附和增殖,并且适配子固定的去细胞瓣支架能在流体环境中捕获内皮祖细胞。因此,适配子可促进去细胞瓣支架再内皮化。

关键词：内皮祖细胞适配子去细胞瓣再内皮化

筛选获得的血型抗原结合黏附素(BabA)适配子可阻断幽门螺杆菌(H.pylori)在小鼠胃内的定植

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细胞与分子免疫学杂志 2023年第9期39卷 793-800页

作者：袁媛李卫鹏周晓静孙伟莉唐晓磊蚌埠医学院第一附属医院核医学科安徽蚌埠233030 皖南医学院第二附属医院转化医学中心安徽芜湖241000 芜湖市临床病原体检测工程中心安徽芜湖241000

目的探索核酸适配子特异性结合幽门螺杆菌(H.pylori)血型抗原结合黏附素(BabA)对H.pylori宿主细胞黏附的阻断作用。方法培养H.pylori菌株并提取基因组,并设计引物PCR扩增BabA基因,扩增获得的BabA基因克隆、构建至原核表达质粒,异丙基-... 详细信息

目的探索核酸适配子特异性结合幽门螺杆菌(H.pylori)血型抗原结合黏附素(BabA)对H.pylori宿主细胞黏附的阻断作用。方法培养H.pylori菌株并提取基因组,并设计引物PCR扩增BabA基因,扩增获得的BabA基因克隆、构建至原核表达质粒,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达并纯化后作为靶标,利用指数富集的配体系统进化技术(SELEX)筛选能够特异性结合BabA的单链脱氧核苷酸(ssDNA)适配子;酶联寡聚核苷酸吸附试验(ELONA)法检测并评估候选适配子的特征;随后在体外细胞水平和小鼠感染模型中,分别采用流式细胞术和菌落计数验证ssDNA适配子阻断H.pylori黏附的效果,同时利用ELISA检测小鼠胃黏膜细胞匀浆中白细胞介素6(IL-6)、 IL-8、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、 IL-10和IL-4的水平。结果提取H.pylori ATCC 43504基因组并构建了pET32a-BabA质粒,诱导后并纯化重组蛋白相对分子质量(Mr)约为39 000;经肽指纹图谱(PMF)分析其与BabA蛋白一致;以此为靶标运用SELEX筛选获得5个候选适配子,经分析鉴定适配子A10、 A30和A42识别相同位点,A3和A16与上述三个适配子各自识别不同的位点。适配子体外能够显著阻断H.pylori的黏附,且动物模型实验证明适配子经灌胃处理后,对胃黏膜的H.pylori定植有阻断效果,且能够减轻诱导的炎症反应,适配子治疗组胃黏膜匀浆中IL-4、 IL-6、 IL-8和TNF-ɑ水平低于模型组。结论适配子特异性结合BabA封闭H.pylori与胃黏膜上皮细胞的黏附能够阻断H.pylori在胃黏膜的定植。

关键词：幽门螺杆菌血型抗原结合黏附素(BabA) 指数富集的配体系统进化技术(SELEX) 适配子定植

适配子血清蛋白组学捕获的AFP阴性肝癌候选标志物的诊断价值

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适配子血清蛋白组学捕获的AFP阴性肝癌候选标志物的诊断价值

作者：黎子华南昌大学

学位级别：硕士

背景与目的:AFP阴性肝癌(ANHC)的诊断仍是临床重要问题,寻找有效的ANHC诊断标志物具有重要意义。适配子是通过指数富集的配体系统进化(SELEX)技术,从人工合成的随机单链寡核苷酸文库中筛选获得能特异性结合生物靶标的寡核苷酸序列,在肿... 详细信息

背景与目的:AFP阴性肝癌(ANHC)的诊断仍是临床重要问题,寻找有效的ANHC诊断标志物具有重要意义。适配子是通过指数富集的配体系统进化(SELEX)技术,从人工合成的随机单链寡核苷酸文库中筛选获得能特异性结合生物靶标的寡核苷酸序列,在肿瘤诊疗中有良好应用前景。在前期工作中,本课题组筛选出了一批ANHC血清适配子,并通过适配子血清蛋白组学捕获到一批ANHC血清候选标志物。在这项研究中,我们使用酶联免疫吸附检测(ELISA)测定了八个候选标志物的血清水平,并评估了它们对ANHC的诊断价值。以期发现有价值的新的ANHC血清标志物。方法:1.收集研究对象及其血清标本:收集2020年9月～2022年12月南昌大学第一附属医院住院治疗的肝癌、肝硬化、慢性肝炎及胃癌患者以及体检正常的正常人血清标本,并收集有关临床资料,包括一般信息、病史、实验室检查、影像学检查、病理检查及其它有关资料。2.测定ANHC候选标志物的血清水平:采用商用ELISA试剂盒检测8种候选血清标志物在ANHC、AFP阳性肝癌(APHC)、肝硬化(LC)、慢性肝炎(CH)、胃癌(GC)患者以及正常对照的血清水平。8种候选血清标志物为富含亮氨酸α2糖蛋白1(LRG1)、血清淀粉样A1蛋白(SAA1)、血清淀粉样A2蛋白(SAA2)、补体C4b结合蛋白α链(C4BPA)、结合珠蛋白(HPT)、结合珠蛋白相关蛋白(HPR)、α1-酸性糖蛋白(A1AGP)和肝素辅因子2(HC Ⅱ)。同步测定异常凝血酶原(DCP)的血清水平作对比研究。3.评价ANHC候选标志物单独和联合的诊断价值:采用受试者工作特征(ROC)曲线下面积(AUC)评价候选血清标志物单独或联合鉴别ANHC与对照的价值。通过二元Logistic回归分析建模实现候选标志物联合分析。根据ROC曲线分析确定最佳阳性界值,计算各候选标志物的诊断效率(敏感度、特异度、准确度、阳性和阴性预测值、阳性和阴性似然比)。4.评价候选血清标志物鉴别ANHC与良性肝病的价值:以ANHC为病例组,良性肝病(慢性肝炎+肝硬化)为对照组,评价各候选标志物鉴别ANHC与良性肝病的价值,并计算诊断效率。结果:1.候选标志物的血清水平及其诊断价值:本研究共检测221～617例血清标本的8种候选标志物水平,结果如下:A1AGP:共测量52例ANHC和292例对照的A1AGP血清浓度,ANHC的血清A1AGP水平低于对照组,其中与肝硬化、慢性肝炎和正常对照组间差异具有统计学意义(P0.05),在鉴别AFP阴性肝癌与各对照组中不具有价值(

关键词： AFP阴性肝癌新标志物诊断适配子

纳米材料的适配子传感器及其在医学检测中的应用

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传感器与微系统 2023年第11期42卷 1-5页

作者：黎子华王婷张焜和南昌大学第一附属医院消化内科江西省消化疾病研究所江西南昌330006

通过指数富集的配体系统进化(SELEX)技术体外筛选产生的适配子,可以高特异性和高亲和力结合生物靶分子,因具有分子体积小、稳定性好、修饰方便等优点,在生物分子检测中应用前景良好。与此同时,纳米材料因其具有表面效应、体积效应和量... 详细信息

通过指数富集的配体系统进化(SELEX)技术体外筛选产生的适配子,可以高特异性和高亲和力结合生物靶分子,因具有分子体积小、稳定性好、修饰方便等优点,在生物分子检测中应用前景良好。与此同时,纳米材料因其具有表面效应、体积效应和量子尺寸效应,各种具有独特性能的纳米材料在生物领域广泛应用。因此,适配子与纳米材料的结合和应用为医学检测领域提供前所未有的发展机遇。本文在简要介绍适配子和纳米技术的基础上,重点介绍基于纳米材料的适配子传感器及其在医学检测中的应用。

关键词：适配子纳米材料适配子传感器医学检测

适配子介导siRNA靶向递送系统的研究进展

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药学学报 2012年第7期47卷 850-855页

作者：王啸林王清清宋海峰广西医科大学广西南宁530002 军事医学科学院放射与辐射医学研究所北京100850

RNA干扰技术(RNAi)作为一种新型的基因治疗技术已应用到许多疾病的体外研究中,但靶向递送技术仍是目前制约小干扰RNA(siRNA)药物成功进入临床的关键技术问题。寡核苷酸适配子具有高亲和性、高靶向性,成为递送siRNA的重要手段。本文综述... 详细信息

RNA干扰技术(RNAi)作为一种新型的基因治疗技术已应用到许多疾病的体外研究中,但靶向递送技术仍是目前制约小干扰RNA(siRNA)药物成功进入临床的关键技术问题。寡核苷酸适配子具有高亲和性、高靶向性,成为递送siRNA的重要手段。本文综述了siRNA体内递送的主要障碍,以及近年来适配子介导的siRNA靶向递送系统的最新研究进展。

关键词： siRNA 适配子靶向药物递送

“适配子-PLGA纳米粒”靶向超声/光声相变造影剂的制备

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中国医学影像技术 2014年第11期30卷 1609-1613页

作者：张斌冉海涛王志刚苏蕾郝兰重庆医科大学超声影像学研究所重庆400010 重庆医科大学附属第二医院超声科重庆400010

目的研制一种适配子偶联的包裹纳米金棒和液态氟碳的PLGA纳米粒。方法采用双乳化法制备包裹纳米金棒及全氟己烷(PFH)的PLGA纳米粒(GNP);用碳二亚胺法将适配子与PLGA纳米粒连接获得"适配子-PLGA纳米粒"靶向相变造影剂(AP-GNP)。光镜、激... 详细信息

目的研制一种适配子偶联的包裹纳米金棒和液态氟碳的PLGA纳米粒。方法采用双乳化法制备包裹纳米金棒及全氟己烷(PFH)的PLGA纳米粒(GNP);用碳二亚胺法将适配子与PLGA纳米粒连接获得"适配子-PLGA纳米粒"靶向相变造影剂(AP-GNP)。光镜、激光共聚焦显微镜及电镜下观察及检测AP-GNP基本性质;激光共聚焦显微镜下及流式细胞术观察及检测适配子与纳米粒连接情况;以激光仪辐照AP-GNP观察其光致相变情况;观察AP-GNP与乳腺癌细胞MCF-7特异性结合情况。结果成功制备适配子修饰的包裹纳米金棒和PFH的PLGA纳米粒,其平均粒径为(472.43±25.82)nm,适配子与纳米粒的连接率为达97.98%;激光辐照AP-GNP后,光致相变效果明显;AP-GNP粘附于MCF-7细胞周围,未修饰适配子GNP未见明显特异性结合。结论成功制备偶联的包裹纳米金棒和PFH的PLGA纳米粒,其光致相变效果明显,靶向性能良好。

关键词：造影剂适配子相变纳米技术

特异性结合幽门螺杆菌黏附蛋白A(HpaA)核酸适配子的筛选及鉴定

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细胞与分子免疫学杂志 2019年第6期35卷 533-539页

作者：华影陈丽萍李生周发友唐晓磊皖南医学院第二附属医院基础实验室皖南医学院护理学院皖南医学院第二附属医院消化科芜湖市第二人民医院消化科安徽芜湖241000

目的通过指数富集的配体系统进化技术(SELEX)筛选特异性结合幽门螺杆菌(H.pylori)黏附蛋白A(HpaA)的核酸适配子,并鉴定其结合特性。方法构建pET28a/HpaA原核表达质粒并诱导表达纯化重组HpaA蛋白;以重组HpaA蛋白为靶标利用SELEX技术筛选... 详细信息

目的通过指数富集的配体系统进化技术(SELEX)筛选特异性结合幽门螺杆菌(H.pylori)黏附蛋白A(HpaA)的核酸适配子,并鉴定其结合特性。方法构建pET28a/HpaA原核表达质粒并诱导表达纯化重组HpaA蛋白;以重组HpaA蛋白为靶标利用SELEX技术筛选出能够与HpaA具有高特异性、高亲和力结合的核酸适配子。随后利用筛选所得HpaA适配子通过体外实验验证与H.pylori菌体的结合以及对临床胃黏膜切片中H.pylori的检测效能。结果本研究培养并提取ATCC26695菌株基因组,通过PCR扩增HpaA部分基因长度约699 bp,并成功克隆构建了原核表达质粒pET28a/HpaA。经异丙基β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达、纯化获得纯度约98%的重组HpaA蛋白作为筛选靶标。利用SELEX技术通过10轮正向筛选和5轮的负向筛选,获得6条与HpaA高亲和力的适配子分别命名为HA1~HA6。其中适配子HA6具有较高的亲和力和特异性,且适配子HA6核心序列在体外仍表现出与H.pylori菌体较高的结合力;利用羟基荧光素(FAM)标记的HA6适配子对166例H.pylori感染的患者胃黏膜中H.pylori进行检测,检出率为94.58%,高于同批次快速脲酶检测法的检出率(87.95%)。结论本研究筛选出的特异性结合H.pylori菌体表面HpaA的适配子,可能作为一种新的方法应用于胃黏膜组织中H.pylori的检测。

关键词：幽门螺杆菌(H.pylori) 幽门螺杆菌黏附蛋白A(HpaA) 指数富集的配体系统进化技术(SELEX) 适配子

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基于适配子的靶向治疗药物研究进展

药学学报 2016年第7期51卷 1068-1076页

作者：窦晓倩付洁宋海峰广西医科大学广西南宁530021 军事医学科学院放射与辐射医学研究所北京100850

适配子是应用指数富集的配体系统进化技术(systematic evolution of ligands by exponential enrichment,SELEX)从单链随机寡核苷酸文库中筛选得到的,能与靶标高特异性、高亲和力结合的配体,靶点可以是金属离子、核酸、蛋白质、有机物... 详细信息

适配子是应用指数富集的配体系统进化技术(systematic evolution of ligands by exponential enrichment,SELEX)从单链随机寡核苷酸文库中筛选得到的,能与靶标高特异性、高亲和力结合的配体,靶点可以是金属离子、核酸、蛋白质、有机物甚至整个有机体。适配子作为靶向治疗及诊断药物有效应用于癌症、黄斑变性、急性冠脉综合征和血管性血友病等疾病,同时也可作为药物的靶向配体,协助药物在特定的组织位点释放。与其他靶向配体相比,适配子因其独特的优势,可针对靶向治疗开发适配子-药物偶联物(aptamer-drug conjugates,Ap DCs),进而促进了生物分析和生物医学的发展。本文总结了近年适配子类靶向治疗药物的研究及临床试验进展,并阐述了其在生物医学中的前景优势和面临的挑战。

关键词：适配子靶向治疗纳米递送癌症

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适配子介导的siRNA转运

生物化学与生物物理进展 2012年第5期39卷 410-415页

作者：谭燕张兴梅南方医科大学基础医学院神经生物学教研室广州510515

小分子干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)因能快速抑制哺乳动物特定基因的表达而用于各种疾病的治疗,然而选择合适的载体将siRNA安全有效地转运进入靶细胞仍是制约siRNA应用于临床治疗的重要因素.越来越多的转运载体被开发出来,其... 详细信息

小分子干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)因能快速抑制哺乳动物特定基因的表达而用于各种疾病的治疗,然而选择合适的载体将siRNA安全有效地转运进入靶细胞仍是制约siRNA应用于临床治疗的重要因素.越来越多的转运载体被开发出来,其中包括针对细胞表面蛋白的适配子(aptamer).Aptamer是一种能与靶分子高特异性和高亲和结合的寡核苷酸,已经越来越多地用于疾病的诊断和治疗.Aptamer作为载体介导siRNA转运可提高治疗的靶向性并减少副作用,这将为siRNA应用于临床靶向治疗提供一种特异有效的途径.目前,已经发现几种aptamers可以介导siRNA的转运,如anti-PSMA aptamer,anti-HIV gp120 aptamer,anti-CD4 aptamer等.本文将综述aptamer介导siRNA转运的最新研究进展.

关键词： SELEX 适配子 siRNA 转运