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Acta Biochimica et Biophysica Sinica 1998年第5期30卷 98-102页

作者：吴田平郑乐阮康成中国科学院上海生物化学研究所

运用荧光光谱方法研究了脱辅基的辣根过氧化物酶同工酶Ｃ［ａｐｏ－ｈｏｒｓｅｒａｄｉｓｈｐｅｒｏｘｉｄａｓｅＣ，ａｐｏ－ＨＲＰ（Ｃ）］。结果表明：（１）ａｐｏ－ＨＲＰ（Ｃ）与其他“Ｂ”类蛋白质不同，有明显的Ｔｙｒ荧光；（... 详细信息

运用荧光光谱方法研究了脱辅基的辣根过氧化物酶同工酶Ｃ［ａｐｏ－ｈｏｒｓｅｒａｄｉｓｈｐｅｒｏｘｉｄａｓｅＣ，ａｐｏ－ＨＲＰ（Ｃ）］。结果表明：（１）ａｐｏ－ＨＲＰ（Ｃ）与其他“Ｂ”类蛋白质不同，有明显的Ｔｙｒ荧光；（２）低浓度变性剂（＜２ｍｏｌ／Ｌ脲或０．２ｍｏｌ／Ｌ盐酸胍）能增强酶的Ｔｒｐ荧光，但并不改变光谱特性；（３）进一步增加变性剂浓度则使Ｔｒｐ残基暴露于水溶液中，荧光强度略有降低，荧光谱红移；（４）Ｃａ２＋络合剂ＥＤＴＡ对色氨酸荧光的影响与低浓度变性剂相同。有意思的是，ＥＤＴＡ与低浓度变性剂二者中任一个对ａｐｏ－ＨＲＰ（Ｃ）荧光发生影响后，另一个就不再起作用，由此推测ＥＤＴＡ与低浓度的变性剂可能是通过同一途径即脱钙来影响Ｔｒｐ荧光；利用荧光探针（８－ａｎｉｌｉｎｏ－１－ｎａｐｈｔａｌｅｎｅｓｕｌｆｏｎａｔｅ，ＡＮＳ）的研究结果得知，ＡＮＳ与酶结合的解离常数在无钙离子时为１５．４μｍｏｌ／Ｌ，而有钙离子时为７．３μｍｏｌ／Ｌ，表明Ｃａ２＋能增强ＡＮＳ与酶的活性中心的结合，提示钙离子在酶活性中所起的作用是通过影响血红素结合区域的构象来实现的。

关键词：辣根过氧化物酶同工酶c 钙离子荧光光谱

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钙离子对HRPc结构和电催化活性影响的研究

引用

无机化学学报 2008年第7期24卷 1089-1093页

作者：周楠迪朱彤阳黄吟曦刘山莉上海大学生命科学学院生物传感技术实验室上海200444 南京大学生物化学系医药生物技术国家重点实验室南京210093

通过比较辣根过氧化物酶同工酶c(HRPc)中ca2+移除前后的HRPc的光谱和电化学特性,阐明了ca2+的存在对HRPc的重要作用。移除ca2+后HRPc的紫外-可见吸收光谱发生了变化,Soret带的最大特征吸收峰以及α带和β带特征吸收峰均发生不同程度的... 详细信息

通过比较辣根过氧化物酶同工酶c(HRPc)中ca2+移除前后的HRPc的光谱和电化学特性,阐明了ca2+的存在对HRPc的重要作用。移除ca2+后HRPc的紫外-可见吸收光谱发生了变化,Soret带的最大特征吸收峰以及α带和β带特征吸收峰均发生不同程度的蓝移和峰强减弱,表明其血红素微环境及结构发生了变化。移除ca2+后的HRPc也可在与聚L型赖氨酸共修饰的石墨电极上表现出对H2O2的催化响应,但是天然HRPc比去除ca2+后的HRPc对H2O2表现出更低的检测限,更宽的检测范围,更高的灵敏度以及更好的稳定性。实验结果表明,ca2+对HRPc血红素微环境的保持、催化活性和稳定性均有重要的作用。

关键词：生物电化学辣根过氧化物酶同工酶c 钙离子

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