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分析化学 2020年第5期48卷 662-669页

作者：赵颖王楠高华龙郭子轩陆安祥郭晓军卢静华栾云霞锦州医科大学药学院北京农业质量标准与检测技术研究中心农业农村部农产品质量安全风险评估实验室(北京)农产品产地环境监测北京市重点实验室首都师范大学

以特异性的核酸适配体作为识别元件,制备了黄曲霉毒素B;（AFB;）的适配体亲和柱（AAC）,用于AFB;的特异性识别和富集。对AAC的载样液中有机溶剂含量、载样液的体积和淋洗体积等条件进行了优化。此AAC吸附AFB;的柱容量达到（334.6±18.2... 详细信息

以特异性的核酸适配体作为识别元件,制备了黄曲霉毒素B;（AFB;）的适配体亲和柱（AAC）,用于AFB;的特异性识别和富集。对AAC的载样液中有机溶剂含量、载样液的体积和淋洗体积等条件进行了优化。此AAC吸附AFB;的柱容量达到（334.6±18.2） ng,且AAC可重复使用20次。莲子样品经AAC净化富集后,用高效液相色谱-光化学衍生荧光法检测,外标法定量,AFB;检出限达到0.05 ng/mL,回收率为91.8%～108.6%。本方法为食品、农产品和中药等复杂基质中痕量毒素的提取富集和分析提供了新的参考,具有良好的应用前景。

关键词：适配体亲和柱黄曲霉毒素B 固相萃取 N-羟基硫代琥珀酰亚胺活化的琼脂糖莲子

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核酸适配体亲和柱净化富集莲子中黄曲霉毒素B;及其测定

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分析化学 2021年

作者：赵颖王楠高华龙郭子轩陆安祥郭晓军卢静华栾云霞锦州医科大学药学院北京市农业标准与检测研究中心北京市农业环境检测重点实验室农业农村部农产品质量安全风险评价(北京)实验室首都师范大学

以高亲和力、特异性强的核酸适配体作为新型识别元件，制备了黄曲霉毒素B;的适配体亲和柱，并用于黄曲霉素素B;的特异性识别和富集。通过对适配体亲和柱的载样液中有机溶剂含量、载样液的体积和淋洗体积等条件进行优化，该适配体亲和柱... 详细信息

以高亲和力、特异性强的核酸适配体作为新型识别元件，制备了黄曲霉毒素B;的适配体亲和柱，并用于黄曲霉素素B;的特异性识别和富集。通过对适配体亲和柱的载样液中有机溶剂含量、载样液的体积和淋洗体积等条件进行优化，该适配体亲和柱的柱容量达到（329.2 ± 12.5） ng。莲子样品经适配体亲和柱净化富集后，用高效液相色谱-光化学衍生荧光法检测，外标法定量，检出限达到0.05 ng/mL，回收率为91.8%～108.6%。此适配体亲和柱最少可重复使用20次。本方法为食品、农产品和中药等复杂基质中痕量毒素的提取富集和分析提供了新的选择，具有良好的应用前景。

关键词：适配体亲和柱黄曲霉毒素B 固相萃取 N-羟基硫代琥珀酰亚胺活化的琼脂糖莲子

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核酸适配体亲和柱用于牛奶中乳铁蛋白和氨基糖苷类抗生素检测应用研究

核酸适配体亲和柱用于牛奶中乳铁蛋白和氨基糖苷类抗生素检测应用...

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作者：王楠锦州医科大学

学位级别：硕士

目的样品前处理是分析检测过程中的重要步骤,特别是采用仪器分析方法时,基质杂质过多不仅会干扰待测物的检测,还会导致色谱柱污染,缩短色谱柱寿命。样品前处理的目的是最大程度地将目标物从样品基质中提取出来,同时尽量去除杂质,降低基... 详细信息

目的样品前处理是分析检测过程中的重要步骤,特别是采用仪器分析方法时,基质杂质过多不仅会干扰待测物的检测,还会导致色谱柱污染,缩短色谱柱寿命。样品前处理的目的是最大程度地将目标物从样品基质中提取出来,同时尽量去除杂质,降低基质干扰,从而降低检出限,提高检测灵敏度与准确度。本研究课题中,以亲和力高、特异性强的核酸适配体作为分子识别元件,分别制备了乳铁蛋白（Lactoferrin,Lf）和氨基糖苷类抗生素（Aminoglycosides,AGs）的适配体亲和柱,用于牛奶中营养物质Lf和AGs药物残留检测中的特异性识别和富集净化。方法以N-羟基硫代琥珀酰亚胺（N-hydroxy succinimide,NHS）活化的琼脂糖作为固相载体,与氨基修饰的适配体通过共价结合,制备了乳铁蛋白适配体亲和柱（Lf-AAC）。对Lf-AAC的淋洗液种类和体积、洗脱液中盐离子浓度与p H等条件进行优化,并对Lf-AAC的承载量、稳定性、特异性及可重复使用次数等性能进行考察。将优化后的Lf-AAC用于牛奶中Lf的富集纯化,并利用高效液相色谱法（HPLC）进行定量分析检测。基于纳米金比色法验证卡那霉素适配体与4种AGs的亲和力。以NHS活化的琼脂糖作为固相载体,与氨基修饰的适配体通过共价结合,制备了氨基糖苷类抗生素适配体亲和柱（AGs-AAC）。对AGs-AAC的上样液p H、洗脱液成分等工作条件进行摸索,并对AGs-AAC的柱容量、特异性及可重复使用次数等性能进行考察。将优化后的AGs-AAC用于牛奶中的卡那霉素A、卡那霉素B、妥布霉素、丁胺卡那霉素4种AGs残留检测的前处理,并利用超高效液相色谱串联质谱法（UPLC-MS/MS）进行定量分析检测。结果Lf-AAC可特异性识别乳铁蛋白,其最大承载量可达500±13.7μg,可重复使用10次。牛奶样品通过Lf-AAC净化富集后,利用HPLC法测定并采用外标法定量,回收率为85.45%～115.54%。卡那霉素适配体与卡那霉素A、卡那霉素B、妥布霉素、丁胺卡那霉素4种AGs均具有较好的亲和力,AGs-AAC可做为类别特异性适配体亲和柱。AGs-AAC可承载的最大目标物的量为8μg,可至少重复使用20次。建立UPLC-MS/MS法测定牛奶样品中的4种AGs,4种目标待测物的平均回收率为85.86%～96.69%。结论基于适配体识别靶标范围广泛这一特点,本研究分别制备了针对单一靶标的乳铁蛋白适配体亲和柱和可识别多靶标的氨基糖苷类抗生素适配体亲和柱,优化出最佳应用条件后用于牛奶样品各目标物检测的前处理过程。利用核酸适配体制备的固相萃取柱操作简便、净化效果好、特异性强、可多次重复使用且成本较低,具有良好的应用前景。

关键词：适配体亲和柱乳铁蛋白氨基糖苷类抗生素牛奶

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海洋贝类中大田软海绵酸核酸适配体技术研究与应用

海洋贝类中大田软海绵酸核酸适配体技术研究与应用

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作者：王晓煜浙江海洋大学

学位级别：硕士

大田软海绵酸(OA)是一种腹泻性贝毒,经贝类摄入后富集在消化腺内,能溶于甲醇、乙醇和乙醚等有机溶剂,不溶于水,无色,无味,容易误食,导致食物中毒,引起腹泻、恶心、呕吐、腹痛等症状。另外,OA具备脂溶性和热稳定性,在通常的加工手艺中很... 详细信息

大田软海绵酸(OA)是一种腹泻性贝毒,经贝类摄入后富集在消化腺内,能溶于甲醇、乙醇和乙醚等有机溶剂,不溶于水,无色,无味,容易误食,导致食物中毒,引起腹泻、恶心、呕吐、腹痛等症状。另外,OA具备脂溶性和热稳定性,在通常的加工手艺中很难去除。生物传感器以其灵敏度和快速便携而被广泛认可,核酸适配体因其与重金属离子、毒素、抗生素或病毒等的高亲和力和高特异性而被广泛推广。1.基于核酸适配体磁分离富集目标物,构建了一种新型比色型适配体传感器,用于快速检测大田软海绵酸。巯基修饰的固定链自组装到磁珠上,与适配体链杂交反应后,再加入带有辣根过氧化物酶(HRP)-纳米金标记的探针链与适配体链相接。从而形成一个具有HRP-纳米金标记的适配体传感器,催化3,3’,5,5’-四甲基联苯胺(TMB)产生变色反应,测定在A610/A520的值。在最佳条件下,传感器在0.2-2.0ng·m L范围内有良好的线性关系和较高的灵敏度,R=0.9989,检测限(LOD)0.044ng·m L,在加标回收实验中时,平均回收率为82.23%-98.73%,相对标准偏差在(RSD)3.34%～10.88%之间。2.根据核酸适配体亲和柱具有专一性和特异性,自制大田软海绵酸核酸适配体亲和柱富集、分离、纯化大田软海绵酸,获得纯净的目标物。N-羟基硫代琥珀酰亚胺(NHS)活化的琼脂凝胶糖共价偶联氨基修饰的大田软海绵酸核酸适配体链,制备大田软海绵酸核酸适配体亲和柱,联用液相色谱质谱,检测大田软海绵酸。经过实验条件优化,0-100 ng之间有着不错的线性关系R2=0.9991,检出限(LOD)=0.043ng·m L-1。在对在售贝类样品的检测中平均回收率在88.50%-106.37%之间,相对标准偏差在(RSD)1.82%～5.54%之间,重复利用11次,回收率不低于70%。通过研究发现核酸适配体具有更好的高特异性和亲和性,易于修饰,适用于快速检测。以它为识别元件的亲和柱作为样品前处理纯化、净化、分离具有更好的选择性,将会成为未来的重点发展方向之一。

关键词：大田软海绵酸核酸适配体生物传感器显色传感器适配体亲和柱

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核酸适配体在真菌毒素快速检测和前处理技术中的应用

核酸适配体在真菌毒素快速检测和前处理技术中的应用

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第十一届全国化学生物学学术会议

作者：赵颖王楠刘洪美高华龙栾云霞北京农业质量标准与检测技术研究中心农业部农产品质量安全风险评估实验室(北京)

由真菌感染引起的果蔬采后腐烂变质,可造成巨大的经济损失,且真菌产生的毒素严重危害人体健康,而真菌毒素具有分子结构类似、种类多、痕量高毒的特点,特异性强、亲和力高的识别元件是痕量真菌毒素的高灵敏度、快速检测的关键[1]。方法... 详细信息

由真菌感染引起的果蔬采后腐烂变质,可造成巨大的经济损失,且真菌产生的毒素严重危害人体健康,而真菌毒素具有分子结构类似、种类多、痕量高毒的特点,特异性强、亲和力高的识别元件是痕量真菌毒素的高灵敏度、快速检测的关键[1]。方法作为一种新型的功能核酸识别元件,核酸适配体对靶标具有严格的识别力和高度的结合力,同时具有分子小、易合成、易修饰、相对稳定等诸多可望超越抗体的优势,为毒素类小分子目标物的分离纯化及分析检测提供了新的选择[2]。核酸适配体与功能材料的互作关系和信号强化放大作用,使其在化学发光、光学检测、电化学、侧流层析等生物传感方面展现出的优良特性,可实现对毒素小分子的高灵敏、高特异性的快速检测和富集净化[3].本研究以固定文库代替固定靶标的Capture-SELEX方法,结合样品基质特点筛选获得交链格胞酚等靶标的核酸适配体,利用ITC、CD谱、控温紫外和荧光光谱技术,对寡核苷酸链与目标物的结合位点、协同性和序列功能性等方面进行探索,对核酸序列进行工程化设计,从而获得低成本、高亲和力和特异性的适配体。进一步以适配体为识别元件,建立了利用比色、荧光和基于血糖仪检测毒素的快速检测方法,以及用于真菌毒素前处理的高通量磁固相萃取技术和适配体亲和柱。未来,基于核酸适配体的快速检测和前处理技术将在果蔬生产、采收、储运、加工等各环节发挥重要作用,成为基层监测站、大型物流承接园区和农产品市场和商超中筛查污染的利器。

关键词：核酸适配体真菌毒素筛选适配体亲和柱侧流层析试纸条

来源： cnki会议评论

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