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X射线辐射远端效应诱发小鼠卵巢储备功能下降的实验研究

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中华生殖与避孕杂志 2023年第7期43卷 703-712页

作者：周莹郭妍妍李岩叶舒婷张步美黎小佩王建梅杜湧瑞天津医科大学第二医院计划生育科&辅助生殖中心天津300211 天津医科大学第二医院放射治疗科天津300211

目的探讨X射线辐射远端效应(X-ray radiation-induced abscopal effects,X-RIAEs)对小鼠卵巢储备的影响及可能的作用机制。方法16只动情周期规律的6~8周龄雌性C57BL/6J小鼠分为对照组和照射组,8只/组,照射组小鼠麻醉后每日给予胸部局部... 详细信息

目的探讨X射线辐射远端效应(X-ray radiation-induced abscopal effects,X-RIAEs)对小鼠卵巢储备的影响及可能的作用机制。方法16只动情周期规律的6~8周龄雌性C57BL/6J小鼠分为对照组和照射组,8只/组,照射组小鼠麻醉后每日给予胸部局部区域8 Gy X射线照射,连续照射3 d,对照组小鼠仅给予麻醉处理。照射结束21 d后,检测两组小鼠动情周期、血清激素及促炎性因子水平、卵巢组织形态学变化;利用转录组测序技术(ribonucleic acid sequencing,RNA-seq)检测小鼠卵巢组织RNA转录组表达情况,筛选差异表达基因(differentially expressed genes,DEGs)后行基因本体论-生物学过程(gene ontology-biological processes,GO_BP)分析,通过应用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)验证测序结果,免疫组织化学染色(immunohistochemistry,IHC)检测精卵发生特异性碱性螺旋环螺旋蛋白1(spermatogenesis-and oogenesis-specific basic helix-loop-helix-containing protein 1,SOHLH1)和中性粒细胞弹性蛋白酶(neutrophil elastase,NE)在卵巢组织内表达和定位情况。结果照射组小鼠动情周期紊乱,主要停滞于间期,照射组小鼠始基卵泡数量[10.50(1.25,12.75)]及生长卵泡数量[4.50(2.50,9.00)]均显著少于对照组小鼠[60.00(30.00,90.25),P<0.001;18.50(18.00,20.75),P<0.001],差异均具有统计学意义,而闭锁卵泡数量[56.00(45.25,98.75)]明显多于对照组[12.50(5.25,20.25)],差异具有统计学意义(P<0.001);照射组小鼠血清雌二醇水平[(70.28±5.27)pmol/L]、抗苗勒管激素水平[(104.00±6.98)μg/L]均明显低于对照组小鼠[(97.58±7.25)pmol/L,P=0.016;(129.70±8.39)μg/L,P=0.046],而照射组小鼠卵泡刺激素水平与对照组小鼠相比,差异无统计学意义(P=0.996);与对照组小鼠血清肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)水平[(31.61±12.89)μg/L]、白细胞介素(interleukin,IL)-1β水平[(52.75±2.06)μg/L]相比,照射组小鼠血清TNF-α水平[(488.30±36.20)μg/L]和IL-1β水平[(62.37±2.50)μg/L]均明显升高(P<0.001,P=0.018),照射组小鼠血清IL-6水平较对照组小鼠也呈上升趋势,但差异无统计学意义(P=0.301)。GO_BP分析结果显示,X-RIAEs诱导小鼠卵巢组织表达下调的DEGs主要参与卵泡发育过程,表达上调的DEGs主要参与卵巢组织炎症反应过程,RT-qPCR结果与测序结果一致。IHC结果显示,照射组小鼠卵巢组织SOHLH1阳性表达面积[(23.18±4.00)%]显著低于对照组[(65.90±6.28)%,P=0.005],而NE阳性表达面积[(30.73±4.00)%]显著高于对照组[(14.47±2.22)%,P=0.024]。结论X-RIAEs可诱发卵巢组织炎性反应,并抑制小鼠卵巢卵泡生长及发育过程,进而导致卵巢储备功能下降。

关键词：放射治疗卵巢储备生育力远端效应始基卵泡

丙戊酸通过调控巨噬细胞极化干预乳腺肿瘤原位辐射所致正常组织远端效应的研究

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丙戊酸通过调控巨噬细胞极化干预乳腺肿瘤原位辐射所致正常组织远...

作者：贾贝迪山东大学

学位级别：硕士

研究背景乳腺癌为常见的癌症,其发病率和死亡率是对妇女健康的主要威胁。放疗(RT)作为癌症的一种有效治疗手段,贡献了约40%的癌症治愈。电离辐射(IR)可通过直接靶向和间接非靶向两种方式对机体造成损伤。非靶向作用即远端效应(RAE)包括... 详细信息

研究背景乳腺癌为常见的癌症,其发病率和死亡率是对妇女健康的主要威胁。放疗(RT)作为癌症的一种有效治疗手段,贡献了约40%的癌症治愈。电离辐射(IR)可通过直接靶向和间接非靶向两种方式对机体造成损伤。非靶向作用即远端效应(RAE)包括转移瘤效应及对正常组织造成的损伤,本课题聚焦于正常组织的RAE现象,关于RAE的发生与其干预的问题尚未解决,是该领域研究的热点。丙戊酸(VPA)作为组蛋白去乙酰化酶抑制剂(HDACis),临床上常用于抗癫痫治疗。已证实VPA具有抗肿瘤作用,本课题组前期研究表明,通过原发性乳腺肿瘤动物模型建立IR诱导RAE的大鼠模型,200 mg/kg VPA处理后在对肿瘤发挥放射增敏作用的同时,还能缓解IR所致的大鼠体重减轻及正常组织器官的脏器指数(OI)的降低,这提示VPA可作为放疗的理想佐剂,减轻IR对正常组织的毒副作用,但其防护机制尚不清楚。据报道,炎症和免疫反应可能参与了 RAE的发生。巨噬细胞作为重要的免疫活性细胞,其M1及M2型极化状态决定着体内炎症的发生或消退。已证实巨噬细胞通过分泌ROS和多种细胞因子介导炎性反应,参与IR诱导的正常组织RAE的发生,潜在提示VPA的保护作用可能与巨噬细胞介导的炎症反应有关。因此本课题将深入研究VPA减轻IR对正常组织毒副作用的机制是否通过调控巨噬细胞的极化状态,改变其免疫功能,从而调节组织内炎症反应。旨在丰富RAE发生机制及防护的理论,为临床上减轻肿瘤患者正常组织RAE损伤提供实验证据和理论指导。研究方法对50日龄雌性SD大鼠一次性灌胃20 mg DMBA诱导原发性乳腺癌形成。HE染色观察到乳腺肿物内有大量恶性细胞增生且导管排列紊乱。在该模型成功建立的基础上,将大鼠随机分为四组:Control、VPA、IR及IR+VPA联合处理,建立原位瘤辐照诱发RAE的动物模型。对大鼠原位乳腺肿瘤进行分次小剂量照射(2 Gy/次/天,连续四天,共8 Gy),剂量率为2.25 Gy/min,以模拟临床常用RT模式。照射全程对大鼠腹腔注射200 mg/kg VPA(2次/日,连续6日)。处理完毕后观察32天结束实验。在脾脏、小肠、肺脏、肝脏及脑组织内,免疫组织化学法(IHC)检测细胞增殖标志物Brdu及Ki67的表达;巨噬细胞标志物F4/80、CD68及髓系来源细胞标志物CD11b的阳性表达;M1型巨噬细胞表面标志物CD80的阳性表达。Western blotting(WB)检测M2型巨噬细胞功能标志物Arg-1蛋白表达;RT-qPCR检测各脏器内巨噬细胞极化表型及相关炎性因子的mRNA表达(M1型表面标志物CD86;M2型表面标志物CD163;促炎因子IFN-γ、IL-12;抗炎因子TGF-β、IL-10)。IHC分析各脏器内CD8+T淋巴细胞及分泌的颗粒酶-B(Granzyme-B)的表达。VPA的剂量根据其血药安全浓度及对大鼠的毒性最终选择为200 mg/kg,相当于临床治疗癫痫病剂量;并由此推算出细胞模型中VPA处理浓度为0.5 mM。在细胞水平上研究VPA保护正常组织免受RAE损伤的实验设计:(1)研究VPA对受照MCF-7肿瘤细胞培养基所作用的巨噬细胞极化的影响:对MCF-7细胞施加单次8 Gy照射及浓度为0.5 mM的VPA联合处理后,用该培养基直接作用于巨噬细胞RAW264.7,RT-qPCR检测巨噬细胞相关因子的表达;(2)研究VPA通过调控巨噬细胞极化保护MCF-10A正常乳腺上皮细胞的作用:首先建立模拟整体水平RAE发生的动态变化过程模式:MCF-7细胞接受单次8 Gy照射及浓度为0.5 mM的VPA联合处理后,用该培养基作用于MCF-10A,再换正常培养基继续培养MCF-10A,由此获得VPA和IR联合处理的来自MCF-10A细胞的条件培养基(VPA/IR-TCM);然后用VPA/IR-TCM培养RAW264.7,作用后取该巨噬细胞裂解液处理MCF-10A,48 h后通过CCK-8实验检测MCF-10A细胞增殖能力,同时RT-qPCR检测巨噬细胞相关因子的表达;(3)研究VPA对已发生M1型极化的巨噬细胞再极化的影响:用VPA/IR-TCM培养被受照肿瘤细胞培养基直接培养过的RAW264.7,RT-qPCR检测巨噬细胞相关因子的表达。实验数据以均数±标准差(X±S)表示,在SPSS软件上进行Student-Newman-Keuls多重比较检验的单因素方差分析以做比较。P值代表:*P效应在前期研究基础上,通过Brdu染色观察到在脾脏、小肠、肺脏及脑组织中,VPA使IR诱发降低的Brdu阳性细胞数量均显著升高;Ki67染色结果显示在脾脏、肺脏及肝脏组

关键词：放疗远端效应正常组织丙戊酸巨噬细胞

锰佐剂通过重塑免疫微环境促进放疗的抗肿瘤作用

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陆军军医大学学报 2024年第13期46卷 1477-1484页

作者：成佳楠郭金铭贾罄竹朱波陆军军医大学(第三军医大学)第二附属医院肿瘤科重庆400037 陆军军医大学(第三军医大学)第二附属医院肿瘤免疫治疗重庆市重点实验室重庆400037 重庆医科大学生命科学研究院重庆400016

目的探索锰佐剂在放疗抗肿瘤作用中的增敏效应及其可能机制。方法选取6~8周龄的雄性C57BL/6小鼠(体质量为20~23 g)300只,通过皮下接种肿瘤细胞构建动物模型,按随机数字表法分为4组:对照组、放疗组、锰佐剂治疗组、放疗与锰佐剂联合治疗... 详细信息

目的探索锰佐剂在放疗抗肿瘤作用中的增敏效应及其可能机制。方法选取6~8周龄的雄性C57BL/6小鼠(体质量为20~23 g)300只,通过皮下接种肿瘤细胞构建动物模型,按随机数字表法分为4组:对照组、放疗组、锰佐剂治疗组、放疗与锰佐剂联合治疗组;荷瘤第9天起每隔1 d通过滴鼻给予锰佐剂(10μg/只)治疗,共4次;第10天给予肿瘤局部单次20 Gy放疗,定期监测小鼠的肿瘤生长及生存状况。通过构建单侧皮下荷瘤模型明确锰佐剂对放疗抗肿瘤作用的增敏效应;构建双侧皮下荷瘤模型观察锰佐剂对放疗诱导的远端效应;采用流式细胞术检测单侧皮下荷瘤模型(MC38-OVA)肿瘤浸润免疫细胞的改变,采用免疫组化染色检测单侧皮下荷瘤模型小鼠的脾脏功能。结果基于多瘤种单侧皮下荷瘤模型重复验证,显示锰佐剂联合放疗可显著抑制肿瘤生长,延长小鼠生存期(P远端效应,无论是否进行放疗,两侧肿瘤均出现明显缩退(P<0.05);流式细胞术检测发现,锰佐剂可进一步增加放疗诱导的CD8^(+)T细胞浸润(P<0.05),且可降低放疗引起的Treg细胞和MDSC细胞浸润(P<0.05);小鼠脾脏的病理观测结果显示锰佐剂可增加脾脏的淋巴细胞储备,改善脾脏功能。结论锰佐剂可作为放疗的增敏剂,通过改善脾脏功能重塑肿瘤微环境协同抗肿瘤。

关键词：放射治疗锰佐剂远端效应增敏剂

溶瘤病毒H101结合局部加热治疗对转移肿瘤病灶的远端效应

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癌症 2006年第8期25卷 919-924页

作者：胡放胡晓桦余萍张家兴娄国光刘宏利吴波赵荣华夏惠群汪裕陈杰贲勇陈思懿上海三维生物技术有限公司上海200001 广西医科大学附属肿瘤医院肿瘤科广西南宁530021 四川省肿瘤医院肿瘤内科四川成都610041 同济大学附属铁路医院介入科上海200072 浙江大学附属第一医院泌尿外科浙江杭州310003 美国贝勒医学院分子和人类遗传系德克萨斯州休斯顿77030

背景与目的:远端效应是肿瘤的局部治疗引起的远处抗肿瘤作用。本研究探索溶瘤腺病毒H101局部注射结合局部加热治疗诱发远端抗瘤效应的可行性。方法:放化疗失败或拒绝放化疗并有转移病灶的5例肿瘤患者(2例鼻咽癌,1例肺癌,1例骨旁质肉瘤和... 详细信息

背景与目的:远端效应是肿瘤的局部治疗引起的远处抗肿瘤作用。本研究探索溶瘤腺病毒H101局部注射结合局部加热治疗诱发远端抗瘤效应的可行性。方法:放化疗失败或拒绝放化疗并有转移病灶的5例肿瘤患者(2例鼻咽癌,1例肺癌,1例骨旁质肉瘤和1例膀胱癌),以H101(5×1011～15×1011VP)瘤内注射联合60min42℃局部热疗进行治疗。结果:2例患者注射灶、非注射灶肿瘤完全消退而长期生存,3例患者也观察到非注射病灶有不同程度缓解后死亡,生存期分别为29、15、13个月。结论:H101瘤内注射联合加热治疗能诱发一定的远端抗瘤效应。

关键词：肿瘤生物治疗溶瘤腺病毒热疗远端效应

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放疗诱导远端效应的免疫相关机制研究进展

中国药理学与毒理学杂志 2020年第12期34卷 930-936页

作者：金丽娅凤志慧山东大学公共卫生学院劳动卫生与环境卫生系山东济南250012

在肿瘤学中,远端效应主要指局部放疗触发全身抗肿瘤作用,诱导远处非靶向肿瘤消退。近年来,该作用被认为主要由免疫系统介导。研究表明,放疗联合免疫疗法可增强全身抗肿瘤反应,提高远端效应的发生率。本文从肿瘤相关抗原释放与损伤相关... 详细信息

在肿瘤学中,远端效应主要指局部放疗触发全身抗肿瘤作用,诱导远处非靶向肿瘤消退。近年来,该作用被认为主要由免疫系统介导。研究表明,放疗联合免疫疗法可增强全身抗肿瘤反应,提高远端效应的发生率。本文从肿瘤相关抗原释放与损伤相关分子模式暴露启动远端效应、细胞因子与趋化因子调节远端效应、免疫逃逸限制远端效应、巨噬细胞参与远端效应等方面重点阐述免疫系统在远端效应中的作用机制,为放疗联合免疫治疗诱导远端效应在临床中的应用提供参考。

关键词：远端效应放疗抗肿瘤免疫反应免疫治疗

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肿瘤放疗远端效应研究进展

中华放射医学与防护杂志 2017年第4期37卷 311-315页

作者：朱琳邵春林复旦大学放射医学研究所上海200032

广义的远端效应指局部辐射对整个生物体产生的影响.近年来,研究者们关注的远端效应主要集中于肿瘤局部放疗后,远处转移瘤的自发消退现象和非照射野正常组织的损伤.越来越多的证据表明,远端效应的产生与免疫系统密切相关.放疗可能成为一... 详细信息

广义的远端效应指局部辐射对整个生物体产生的影响.近年来,研究者们关注的远端效应主要集中于肿瘤局部放疗后,远处转移瘤的自发消退现象和非照射野正常组织的损伤.越来越多的证据表明,远端效应的产生与免疫系统密切相关.放疗可能成为一种全身性免疫系统激活的手段,在恶性肿瘤的发展和转归过程中发挥重要作用.目前,一些靶向作用于免疫检测点通路的治疗药物已经投入多种恶性肿瘤治疗的临床使用.免疫检测点抑制剂和放疗联合使用,通过诱发强力的远端效应,使人体自身产生有效的抗肿瘤作用,取得了良好的疗效.本文就目前在放疗联合免疫治疗领域,远端效应的研究进展和未来的发展方向作一简述.

关键词：远端效应放疗肿瘤免疫治疗

放射治疗对乳腺癌患者免疫功能影响的研究进展

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兵团医学 2024年第1期22卷 59-63页

作者：仪松王义海新疆医科大学第三临床医学院乌鲁木齐市830000

乳腺癌是一种全身性疾病,传统观点已经认识到乳腺癌对患者的系统性影响,乳腺癌与机体免疫功能的相关关系也已在越来越多的研究中被认识,提示免疫功能在乳腺癌病程中起到了复杂和重要的作用。乳腺癌临床表现的个体化也进一步提示了不同... 详细信息

乳腺癌是一种全身性疾病,传统观点已经认识到乳腺癌对患者的系统性影响,乳腺癌与机体免疫功能的相关关系也已在越来越多的研究中被认识,提示免疫功能在乳腺癌病程中起到了复杂和重要的作用。乳腺癌临床表现的个体化也进一步提示了不同免疫功能状态对乳腺癌肿瘤细胞的发生、发展有密切的关系。乳腺癌的综合治疗中,放射治疗是疗效明确的选择,相当多的基础研究及临床观察,除了证明放射治疗在乳腺癌综合治疗中的地位,也观察到放射治疗对免疫系统的特殊作用和影响,其重要作用已经对治疗效果及预后产生重要影响。根据既往的放射生物学知识,由于对处于细胞周期内的造血细胞等分裂活跃的细胞存在显著的杀伤效果,由此推断放射线对免疫功能特别是细胞免疫具有抑制作用,使免疫系统的功能异常。随着研究的进展,尤其是对不同分割模式和剂量的探索发现,放射治疗可能对乳腺癌患者的先天性免疫系统和适应性免疫系统存在正向作用,即放射治疗可能对乳腺癌患者免疫系统存在调节作用,并可能诱发“远端效应”等有趣的临床现象。结合研究结果,不同的分割模式和最佳剂量对乳腺癌患者的免疫功能影响的对应关系尚需大量研究证实,最佳的放射治疗模式仍需要探索,以提高机体的抗肿瘤作用,发挥放射治疗最佳疗效。本文就放射治疗对乳腺癌患者免疫功能的影响作一简要综述。

关键词：放射治疗乳腺癌免疫功能远端效应

2-己基-4-戊炔酸通过重编程肿瘤相关巨噬细胞极化刺激辐射诱导远...

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作者：段雯华山东大学

学位级别：硕士

研究目的据世界卫生组织公布的2020年全球最新癌症负担数据统计,乳腺癌新发病例数快速增长,成为全球第一大癌症。放射治疗（Radiotherapy,RT）是临床上应用广泛且高效的癌症治疗手段,其主要机制是通过损伤DNA的方式引起肿瘤细胞直接死亡... 详细信息

研究目的据世界卫生组织公布的2020年全球最新癌症负担数据统计,乳腺癌新发病例数快速增长,成为全球第一大癌症。放射治疗（Radiotherapy,RT）是临床上应用广泛且高效的癌症治疗手段,其主要机制是通过损伤DNA的方式引起肿瘤细胞直接死亡[1]。然而近年来,辐射诱导的“远端效应”引起临床医师和肿瘤学家的关注。远端效应是指对原发肿瘤部位进行局部放射治疗后,非受照区的肿瘤产生肿瘤自发消退,其机制被认为是一种RT刺激的全身抗肿瘤免疫反应[2]。然而,事实上,由于放疗也可诱导产生免疫抑制,使得远端效应的发生较为罕见。如何有效克服放疗诱导的免疫抑制,增强局部RT的全身抗肿瘤疗效以及促进远端效应发生是该领域关注的焦点问题。肿瘤相关巨噬细胞（Tumor-associated macrophages,TAMs）是肿瘤微环境中主要的细胞群,约占肿瘤基质的50%,肿瘤中大多数TAMs呈M2型,与肿瘤的生长、转移和侵袭[3]密切相关。但TAMs是一类可塑性极强的免疫细胞群体,能够在抗肿瘤M1型和促肿瘤M2型之间转换。M1型巨噬细胞可诱导促炎因子的释放,发挥杀伤肿瘤细胞的作用。推测认为“重塑”TAMs向抗肿瘤M1表型极化可能能够促进远端效应的发生。因此,寻找一种能通过特异地促进TAMs向M1型分化并诱发远端效应的制剂是该领域的当务之急。我们前期研究表明,2-己基-4-戊烯酸（2-hexyl-4-pentylenacid,HPTA）,一种丙戊酸衍生物,具有组蛋白去乙酰化酶抑制剂（histone deacetylase inhibitor,HDACi）功能,是一种通过降低DNA修复蛋白活性和增加细胞凋亡来治疗乳腺癌的新型药物[4],最近的一项研究发现TMP195（一种Ⅱa类HDACi）可通过调节TAMs向抗肿瘤M1表型极化来抑制肿瘤细胞增殖,并诱导乳腺肿瘤血管正常化来减少转移[5],因此,HDACis类制剂可能能够影响TAMs的极化,但对于HPTA是否具备影响TAMs分化的能力,以及RT联合HPTA是否能够刺激放疗诱导的远端效应发生尚未有文献报道。本课题旨在研究HPTA联合RT是否能够刺激远端效应发生,并在此基础上探讨其发生的机制,为增强局部放疗的全身抗肿瘤疗效提供可靠的理论指导,对于有肿瘤转移的乳腺癌患者的防治也具有重要的临床意义。研究方法1.辐射诱导的远端效应动物模型的建立取50日龄雌性SD大鼠（体重150±15g）,将溶于植物油中的环境致癌剂二甲基苯并[a]蒽（DMBA）经口一次性灌胃,在DMBA灌胃后大约90天左右,大鼠原发性乳腺肿瘤成功被诱导。随后在原发性乳腺肿瘤模型基础上,建立辐射诱导的远端效应动物模型。选取20只肿瘤数目达2个或2个以上的大鼠随机分为4组:对照组（control）、单独HPTA组、单独RT组和RT联合HPTA组（RT+HPTA）。对照组不做任何处理;HPTA组以及联合给药组均在相同时间经腹腔注射HPTA 20mg/kg,连续给药6天,共给药12次,每次间隔12小时;对于照射,只选择1个肿瘤作为辐照肿瘤进行局部精确辐照,其余肿瘤作为非受照区肿瘤,RT组与RT+HPTA组照射总剂量分别为8Gy,处理方式为剂量分割（2Gy/次/天,共4次）,均在给药后第二天同一时间进行照射处理。在处理后第10天处死部分大鼠进行实验检测,其余大鼠持续观察肿瘤变化直到第35天。2.动物肿瘤体积测量给予照射和药物处理后,每周记录照射和未照射肿瘤体积的变化,按照临床标准公式计算肿瘤体积:肿瘤体积（mm3）=长（L）×宽（W）2/2。3.未照射区肿瘤组织病理观察通过HE染色观察乳腺肿瘤组织的病理形态学变化。4.未照射区肿瘤细胞增殖能力的检测在大鼠处死前24h给予腹腔注射5-溴-2-脱氧尿苷（BrdU）100mg/kg,通过免疫组织化学染色检测远端非受照区肿瘤组织中BrdU和ki67增殖标志物的表达。5.未照射区肿瘤的巨噬细胞表型鉴定①巨噬细胞的鉴定:通过免疫组织化学法和免疫荧光共染法检测巨噬细胞标志物F4/80、CD68和CD11b,研究巨噬细胞的数量及分布;②关于巨噬细胞极化状态的鉴定:通过免疫荧光共染法、qRT-PCR和蛋白印迹实验分别检测M1/M2型巨噬细胞的表面标志物（CD86/CD163+）与功能标志物（iNOS/Arg-1+）的表达,研究巨噬细胞的极化。6.未照射区肿瘤的巨噬细胞相关炎性因子的检测采用qRT-PCR检测与M1型和M2型巨噬细胞活性相关的炎性因子TNF-α、IFN-γ、IL-12、IL-6、IL-10 和 TGF-β 等因子的表达水平。7.未照射区肿瘤组织的血管检测通过免疫印迹实验检测未受照肿瘤组织中具有血管生成特性因子IFN-γ的蛋白表达水平;采用血管内皮细胞表面标记物CD31和CD34,通过免疫荧光染色评估非受照区肿瘤血管密度和完整性。统计分析所有实验数据以平均值±标准差（X±S）表示,数据采用单因素方差分析。P＜0

关键词：乳腺癌 2-己基-4-戊炔酸放射治疗远端效应肿瘤相关巨噬细胞极化

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电离辐射致骨损伤远端效应的细胞机制研究

电离辐射致骨损伤远端效应的细胞机制研究

作者：李旭芳复旦大学

学位级别：硕士

[研究背景和目的]随着肿瘤治疗手段和诊断方法的进步,肿瘤患者的生存率明显增加。放射治疗是临床恶性肿瘤治疗的一种有效的和不可缺少的方法。然而,放射治疗在杀死肿瘤细胞的同时可损伤正常组织,放疗后骨损伤包括骨质疏松及其骨折即是... 详细信息

[研究背景和目的]随着肿瘤治疗手段和诊断方法的进步,肿瘤患者的生存率明显增加。放射治疗是临床恶性肿瘤治疗的一种有效的和不可缺少的方法。然而,放射治疗在杀死肿瘤细胞的同时可损伤正常组织,放疗后骨损伤包括骨质疏松及其骨折即是肿瘤放疗的远后期效应之一,且多数仅在发生骨折后才给予诊断,是常见的癌症放疗后遗症,病因不明,治疗手段缺乏。癌症放疗引起的骨骼并发症己在乳腺癌、脑癌、盆腔肿瘤和血液系统肿瘤等的临床研究中得到报道。而近年有临床研究和动物实验证据提示,即使是局部放疗也有可能引起全身性包括非受照区域骨骼的损伤效应即电离辐射致骨损伤远端效应(abscopal effect)。此外,由于腹腔等局部照射使腹腔内一些对骨代谢平衡有重要调控作用的器官如肾脏的功能发生改变,也可能是腹腔局部放疗引起区域性和全身性包括非受照部位骨骼的骨密度下降、骨质疏松和非脆性骨折发生率增加的发生机理之一。但有关局部放疗引起非受照区域骨骼损伤即癌症放疗相关骨损伤远端效应的病因机制尚不明确。本研究首先采用137Cs 7射线照射成骨细胞和。肾小管上皮细胞,同时建立细胞条件培养基方法、成骨细胞-成骨细胞共培养体系和肾小管上皮细胞-成骨细胞共培养体系,观察受照后细胞直接或/和条件培养基对未受照成骨细胞生物学功能,包括增殖、分化、体外矿化能力及其分化相关基因和凋亡的影响,探讨电离辐射致骨损伤远端效应及其细胞机制,有望为临床癌症放疗相关骨损伤远端效应的防治提供一个新的干预治疗靶点和理论依据。[研究方法]取大鼠头盖骨分离培养的原代成骨细胞和大鼠肾小管上皮细胞株(NRK-52E),传代后给予不同剂量(0,1,2,5,10Gy)1γ射线照射,照后24h收集照射后细胞条件培养基(ICCM)。用10%、20%浓度的照射后细胞条件培养基培养未受照OB,相差显微镜下观察细胞形态,MTT法观察ICCM对OB增殖的影响,PNPP偶氮法观察ICCM对OB碱性磷酸酶(ALP)活性的影响,茜素红(ARS)矿化结节染色并计算面积以观察OB体外矿化能力改变,RT-PCR半定量分析ICCM对成骨细胞ALP、OPG、OC等相关基因mRNA表达的影响,流式细胞仪用Annexin-FITC/PI双染法观察ICCM致OB凋亡改变。同时,采用Transwell培养板建立成骨细胞-成骨细胞共培养体系和肾小管上皮细胞-成骨细胞共培养体系,以进一步阐明受照(IR)成骨细胞或受照(IR)。肾小管上皮细胞对未受照(NR) OB生物学功能影响及其细胞机制。经5Gy137Cs γ射线照射后的成骨细胞或肾小管上皮细胞株NRK-52E,照后分别培养2,24,48,72h,再与未受照OB共培养以观察其生物学功能的改变;并采用不同剂量137Cs γ射线(0,1,2,5,10Gy)照射成骨细胞和大鼠肾小管上皮细胞株(NRK-52E),照后2h(OB)或72h (NRK-52E)与未受照成骨细胞共培养,观察未受照(NR) OB生物学功能如增殖、分化、矿化能力及相关基因和蛋白表达的改变,以探讨电离辐射致骨损伤的间接效应及其细胞机制。[研究结果]1. ICCM能调节成骨细胞生物学功能,表现为抑制增殖和分化,引起细胞死亡或凋亡。来自受照OB的条件培养基可使OB发生纤维细胞形态改变,细胞突起和突起连接均减少,10%和20%浓度的10Gy ICCM均使未受照的OB增殖受到明显抑制,差异有统计学意义(p效应关系。3.受照NRK-52E细胞条件培养基对未受照成骨细胞增殖、ALP有一定影响作用。10%浓度ICCM作用时,10Gy照射组的NRK-52E细胞ICCM可引起未受照OB的增殖能力明显抑制;20%浓度ICCM作用时,不同剂量组的NR

关键词：远端效应放射治疗成骨细胞条件培养基电离辐射共培养 Transwell板肾小管上皮细胞