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人PBMCs内表达CCR5Delta32蛋白对HIV-1辅受体抑制作用的研究

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中国免疫学杂志 2010年第4期26卷 345-347页

作者：李翠莹安群星甘新宇成都军区总医院输血科成都610083 第四军医大学西京医院输血科西安710032

目的:在人PBMCs内表达CCR5Delta32蛋白,研究其对细胞表面HIV-1辅受体CCR5和CXCR4的抑制作用。方法:构建pLenti-CCR5Delta32慢病毒载体,包装后产生重组慢病毒。将其转染PBMCs,Western blot检测目的蛋白的表达。继续培养靶细胞,FACS分析... 详细信息

目的:在人PBMCs内表达CCR5Delta32蛋白,研究其对细胞表面HIV-1辅受体CCR5和CXCR4的抑制作用。方法:构建pLenti-CCR5Delta32慢病毒载体,包装后产生重组慢病毒。将其转染PBMCs,Western blot检测目的蛋白的表达。继续培养靶细胞,FACS分析细胞表面CCR5和CXCR4分子的变化。结果:成功构建了pLenti-CCR5Delta32慢病毒载体,包装后产生重组慢病毒。将其转染PBMCs,Western blot检测到目的蛋白的表达。FACS分析表明,靶细胞内目的蛋白的表达对靶细胞表面辅受体CCR5和CXCR4的产生起抑制作用,抑制率在转染后第6天达到高峰(CCR5的抑制率为51.69%,CXCR4的抑制率为61.05%)。结论:靶细胞内目的蛋白的成功表达及其对靶细胞表面HIV-1辅受体CCR5和CXCR4产生的抑制作用,为后续的AIDS基因治疗研究奠定了基础。

关键词： CCR5Delta32蛋白外周血单个核细胞人类免疫缺陷病毒辅受体

HIV-1辅受体的配体细胞内双表达对病毒感染的阻断作用

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中华传染病杂志 2004年第2期22卷 106-109页

作者：白雪帆张颖李光玉王平忠孙永涛黄长形第四军医大学唐都医院全军感染病诊疗中心西安710038

目的　观察Ⅰ型人免疫缺陷病毒 (HIV 1)辅受体的配体———RANTES和SDF 1α双表达于人淋巴细胞对各种嗜性HIV 1毒株感染的阻断作用。方法　用 pLNCX R K S K重组逆转录病毒液感染原代人外周血淋巴细胞 (PBLs) ,抗神经生长因子受体 (NGFR... 详细信息

目的　观察Ⅰ型人免疫缺陷病毒 (HIV 1)辅受体的配体———RANTES和SDF 1α双表达于人淋巴细胞对各种嗜性HIV 1毒株感染的阻断作用。方法　用 pLNCX R K S K重组逆转录病毒液感染原代人外周血淋巴细胞 (PBLs) ,抗神经生长因子受体 (NGFR) 免疫磁珠法分离转化成功的PBLs,流式细胞仪检测筛选效率 ;HIV 1M嗜性、T嗜性和双嗜性毒株攻击转化PBLs ,检测HIV 1逆转录酶活性和 p2 4抗原分泌 ,以观察抗HIV 1感染的作用 ;同时进行转化PBLs表面CD3、CD4、CCR2、CCR5和CXCR4表达及破伤风毒素刺激后3 H 胸苷 (thymidine)掺入量检测 ,观察HIV 1辅受体配体的双表达对人PBLs正常生物学功能的影响。结果　抗 NGFR 免疫磁珠法获得了转化成功的PBLs,流式细胞仪检测发现pLNCX R K S K转染组 92 %以上的PBLs鼠抗NGFR标记物为阳性 ;HIV 1M嗜性、T嗜性和双嗜性毒株攻击后 ,pLNCX R K S K转化PBLs可以见到明显的逆转录酶活性和 p2 4抗原分泌抑制 ,并且在感染后第 12～ 2 0天时抑制作用最强 ;pLNCX R K S K转化PBLs表面CD3、CD4和CCR2表达水平无明显变化 ,而CCR5和CXCR4表达水平降低 ;破伤风毒素刺激后的转化PBLs仍具有主动增殖的能力。结论　HIV 1辅受体的配体通过在人PBLs内双表达 ,使HIV 1两类主要辅受体表型剔除。

关键词： HIV-1 辅受体配体细胞内双表达病毒感染阻断作用基因疗法

HIV-1辅受体的配体在HeLa细胞的表达及其对合胞体形成的抑制

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中华传染病杂志 2003年第6期21卷 396-399页

作者：张颖白雪帆孙永涛黄长形李光玉王九平潘蕾第四军医大学唐都医院全军感染病诊疗中心西安710038

目的　观察HIV 1辅受体的配体、趋化因子RANTES和SDF 1的双顺反子表达载体pCMV R K S K在HeLa细胞系表达 ,并对其抗HIV 1感染作用进行初步观察。方法　应用PCR扩增RANTES KDEL基因 ,鉴定后与真核表达质粒 pCMV S/K连接 ,构建RANTES和SD... 详细信息

目的　观察HIV 1辅受体的配体、趋化因子RANTES和SDF 1的双顺反子表达载体pCMV R K S K在HeLa细胞系表达 ,并对其抗HIV 1感染作用进行初步观察。方法　应用PCR扩增RANTES KDEL基因 ,鉴定后与真核表达质粒 pCMV S/K连接 ,构建RANTES和SDF 1双顺反子表达载体 pCMV R K S K ,酶切鉴定并测序。脂质体介导转染HeLa细胞 ,间接免疫荧光及放射免疫沉淀法检测RANTES和SDF 1表达。合胞体形成实验初步检测其抗HIV 1感染的作用。结果　酶切鉴定和测序证明成功构建了 pCMV R K S K双顺反子表达载体 ,间接免疫荧光及放射免疫沉淀法证实RANTES和SDF 1可以表达于HeLa细胞。pCMV R K S K转染能够抑制M和T嗜性HIV 1膜蛋白诱导的合胞体形成。结论　双顺反子表达载体 pCMV R K S K转染的HeLa细胞可以表达HIV 1辅受体的配体RANTES和SDF 1,并能抵抗HIV 1感染。

关键词： HIV-1 配体 HeLa细胞合胞体趋化因子基因表达辅受体艾滋病

HIV-1辅受体配体的逆转录病毒载体的构建和表达

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第四军医大学学报 2005年第2期26卷 174-177页

作者：张颖王九平李谨革王平忠陈卫红白雪帆第四军医大学唐都医院全军感染病诊疗中心陕西西安710038

目的:构建HIV 1辅受体的配体-趋化因子RAN TES和SDF 1的逆转录病毒载体,并观察在NIH3T3细胞的表达.方法:从重组质粒pCMV R K S K中获取RANTES KDEL SDF KDEL基因片段,构建RANTES和SDF 1的逆转录病毒载体pLNCX R K S K,酶切鉴定并测... 详细信息

目的:构建HIV 1辅受体的配体-趋化因子RAN TES和SDF 1的逆转录病毒载体,并观察在NIH3T3细胞的表达.方法:从重组质粒pCMV R K S K中获取RANTES KDEL SDF KDEL基因片段,构建RANTES和SDF 1的逆转录病毒载体pLNCX R K S K,酶切鉴定并测序.采用标准的磷酸钙共沉淀法转染包装细胞Bing,G418筛选克隆细胞,制备重组病毒液,继之感染NIH3T3细胞,计算病毒滴度.间接免疫荧光检测NIH3T3细胞中RANTES、SDF 1的表达.结果:pLNCX R K S K逆转录病毒载体酶切和测序结果与预期一致,筛选出抗性克隆,制备了高滴度的重组病毒液,间接免疫荧光证实 RANTES和SDF 1可表达于转染细胞.结论:HIV 1辅受体的配体、趋化因子RANTES和SDF 1的逆转录病毒载体构建成功,重组病毒可以感染NIH3T3细胞,为下一步HIV 1感染实验打下了基础.

关键词： HIV-1 辅受体趋化因子逆转录病毒载体感染

HIV-1辅受体配体的融合表达载体的构建及表达

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中国病毒学 2003年第1期18卷 23-26,T001页

作者：张颖白雪帆黄长形孙永涛潘蕾李光玉王临旭第四军医大学唐都医院全军感染病诊疗中心陕西西安710038

应用PCR扩增RANTES-KDEL基因,鉴定后与真核表达载体pCMV—S/K连接,构建成HIV-1辅受体的配体、趋化因子RANTES和SDF-1的融合表达载体pCMV-R—K-S—K,酶切鉴定和测序证明成功构建了pCMV—R—K—S—K融合表达载体。脂质体介导pCMV—R—K-S... 详细信息

应用PCR扩增RANTES-KDEL基因,鉴定后与真核表达载体pCMV—S/K连接,构建成HIV-1辅受体的配体、趋化因子RANTES和SDF-1的融合表达载体pCMV-R—K-S—K,酶切鉴定和测序证明成功构建了pCMV—R—K—S—K融合表达载体。脂质体介导pCMV—R—K-S—K转染HeLa细胞,间接免疫荧光证实RANTES和SDF-1可高效表达于HeLa细胞。结果表明构建的pCMV—R—K—S—K融合表达载体能在HeLa细胞中高效表达,可用于下一步的HIV-1感染实验。

关键词： HIV-1 辅受体趋化因子融合表达载体基因转染

HIV-1辅受体及针对辅受体的艾滋病治疗策略

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中国病毒学 2004年第2期19卷 182-186页

作者：张颖白雪帆黄长形白宪光第四军医大学唐都医院全军感染病诊疗中心陕西西安710038

艾滋病(AIDS)是由人类免疫缺陷病毒(Human immunodeficiency virus，HIV)引起的严重危害人类健康的世界性传染病，目前尚无有效的预防和治疗措．施。虽然近年高效抗逆转录病毒疗法(HAART)明显提高了AIDS的临床疗效，但由于HIV的高度变... 详细信息

艾滋病(AIDS)是由人类免疫缺陷病毒(Human immunodeficiency virus，HIV)引起的严重危害人类健康的世界性传染病，目前尚无有效的预防和治疗措．施。虽然近年高效抗逆转录病毒疗法(HAART)明显提高了AIDS的临床疗效，但由于HIV的高度变异性、化疗药物的毒副作用及价格昂贵等因素，多种新的抗HIV药物的开发研究仍有增无减~[1]。H1V-l辅受体的发现不仅有助于理解HIV-1感染靶细胞的发病机理，而且为抗HIV治疗提供了新的作用靶点。HIV-1辅受体及其抑制剂已成为目前抗HIV-l治疗研究的热点，现将有关的研究进展作一综述。

关键词：人类免疫缺陷病毒辅受体艾滋病治疗 AIDS HIV CD4

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辅受体在艾滋病毒感染的作用

西南国防医药 2000年第4期10卷 253-254页

作者：向左云双印成都军区联勤部军事医学研究所昆明650032

早在80年代,科学家已经认识HIV(buman im-munodeficiency virus)的感染与其外膜蛋白gp120与细胞表面的CD_4分子的相互作用密切相关,CD_4分子被认为是HIV的受体,但科学家在1986年就发现单CD_4分子并不足以使HIV进入细胞体内。1996年,哥... 详细信息

早在80年代,科学家已经认识HIV(buman im-munodeficiency virus)的感染与其外膜蛋白gp120与细胞表面的CD_4分子的相互作用密切相关,CD_4分子被认为是HIV的受体,但科学家在1986年就发现单CD_4分子并不足以使HIV进入细胞体内。1996年,哥伦比亚大学Maddon用基因工程手段得到表达人CD_4分子的小鼠细胞系,发现其不被HIV感染,说明在艾滋病毒感染的过程中存在其它的因素。

关键词：艾滋病毒辅受体趋化因子

细胞内表达CCR5Delta32蛋白对HIV-1感染抑制作用的研究

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生物化学与生物物理进展 2009年第9期36卷 1141-1145页

作者：安群星雷迎峰杨静张献清易静陈蕤穆士杰第四军医大学西京医院输血科西安710032 第四军医大学微生物学教研室西安710033

人CCR5Delta32突变个体能有效抵制HIV-1感染,主要是由于该个体淋巴细胞内表达的CCR5Delta32突变蛋白能通过反式显性失活效应(TDN)抑制细胞表面HIV-1辅受体CCR5和CXCR4的产生.通过构建CCR5Delta32慢病毒载体,体外转染人外周血单个核细胞(... 详细信息

人CCR5Delta32突变个体能有效抵制HIV-1感染,主要是由于该个体淋巴细胞内表达的CCR5Delta32突变蛋白能通过反式显性失活效应(TDN)抑制细胞表面HIV-1辅受体CCR5和CXCR4的产生.通过构建CCR5Delta32慢病毒载体,体外转染人外周血单个核细胞(PBMCs),研究细胞内表达CCR5Delta32蛋白对HIV-1感染的抑制作用.结果表明,表达CCR5Delta32蛋白的人PBMCs对HIV-1R5、X4及R5X4毒株感染均具有显著的抑制作用.这些工作为后续的AIDS基因治疗研究奠定了基础.

关键词： CCR5Delta32 外周血单个核细胞人类免疫缺陷病毒辅受体

趋化因子RANTES和SDF-1细胞内共表达抑制HIV-1感染的研究

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中华微生物学和免疫学杂志 2004年第1期24卷 64-66页

作者：白雪帆张颖王平忠孙永涛黄长形聂青和第四军医大学唐都医院全军感染病诊疗中心西安710038

目的　观察HIV 1辅受体CCR5和CXCR4的配体在细胞内共表达抑制HIV 1感染的作用。方法　应用磷酸钙沉淀法共转染HIV 1辅受体及其配体的质粒 ,制成辅受体表型剔除的靶细胞 ,与转染HIV 1膜蛋白质粒的细胞混合 ,观察合胞体形成并记数 ;脂质... 详细信息

目的　观察HIV 1辅受体CCR5和CXCR4的配体在细胞内共表达抑制HIV 1感染的作用。方法　应用磷酸钙沉淀法共转染HIV 1辅受体及其配体的质粒 ,制成辅受体表型剔除的靶细胞 ,与转染HIV 1膜蛋白质粒的细胞混合 ,观察合胞体形成并记数 ;脂质体介导法将含有报告基因CAT而缺失HIV包膜蛋白的质粒与HIV包膜蛋白质粒共转染 2 93细胞 ,包装成具有一次感染活性的假病毒 ,感染转化pCMV R K S K、pCMV R K、pCMV S K或pCMV的PM 1细胞 ,采用同位素薄层层析分析法检测CAT活性。结果　pCMV R K S K转染可以显著抑制M及T嗜性HIV膜蛋白诱导的合胞体形成 ;CAT检测发现与pCMV转染组相比 ,当两种嗜性重组病毒感染pCMV R K S K转染组PM 1细胞时 ,仅检测到背景水平的CAT活性。结论　HIV 1辅受体CCR5 CXCR4表型剔除可以明显抑制M和T嗜性HIV

关键词： HIV-1 辅受体趋化因子融合表达载体合胞体报告基因磷酸钙沉淀法基因治疗