检索结果-南通市图书馆

过度自噬与早发型子痫前期胎盘功能紊乱的关系

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

过度自噬与早发型子痫前期胎盘功能紊乱的关系

作者：高丽重庆医科大学

学位级别：硕士

目的：本文通过检测人胎盘滋养细胞和血管内皮细胞中自噬相关蛋白微管相关蛋白1轻链3（microtubule-associated protein1light chain3，LC3）和Beclin-1的表达情况，证实早发型子痫前期胎盘中滋养细胞和血管内皮细胞发生过度自噬。进而... 详细信息

目的：本文通过检测人胎盘滋养细胞和血管内皮细胞中自噬相关蛋白微管相关蛋白1轻链3（microtubule-associated protein1light chain3，LC3）和Beclin-1的表达情况，证实早发型子痫前期胎盘中滋养细胞和血管内皮细胞发生过度自噬。进而，通过葡萄糖氧化酶（glucoseoxidase, GO）模拟体外氧化应激环境，以滋养细胞和血管内皮细胞为研究对象，探讨过度自噬参与早发型子痫前期（early-onsetpreeclampsia，EOPE）胎盘功能紊乱的病理及分子机制。方法：1.收集2010年1月至2012年5月在重庆医科大学附属第一医院产科收治的18例早发型子痫前期（自噬体的发生情况;组织免疫荧光共标法检测硝基酪氨酸（nitrotyrosine）和LC3、Beclin-1在胎盘组织中的表达关系。2.以GO模拟氧化应激环境，通过细胞免疫荧光法、实时荧光定量PCR（quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR）及蛋白印记法（western blot, WB）方法测定经处理后的人绒毛外滋养细胞株（HTR8/SVneo）和人脐静脉内皮细胞株（humanumbilical vein endothelial cells, HUVECs）自噬发生的情况，透射电镜观察各组细胞中自噬体。然后通过hoechst33258观察各组细胞凋亡发生情况，WB检测各组细胞中cleaved caspase-3的表达情况。最后通过WB检测滋养细胞中基质金属蛋酶9（matrix metalloproteinase9,MMP9）和血管内皮细胞中血管内皮生长因子受体2（vascularendothelial growth factors receptor2, VEGFR2）表达情况，transwell侵袭实验检测滋养细胞细胞侵袭能力，管腔成形实验检测HUVECs的成管能力。结果：1. EOPE胎盘中自噬发生增加。（1）免疫组化提示早发型子痫前期胎盘滋养细胞和血管内皮细胞中LC3和Beclin-1表达量较正常胎盘增高（P 自噬体。（3）组织免疫荧光共标法发现EOPE胎盘中nitrotyrosine表达较正常胎盘增加，同时EOPE胎盘中LC3和Beclin-1表达增强。2.氧化应激诱导的过度自噬削弱HTR8/SVneo和HUVECs细胞功能。（1）细胞免疫荧光、qRT-PCR、WB均提示GO模拟氧化应激环境下HTR8/SVneo和HUVECs中GO组LC3和Beclin-1表达较正常组增加，差异有统计学意义（P 自噬体。（2）Hoechst33258染色提示各组细胞中凋亡的发生无明显差异，同时WB提示各组细胞中cleaved caspase-3表达无明显差异（P>0.05）。（3）WB及细胞免疫荧光结果示HTR8/SVneo中GO组MMP9表达较其他组降低（P 过度自噬。2.过度自噬降低HTR8/SVneo侵袭力和HUVECs管腔成形能力。3.滋养细胞和血管内皮细胞过度自噬可能是早发型子痫前期胎盘功能紊乱的另一重要发病机制。

关键词：过度自噬早发型子痫前期滋养细胞血管内皮细胞胎盘功能紊乱

过度自噬对急性肺损伤小鼠模型白介素—33表达和失控性炎症的调控作用及初步机制探讨

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

过度自噬对急性肺损伤小鼠模型白介素—33表达和失控性炎症的调控...

作者：雷铭重庆医科大学

学位级别：硕士

目的:研究过度自噬(Excessive autophagy)对白介素-33(Interleukin-33,IL-33)在急性呼吸窘迫综合征(acute respiratory distress syndrome,ARDS)中促炎作用的调控作用。方法:1.收集正常健康对照者和临床ARDS患者的血浆标本,用ELISA的方法检测其中IL-33的表达量,用细胞因子磁珠分选法检测其中TNF-α、IL-1β、IL-2、IL-6和IL-10表达量。2.将20只雄性C57BL/6 WT小鼠随机分成4组,分别是空白对照组(N组),脂多糖处理组(LPS组)、脂多糖+雷帕霉素预处理组(RAPA组)、脂多糖+3-甲基腺嘌呤预处理组(3-MA组),n=5/组。采用气管滴注LPS的方式来制备急性肺损伤模型。在LPS组小鼠气管滴注含LPS的PBS制备肺损伤模型。在手术前30分钟,按体重比例给予RAPA组小鼠腹腔注射雷帕霉素4mg/kg,按体重比例给予3-MA组小鼠腹腔注射3-甲基腺嘌呤15mg/kg。于术后24小时观察小鼠的一般情况;取小鼠血液、肺组织及肺泡灌洗液标本;HE染色并在显微镜下观察记录其形态学变化,评估小鼠肺组织的损伤程度;免疫组化与qRT-PCR检测小鼠肺组织中IL-33蛋白和mRNA的表达情况;免疫荧光及qRT-PCR检测小鼠肺组织中NF-κB的表达情况;western-blot检测小鼠肺组织中LC3和P62表达情况;ELISA方法检测小鼠血清与肺泡灌洗液中IL-33表达,细胞因子磁珠分选方法检测CXCL-1、TNF-α、IL-10、IL-13、IL-17A、IL-4、IL-6和CXCL-5水平的变化。结果:1.人血浆IL-33水平及其与其它细胞因子相关性ARDS患者血浆IL-33水平高于健康对照组(P<0.0001);相关性分析显示,ARDS患者血浆中IL-33与TNF-α、IL-1β、IL-2和IL-6呈正相关,与IL-10呈负相关。2.小鼠肺组织病理改变光镜下观察经HE染色的肺组织,LPS组、RAPA组和3-MA组小鼠肺组织均可见明显水肿、肺泡壁广泛增厚、肺泡塌陷、肺泡内出血和大量炎症细胞浸润。其中,3-MA组小鼠肺组织上述病理改变较LPS组明显减轻,RAPA组小鼠肺组织上述病理改变较LPS组加重,N组未见明显的肺损伤及炎症表现。3.小鼠血清及肺泡灌洗液中IL-33水平变化与空白对照组相比,LPS组、RAPA组和3-MA组小鼠血清及肺泡灌洗液中IL-33的水平均发生了不同程度的变化。与LPS组相比,在经过RAPA预处理后,小鼠血清及肺泡灌洗液当中IL-33的水平有所增加(P<0.0001,P<0.0001),经过3-MA预处理后,血清及肺泡灌洗液中IL-33水平稍增加,但低于LPS组水平(P<0.05,P<0.05)。4.小鼠肺组织中IL-33蛋白的表达与对照小鼠相比,LPS组、RAPA组及3-MA组小鼠肺组织中IL-33均有一定程度的增加。与LPS组相比,经过RAPA预处理之后的RAPA组小鼠肺组织中的IL-33蛋白水平增加,经过3-MA预处理之后的3-MA组小鼠肺组织中IL-33蛋白水平降低。5.小鼠肺组织中IL-33 mRNA的表达qRT-PCR数据显示,LPS组小鼠肺中IL-33 mRNA升高,3-MA组中mRNA的表达低于LPS组(P<0.001)。RAPA组肺组织中IL-33mRNA,高于LPS组(P<0.05)。6.小鼠血清和肺泡灌洗液中多种细胞因子水平的变化RAPA组小鼠血清以及肺泡灌洗液中CXCL-1、CXCL-5、TNF-α、IL-17A和IL-6的表达量增加,其表达量高于LPS组(p<0.001,p<0.05;p<0.05,p<0.05;p<0.01,p<0.05;p<0.0001,p<0.001;p<0.05,p<0.001)。3-MA组血清以及肺泡灌洗液中CXCL-1、CXCL-5、TNF-α、IL-17A、IL-6的表达量相对于LPS组有所下降(P<0.0001,p<0.01;p<0.0001,p<0.0001;p<0.0001,p<0.01;p<0.001,p<0.001;p<0.05,p<0.01)。RAPA组小鼠血清以及肺泡灌洗液中IL-10的表达量低于LPS组(P<0.05,p<0.0001),3-MA组小鼠血清以及肺泡灌洗液中IL-10的表达量高于LPS组(P<0.01,p<0.05)。LPS组、RAPA组、3-MA组小鼠血清及肺泡灌洗液中IL-4和IL-13表达量无明显统计学差异。7.小鼠肺组织LC3-Ⅱ和P62的表达量变化与正常对照组相比,LPS组小鼠肺组织中LC3B-Ⅱ的表达量增加,LC3B-Ⅱ/LC3B-Ⅰ的比值增加。RAPA组小鼠肺组织中LC3-Ⅱ的表达量高于LPS组,LC3B-Ⅱ/LC3B-Ⅰ的比值增加。3-MA组小鼠肺组织中LC3-Ⅱ的表达量低于LPS组,LC3B-Ⅱ/LC3B

关键词：急性肺损伤过度自噬白介素-33 炎症

塑化剂DEHP通过其代谢产物MEHP诱导卵巢颗粒细胞过度自噬导致雌性生殖毒性的机制研究

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

塑化剂DEHP通过其代谢产物MEHP诱导卵巢颗粒细胞过度自噬导致雌性...

作者：许博宁夏医科大学

学位级别：硕士

背景近些年来,塑料的污染和泛滥已逐渐成为世界性的问题。塑化剂DEHP被广泛的使用在各种塑料PVC制品中。DEHP在机体内会很快被酶代谢为MEHP,而MEHP是DEHP在体内参与癌症、糖尿病、卵巢早衰和子宫内膜异位症等多种疾病的主要物质。以往对... 详细信息

背景近些年来,塑料的污染和泛滥已逐渐成为世界性的问题。塑化剂DEHP被广泛的使用在各种塑料PVC制品中。DEHP在机体内会很快被酶代谢为MEHP,而MEHP是DEHP在体内参与癌症、糖尿病、卵巢早衰和子宫内膜异位症等多种疾病的主要物质。以往对于DEHP生殖毒性的研究大多集中在卵巢类雌激素、颗粒细胞凋亡等方面。少部分虽然关注过细胞自噬和氧化应激在卵巢中的作用,但对于自噬的种类和氧化应激之间的联系并不清楚。此外,是否可以通过氧化应激的调控机制来抵御DEHP（MEHP）对卵巢的生殖毒性,仍然是未知的。因此,为预防卵巢毒性损伤提供新的见解和理论依据,探究DEHP对卵巢的损伤机制,刻不容缓。目的构建并评价塑化剂（DEHP）损伤雌性小鼠的生殖毒性模型,明确DEHP诱导卵巢细胞自噬的原因;探究DEHP及其代谢产物MEHP是否能引起卵巢颗粒细胞过度自噬和氧化应激以及两者之间的潜在相互联系;探索通过氧化应激通路调控卵巢颗粒细胞自噬的潜在机制。方法1.雌性4周龄ICR小鼠经DEHP（500、1500mg/kg/d）连续灌胃30天,每周记录一次体重变化;阴道细胞脱落学检测雌性小鼠动情周期;计算卵巢脏器系数;Elisa检测血清中雌激素水平;组织形态学HE检测卵巢结构变化,以此来评估DEHP的生殖损伤毒性。2.免疫印迹和免疫组化检测卵巢自噬相关基因Beclin-1、LC3-Ⅱ的表达、分布和定位;CCK-8检测MEHP处理GCs和KGN细胞后细胞的存活率,以此来评估DEHP及其代谢产物MEHP是否能引起颗粒细胞自噬。3.检测卵巢和KGN细胞氧化应激指标MDA、SOD和GSH的变化;DCFH-DA染色检测KGN细胞内源性ROS的含量;WB检测自噬相关基因的表达。探究MEHP导致颗粒细胞氧化应激与自噬之间的关系。4.免疫印迹和RT-PCR检测KGN细胞Keap1-Nrf2基因的表达;Nrf2免疫荧光、核质分离、免疫共沉淀、LC3-Ⅱ免疫荧光等实验检测Nrf2的入核。以此来评估抗氧化通路Keap1-Nrf2与自噬之间的关系。结果在本研究中,我们发现500mg/kg/d、1500mg/kg/d DEHP暴露雌性小鼠会导致小鼠动情后期与动情间期的比值降低,动情周期紊乱;雌激素水平下降;卵巢脏器系数降低;卵巢初级和次级卵泡数目减少,闭锁卵泡增加,卵巢功能障碍。这显示DEHP可显著的导致雌性生殖损伤。除此之外,免疫印迹和免疫组化结果显示,DEHP暴露会增加自噬相关基因Beclin-1、LC3-Ⅱ的表达,但其在卵巢中无特异性分布。采用200μM MEHP处理小鼠GCs和人KGN细胞24h后,可显著降低细胞数目和活力,微管相关蛋白轻链Ⅱ（LC3-II）的表达量显著增加。除此之外,应用自噬激动剂雷帕霉素（Rapa）和LY294002预处理KGN细胞会加重MEHP造成的细胞损伤。这提示MEHP可能是通过引起卵巢颗粒细胞过度自噬来发挥作用的。为探讨MEHP诱导颗粒细胞自噬的作用机制,我们检测了MEHP处理颗粒细胞后氧化指标MDA,抗氧化指标SOD、GSH的活力变化。结果显示,MEHP可以显著降低细胞内SOD、GSH的水平,增加MDA的水平。而在使用抗氧化剂NAC预处理人卵巢KGN细胞后,可在一定程度逆转MEHP对颗粒细胞的损伤,清除细胞内多余的ROS。这提示MEHP可通过氧化应激导致颗粒细胞过度自噬。我们研究还发现,使用200μM的MEHP暴露KGN细胞,可显著增加抗氧化通路Nrf2及其下游HO-1等基因的表达,促进Nrf2与Keap1的解离和Nrf2的入核,参与抗氧化酶的表达。与此同时,使用Nrf2抑制剂ML385预处理KGN细胞可加剧MEHP对颗粒细胞的损伤,造成自噬相关基因Beclin-1、LC3-Ⅱ的表达上调,激活自噬。而在使用Keap1-Nrf2结合抑制剂ML334后可逆转这一MEHP造成的颗粒细胞损伤,保护细胞的生存率。结论本研究表明,DEHP可以破坏卵巢的结构和功能,造成卵巢生殖损伤;DEHP及其代谢产物MEHP可诱导卵巢颗粒细胞自噬和氧化应激;MEHP能够通过诱导颗粒细胞产生大量的ROS造成颗粒细胞过度自噬;DEHP及其活性代谢产物MEHP可通过Keap1-Nrf2信号通路调节卵巢颗粒细胞的过度自噬。

关键词： DEHP MEHP 过度自噬氧化应激 Keap1-N

母婴分离应激致认知障碍中重要功能氨基酸及生物学效应研究

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

母婴分离应激致认知障碍中重要功能氨基酸及生物学效应研究

作者：王笑天军事科学院

学位级别：硕士

母婴分离（Maternal Separation,MS）是描述哺乳动物生命早期遭受不良应激刺激的经典早年应激模型,可导致成年后认知障碍和情绪异常。氨基酸是重要的生命活性物质,研究表明母婴分离应激可导致机体代谢震荡,其中氨基酸及其代谢发生变化... 详细信息

母婴分离（Maternal Separation,MS）是描述哺乳动物生命早期遭受不良应激刺激的经典早年应激模型,可导致成年后认知障碍和情绪异常。氨基酸是重要的生命活性物质,研究表明母婴分离应激可导致机体代谢震荡,其中氨基酸及其代谢发生变化可能与机体认知障碍密切相关,但结果尚无定论。近年来利用代谢组学技术已在罹患不同疾病的患者体内分析筛选出具有潜在生物学特性的代谢物,为疾病研究、诊断和治疗提供干预手段。亮氨酸作为必须氨基酸可迅速透过血脑屏障进入中枢神经系统,在神经元的生存调控中发挥重要作用,但具体机制尚不清楚。本研究通过代谢组学技术分析和筛选出母婴分离应激大鼠血清和脑脊液中可能参与认知调控的氨基酸,并探索关键氨基酸变化（亮氨酸）在认知障碍中的生物学作用,从神经元自噬的角度出发,揭示了亮氨酸缺乏对神经元自噬的调控机制,为阐明母婴分离应激致认知障碍发生的分子机制提供新的理论依据,为改善该类应激人群的精神健康状态提供新的治疗思路。一、母婴分离应激致大鼠认知障碍的氨基酸组学研究为了观察MS应激对雌、雄大鼠认知功能的影响,从代谢组学角度探索外周血清及中枢脑脊液氨基酸在MS应激影响下的差异,筛选出具有一定生物学意义的氨基酸,并通过分子生物学实验进行验证。使用MS方法建立雌、雄大鼠早年应激模型。采用Open-field旷场实验评估大鼠陌生环境自主探索能力,物体识别实验评估动物对新旧物体的记忆能力,Morris水迷宫实验评估动物空间学习和记忆能力。采用超高效液相色谱-串联质谱联用仪（UPLC-MS/MS）和代谢组学检测和筛选血清及脑脊液内氨基酸。采用LDH快速检测试剂盒和流式细胞术检测氨基酸干预GC诱导的神经元损伤模型的LDH释放量和细胞凋亡率。结果显示MS应激的雌、雄大鼠在空间自主探究能力、记忆能力及空间学习记忆功能较CON组均下降,差异有统计学意义（P＜0.05,P＜0.01）,MS应激雌性大鼠认知能力评分略高于雄性大鼠;尼氏染色显示雄性MS大鼠海马CA1、CA3区,雌性MS大鼠海马CA3区神经元较CON组减少,差异有统计学意义（P＜0.05,P＜0.01）,神经细胞排列疏松,染色较浅,其余区域神经元数量变化及排布未见显著差异;Elisa法检测血清和脑脊液GC和NE含量,GC含量升高,差异有统计学意义（P＜0.01）,NE水平变化无差异。对血清和脑脊液氨基酸绝对定量,根据定量结果建立数学模型,PLS-DA和OPLS-DA结果显示MS应激雌、雄大鼠血清和脑脊液氨基酸谱差异显著,综合定量数据在整体数据模型中的变量投影重要度（VIP＞1.0）、代谢物的可靠度（Corr.Coeffs）、单维检验分析|log2F|＞0得到雌性大鼠血清中犬尿氨酸和脑脊液中苏氨酸为具有潜在生物学特性的氨基酸;对VIP及Corr.Coeffs进行排序,筛选出雌、雄MS大鼠脑脊液中赖氨酸、亮氨酸、5-羟赖氨酸、天冬氨酸4种氨基酸在多组排序中重合度高;细胞学实验确定100μmol/L GC为神经元体外应激损伤模型的实验浓度,叠加4种氨基酸的不同浓度梯度,发现亮氨酸在10μmol/L以上、其余三种氨基酸在100μmol/L以上浓度时,与100μmol/L GC组相比,LDH释放量及细胞凋亡率较降低,差异有统计学意义（P＜0.05,P＜0.01）。二、亮氨酸在母婴分离应激致大鼠认知障碍中的生物学作用为观察不同含量亮氨酸饮食对MS应激大鼠认知功能的调控作用以自噬和凋亡的发生为切入点,探讨亮氨酸在MS应激致认知障碍中发挥的主要生物学效应。对雌、雄大鼠进行实验分组:对照正常饮食组（CON+N）,对照低亮氨酸饮食组（CON+L-LEU）,MS应激正常饮食组（MS+N）,MS应激低亮氨酸饮食组（MS+L-LEU）,MS应激高亮氨酸饮食组（MS+H-LEU）;对动物进行认知行为学检测:同第一章。采用酶标记免疫吸附测定实验法（ELISA）检测脑脊液亮氨酸水平。采用透射电镜检测大鼠海马自噬体。采用Tunel免疫荧光染色检测大鼠海马凋亡发生。采用全自动蛋白质印迹定量分析系统（WES）检测自噬及凋亡相关蛋白Beclin-1、Bcl-2、Bax表达。结果显示雌、雄大鼠正常低亮氨酸饮食组、MS应激正常饮食组、MS应激低亮氨酸饮食组较正常生长饮食组脑脊液亮氨酸含量降低,MS应激高亮氨酸饮食组较MS应激低亮氨酸饮食组升高,差异有统计学意义（P＜0.05,P＜0.01）。对照低亮氨酸饮食组、MS应激正常饮食组、MS应激低亮氨酸饮食组、MS应激高亮氨酸饮食组雌、雄大鼠旷场评分和物体识别指数较对照正常饮食组降低,雄性MS应激高亮氨酸饮食组旷场评分和物体识别指数较MS应激低亮氨酸饮食组升高,差异有统计学意义（P＜0.01）,雌性MS高亮氨酸饮食组较MS低亮氨酸饮食组旷场评分和物体识别指数升高,差异无统计学意义;Morris水迷宫实验中,MS正常饮食组和MS低亮氨酸饮食组雌、雄大鼠穿台次数较对照正常饮食组减少

关键词：母婴分离应激认知障碍氨基酸过度自噬神经元损伤

雷帕霉素靶蛋白调节自噬在理筋手法改善静力性损伤中的作用机制研究

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

环球中医药 2023年第5期16卷 859-866页

作者：孙文静马惠昇穆静袁兰英宋斐杨楠魏晓歌宁夏医科大学中医学院银川750000 宁夏区域高发病中西医结合防治研究重点实验室

目的通过观察理筋手法对兔颈后肌静力性损伤的干预,观察家兔一般状况、组织形态学、超微结构、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)及自噬相关蛋白Bcl-2-腺病毒E1B相互作用蛋白3(bcl-2-adenoirus E1B 19-Kda in... 详细信息

目的通过观察理筋手法对兔颈后肌静力性损伤的干预,观察家兔一般状况、组织形态学、超微结构、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)及自噬相关蛋白Bcl-2-腺病毒E1B相互作用蛋白3(bcl-2-adenoirus E1B 19-Kda interacting protein 3,BNIP3)、微管相关蛋白1轻链3(microtubule-associated protein 1-light chain 3,LC3)、核孔蛋白62(nucleoporin 62,P62)的变化,探索mTOR分子抑制骨骼肌过度自噬的相关机制。方法选择日本大耳兔40只,按随机数字表选取5只作为空白对照组,其余均采用颈椎前屈位45°固定,每日5小时,建立颈部慢性静力性损伤模型。60天后随机选取5只与空白组对照,通过一般行为学和组织形态学验证造模是否成功。剩余30只随机分为模型组和手法治疗组,每组各15只,模型组不予任何治疗,治疗组每日予以松筋、拨筋、顺筋三种手法治疗,力量控制为2 kg,频率100次/分钟,持续5分钟,分别在第10天、20天、30天各处死5只进行颈后肌取材。采用苏木素—伊红染色(HE染色)及透射电镜观察骨骼肌组织形态学和超微结构变化。采用蛋白免疫印迹法检测mTOR及自噬相关因子LC3、BNIP3、P62的蛋白表达变化,实时荧光定量法检测BNIP3、P62 mRNA水平的变化。结果家兔造模结束后出现精神萎靡不振,但触及颈部时反应敏捷易躲闪,颈部可触及条索状物。与空白组比较,模型组HE染色见肌纤维排列紊乱,扭曲变形,大量炎性物质浸润,10天、20天、30天时肌纤维扭曲程度逐渐减轻,排列较整齐,炎性细胞逐渐减少,且治疗组效果优于模型组。透射电镜下与空白组比较,模型组可见肌丝严重扭曲变形,肌节模糊,线粒体肿胀散乱分布。10天、20天、30天时肌丝扭曲程度逐渐减轻,肌节逐步完整,线粒体形态趋于正常,数量逐渐增多,且各治疗组效果优于模型组。蛋白免疫印迹法结果显示,与空白组比较,模型组P-mTOR、BNIP3和LC3Ⅱ/Ⅰ的蛋白表达量升高(P自噬被激活,理筋手法干预后自噬水平逐渐下降,可能与理筋手法作用于mTOR信号通路调节自噬有关,从而维持细胞内环境的稳态,促进肌肉组织的修复。

关键词：静力性损伤颈肌劳损理筋手法骨骼肌修复雷帕霉素靶蛋白过度自噬

去血清饥饿条件下肌卫星细胞增殖及自噬蛋白LC3、Beclin1的表达

维普期刊数据库

同方期刊数据库评论

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中国组织工程研究 2019年第11期23卷 1657-1661页

作者：刘通于佳妮刘悦陈欢邝伟川王小寅张淑静江烨邱晓佳文希广东省第二中医院针灸康复科广东省广州市510095 广东省中医院康复科广东省广州市510120 南京医科大学第一附属医院针灸科江苏省南京市210000 北京中医药大学中医学院北京市100029

背景:自噬可促进低氧环境下肌卫星细胞的存活,然而基于自噬有明显的时效性,不同时间的自噬水平与肌卫星细胞增殖能力间的关系如何未见探讨。目的:探讨不同时间去血清饥饿对大鼠肌卫星细胞增殖能力及自噬微管相关蛋白1轻链3(microtubule-... 详细信息

背景:自噬可促进低氧环境下肌卫星细胞的存活,然而基于自噬有明显的时效性,不同时间的自噬水平与肌卫星细胞增殖能力间的关系如何未见探讨。目的:探讨不同时间去血清饥饿对大鼠肌卫星细胞增殖能力及自噬微管相关蛋白1轻链3(microtubule-associated protein 1 light chain 3,LC3)及Beclin1表达的变化。方法:原代分离培养雄性SD大鼠(广州中医药大学动物实验中心提供,体质量约120 g)多裂肌卫星细胞,取第3代细胞,培养至对数生长期后,分别设置正常血清组(体积分数10%胎牛血清)、空白血清(仅含培养基,无胎牛血清)6 h组、空白血清12 h组、空白血清24 h组,CCK-8检测各组细胞的增殖情况,并采用Western-blot法和RT-PCR法检测LC3及Beclin1蛋白及基因的表达。结果与结论:(1)细胞增殖能力:空白血清诱导12 h后细胞增殖能力较正常血清组及诱导6 h时下降(P 自噬,自噬在去血清早期(12 h内)可保护细胞的增殖能力,12 h后细胞可出现过度自噬,不利于细胞的增殖。

关键词：去血清饥饿肌卫星细胞增殖自噬 LC3 Beclin1 大鼠去血清饥饿条件过度自噬肌卫星细胞自噬肌,骨骼组织工程

维普期刊数据库

同方期刊数据库评论

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

自噬在马兜铃酸引起肝肾损伤过程中的作用

自噬在马兜铃酸引起肝肾损伤过程中的作用

作者：陈佳靓上海中医药大学

学位级别：硕士

目的:通过建立马兜铃酸I（AAI）诱导大鼠肝肾损伤模型,评价AAI对肾脏和肝脏损伤状态;通过对自噬特异性指标Beclin 1、LC3检测,评价AAI引起肝肾损伤过程中的自噬因素;通过对自噬相关信号通路指标p62、p53、p38、p-p38、p65、p-p65等检测... 详细信息

目的:通过建立马兜铃酸I（AAI）诱导大鼠肝肾损伤模型,评价AAI对肾脏和肝脏损伤状态;通过对自噬特异性指标Beclin 1、LC3检测,评价AAI引起肝肾损伤过程中的自噬因素;通过对自噬相关信号通路指标p62、p53、p38、p-p38、p65、p-p65等检测,评价自噬在AAI引起肝肾损伤作用中的影响因素。在此基础上,综合评价基于自噬变化的AAI致大鼠肝肾损伤的特征和特点,为基于自噬的AAI所引起的肝肾毒性检测及保护提供理论和实验依据。方法:1建立AAI诱导的肝肾损伤模型。70只雄性Wistar大鼠随机分成6组:正常对照组、拮抗对照组（自噬抑制剂组）、AAI低剂量模型组、AAI高剂量模型组、AAI低剂量拮抗组、AAI高剂量拮抗组。AAI低、高剂量模型组分别对大鼠腹腔注射（i.p.）20mg/kg及40mg/kg AAI,AAI拮抗组在给予AAI前 1h,i.p.20mg/kg 3-甲基腺嘌呤（3-MA,自噬抑制剂）。连续给药9d。观察动物一般状态及死亡情况,每天记录大鼠体重;计算肾脏、肝脏脏器指数;检测血清尿素氮（BUN）、肌酐（CREA）、天冬氨酸氨基转移酶（AST）、丙氨酸氨基转移酶（ALT）;光镜和电镜下观察肾脏和肝脏组织病理学影响。2采用RT-PCR及免疫组化的方法,检测大鼠肾脏和肝脏与自噬相关因素Beclin 1、LC3及自噬相关影响因素p62、p53、p38、p-p38、p65、p-p65等指标基因和蛋白表达情况。3分析比较AAI致大鼠肝肾损伤中常规指标以及自噬的变化特点。结果:1 AAI诱导大鼠肝肾损伤结果1.1给予AAI,各组动物一般状态及体重、脏器指数、血清生化指标均表现出不同程度异常,呈现出明显的肝肾毒性状态。1.2电镜及光镜检查结果显示,AAI高、低剂量模型组大鼠肾脏表现出不同程度肾小管上皮细胞坏死,胞浆崩解脱落,胞质疏松,细胞肿胀,体积变大;肝脏表现出不同程度脂肪变性,线粒体肿胀。加入自噬拮抗剂后,低剂量组大鼠肾脏及肝脏损伤均有不同程度减轻;高剂量组大鼠肾脏损伤略有减轻,肝脏损伤明显加重。2基因及蛋白检测结果表明:与正常对照组相比,AAI高、低剂量模型组大鼠肝肾Beclin 1、LC3蛋白表达明显上调,差异具有极显著性（P＜0.01）;与拮抗对照组相比,AAI高、低剂量拮抗组大鼠肝肾Beclin 1、LC3蛋白表达明显上调,差异具有极显著性（P＜0.01）。与AAI高剂量模型组相比,AAI高剂量拮抗组大鼠肝肾Beclin 1、LC3蛋白表达均明显下调,差异具有极显著性（P＜0.01）。结果表明,AAI诱导的肝肾毒性过程中可能发生了自噬现象。与正常对照组相比,AAI高、低剂量模型组大鼠肝肾p62、p53、p38、p-p38、p65、p-p65蛋白表达均明显上调,差异具有极显著性（P＜0.01）;与拮抗对照组相比,AAI高、低剂量拮抗组大鼠肝肾p62、p53、p38、p-p38、p65、p-p65蛋白表达均明显上调,差异具有极显著性（P＜0.01）。与AAI高剂量模型组相比,AAI高剂量拮抗组大鼠肝肾p53、p38、p-p38、p65、p-p65蛋白表达均明显下调,差异具有极显著性（P＜0.01）,p62蛋白表达明显上调,差异具有极显著性（P＜0.01）。结果提示,p62、p53、p38等信号通路在AAI诱导的肝肾毒性自噬发生过程中发挥了调控作用。3 AAI致大鼠肝肾损伤中常规指标显示,高剂量下,肾脏血清生化指标BUN、CREA在3-MA的作用下明显降低,毒性降低;而肝脏血清生化指标ALT、AST在3-MA的作用下明显升高,毒性加重。综合自噬变化,结果提示,AAI高剂量引起的肾损伤过程中,可能发生了过度自噬;而在肝损伤过程中,可能发生了自噬。结论:1 AAI具有明确的肾毒性和一定的肝毒性;其诱导的肝肾损伤过程中可能发生了自噬现象。2 AAI引起肝肾损伤过程中的自噬变化受p53/mTOR、p38 MAPK/Erk1/2/NF-κB、p62介导的信号传导途径影响。3 AAI引起肝肾损伤过程中的自噬在不同脏器损伤过程中所具有的特征和特点有所不同。AAI引起的肾损伤过程中,可能发生了过度自噬,发挥了协同毒性作用;而在肝损伤过程中,可能发生了自噬,发挥了拮抗毒性作用。不同剂量AAI引起的肝肾损伤过程中具有自噬与过度自噬的差异。4 AAI引起肝肾损伤过程中的自噬现象具有各自的特征和特点,为基于自噬的AAI所引起的肝肾毒性检测及保护提供理论和实验依据。

关键词：马兜铃酸Ⅰ 肾毒性肝毒性自噬过度自噬机制