检索结果-南通市图书馆

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

基于工程化毕赤酵母一锅法合成硫酸软骨素A

生物工程学报 2022年第7期38卷 2594-2605页

作者：盛靖雨金学荣胥睿睿王阳康振江南大学生物工程学院糖化学与生物技术教育部重点实验室江苏无锡214122 江南大学未来食品中心江苏无锡214122 江南大学生物工程学院工业生物技术教育部重点实验室江苏无锡214122

硫酸软骨素(chondroitin sulfate,CS)是一种线性多糖,广泛应用于医疗和保健等领域。相比于传统动物组织提取法,微生物合成硫酸软骨素具有可控、易规模化放大等优势。为实现硫酸软骨素A(CSA)的高效合成,本研究首先通过整合软骨素合酶编... 详细信息

硫酸软骨素(chondroitin sulfate,CS)是一种线性多糖,广泛应用于医疗和保健等领域。相比于传统动物组织提取法,微生物合成硫酸软骨素具有可控、易规模化放大等优势。为实现硫酸软骨素A(CSA)的高效合成,本研究首先通过整合软骨素合酶编码基因kfoC、kfoA以及UDP-葡萄糖脱氢酶编码基因tuaD至毕赤酵母GS115基因组中,构建了以甘油为唯一碳源发酵生产软骨素的毕赤酵母工程菌株。通过进一步优化软骨素合成途径,软骨素分批补料发酵水平达到2.6 g/L。在进一步整合表达软骨素-4-O-磺基转移酶的基础上,本研究通过向生产软骨素毕赤酵母工程菌株破碎液中添加3′-磷酸腺苷-5′-磷酰硫酸和软骨素-4-O-磺基转移酶,成功建立了CSA的一锅法生物合成体系。通过优化,最终实现0-40%不同磺酸化水平CSA的可控合成。本研究中CSA的一锅法生物合成体系操作简便、易放大,更适用于工业化大规模生产。本研究结果也为肝素等其他糖胺聚糖的合成提供了思路。

关键词：软骨素硫酸软骨素A 一锅法 3′-磷酸腺苷-5′-磷酰硫酸毕赤酵母生物合成体系

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

化学酶法对硫酸软骨素类多糖的定量分析

合肥工业大学学报（自然科学版） 2023年第7期46卷 991-996页

作者：陈婷婷李文静杨桂霞周贤轩石春红合肥工业大学食品与生物工程学院安徽合肥230601

硫酸软骨素(chondroitin sulfate,CS)类多糖是一类具有多种临床治疗作用的糖胺聚糖。在硫酸软骨素裂解酶作用下,软骨素中葡糖醛酸和N-乙酰半乳糖胺之间的糖苷键发生断裂,可生成不饱和二糖。微生物发酵生产软骨素过程中,多糖定量往往需... 详细信息

硫酸软骨素(chondroitin sulfate,CS)类多糖是一类具有多种临床治疗作用的糖胺聚糖。在硫酸软骨素裂解酶作用下,软骨素中葡糖醛酸和N-乙酰半乳糖胺之间的糖苷键发生断裂,可生成不饱和二糖。微生物发酵生产软骨素过程中,多糖定量往往需经过多次纯化以及使用昂贵的仪器进行检测,过程繁琐。文章研究偶联了专一性的酶解法与蒽酮-硫酸法,快速测定复杂培养液中的软骨素类多糖质量浓度。该方法通过超滤去除单糖等小分子杂质后,将多糖用专一性硫酸软骨素裂解酶分解为寡糖,再通过超滤去除大分子杂质,得到的寡糖过滤液使用蒽酮-硫酸法快速测定多糖质量浓度。该多糖定量方法可以选择不同特异性的裂解酶,适用于复杂培养液中其他多糖的快速定量分析。

关键词：硫酸软骨素(CS) 软骨素定量酶解蒽酮-硫酸法超滤

基于工程化毕赤酵母“一锅法”合成硫酸软骨素A

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

基于工程化毕赤酵母“一锅法”合成硫酸软骨素A

作者：盛靖雨江南大学

学位级别：硕士

硫酸软骨素(Chondroitin sulfate,CS)是一种重要的糖胺聚糖(Glycosaminoglycans,GAGs)。由葡萄糖醛酸(Glc A)和N-乙酰氨基半乳糖(Gal NAc)组成的二糖序列通过β-1,3和β-1,4糖苷键交替组成,并在不同位置与不同磺基转移酶发生磺酸化反应... 详细信息

硫酸软骨素(Chondroitin sulfate,CS)是一种重要的糖胺聚糖(Glycosaminoglycans,GAGs)。由葡萄糖醛酸(Glc A)和N-乙酰氨基半乳糖(Gal NAc)组成的二糖序列通过β-1,3和β-1,4糖苷键交替组成,并在不同位置与不同磺基转移酶发生磺酸化反应。由于硫酸软骨素具有修复软骨组织、抗氧化、抗炎等生理功能,因此被广泛应用在医疗、保健等领域,同时硫酸软骨素的合成方式与转化效率也逐渐成为市场关注的焦点。传统硫酸软骨素的获取主要依靠从动物组织中提取,这种方式不仅破坏生态平衡,而且存在免疫安全风险。针对目前存在的问题,本研究成功建立了一种“一锅法”生物合成硫酸软骨素A(Chondroitin sulfate A,CSA)的磺酸化修饰体系,该方法可以实现可控、高效合成CSA,而且更适合工业化大规模生产。主要研究结果如下:(1)在毕赤酵母(Pichia pastoris)GS115中构建软骨素合成途径,实现软骨素的合成。以质粒p GAPZB为载体,模拟构建“多顺反子”表达框将软骨素合酶编码基因kfo C、kfo A以及UDP-葡萄糖脱氢酶编码基因tua D串联整合至毕赤酵母基因组。最终,实现在以甘油为唯一碳源的毕赤酵母中合成105 mg·L-1软骨素。(2)通过对软骨素合成途径的优化,提高软骨素产量。首先分别过表达毕赤酵母和酿酒酵母来源的glm S、gpa T、pag M和gal U基因,发现增加代谢中间产物UDP-glucose、Glc N-6-P、Glc NAc-6-P和Glc NAc-1-P的合成通量可以提高软骨素的产量;获得了重组菌株Pp00-pgal U,将软骨素产量提高至170mg·L-1;随后通过对软骨素合成途径基因的组合过表达将软骨素产量进一步提升至495 mg·L-1;最后,在3 L发酵罐验证最优菌株Pp00-DSM规模化生产的能力,使用BSM培养基发酵144 h获得了最高软骨素产量为2.6 g·L-1。(3)3′-磷酸腺苷-5′-磷酰硫酸(3′-phosphoadenosine-5′-phosphosulfate,PAPS)合成及C4ST储存条件的优化。为构建体外磺酸化修饰体系,首先对表达PAPS合成双功能酶基因的大肠杆菌(Escherichia coli)BL21(DE3)工程菌株的培养条件与诱导条件进行了优化,发现在培养温度为30℃、诱导剂浓度为0.5 m M、培养时间为15 h、诱导OD600为1.0的条件下,PAPS的产率最高,是对照组的5倍。随后为增加软骨素-4-O-磺基转移酶(Chondroitin-4-O-sulfotransferase,C4ST)的储存时间,缩减CSA的生产时间成本,在几种冻干保护剂中筛选发现,添加10%BSA的C4ST粗酶液置于冰箱保存20天后残余酶活仍可达80%。(4)“一锅法”合成硫酸软骨素A体系的建立与优化。将产软骨素毕赤酵母工程菌株发酵后收集菌体,再向破碎细胞所得上清中添加提前制备的PAPS和C4ST粗酶液,一起置于30℃条件下反应12 h后,经LC-MS检测有CSA产生,转化率为5%。为提高CSA的转化率,先后优化了反应时间和反应温度,发现在37℃条件下反应48 h后CSA的转化率提升至15%。除反应时间及温度的优化外,本研究尝试改变“一锅法”体系中C4ST与PAPS的添加量,以进一步提高CSA的转化率,最终实现了0-40%不同磺酸化水平CSA的可控合成。

关键词：软骨素硫酸软骨素A 一锅法 PAPS 毕赤酵母

同方学位论文库评论

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

代谢工程改造大肠杆菌生产软骨素

代谢工程改造大肠杆菌生产软骨素

作者：赵春雷江南大学

学位级别：硕士

软骨素是一种重要的糖胺聚糖,被广泛应用于医药、饲料和食品等领域。微生物发酵法合成软骨素作为一种新兴的软骨素合成策略,具有绿色环保、经济高效等特点。目前,微生物法合成软骨素存在产量低下的问题,仅通过过表达路径酶及密码子优化... 详细信息

软骨素是一种重要的糖胺聚糖,被广泛应用于医药、饲料和食品等领域。微生物发酵法合成软骨素作为一种新兴的软骨素合成策略,具有绿色环保、经济高效等特点。目前,微生物法合成软骨素存在产量低下的问题,仅通过过表达路径酶及密码子优化异源基因表达的方法不足以提高代谢路径的碳通量和碳通量,进而高效提升软骨素产量。由于缺乏高效的代谢工程改造方法调控软骨素所需的碳供应和氮供应,因此需要设计精细化调控软骨素合成所需碳供应和氮供应的模式化策略,用于提高微生物发酵法合成软骨素的产量。本研究以大肠杆菌(Escherichia coli)BL21 STAR(DE3)为宿主,通过引入E.coli K4来源的软骨素合成路径,优化碳代谢路径与氮代谢路径,显著提高了软骨素的产量,为软骨素的生产提供了新的策略。主要研究结果如下:(1)设计与构建软骨素合成路径。首先,由于野生型E.coli BL21 STAR(DE3)不能天然合成软骨素,通过引入E.coli K4来源的UDP-葡萄糖脱氢酶(Kfo F)、UDP-氨基葡萄糖异构酶(Kfo A)和软骨素聚合酶(Kfo C),构建了软骨素合成路径,使得重组菌株E.coli CL01能够合成80.1 mg·L软骨素。其次,通过质谱法,分析鉴定了软骨素,进而证明了软骨素路径的有效性。最后,通过分析软骨素合成路径中的关键代谢中间产物,确定了影响软骨素合成的关键瓶颈是碳氮路径供应不平衡。(2)优化软骨素合成的氮供应路径。首先,通过分析氮供应路径,表明谷氨酰胺是促进软骨素合成的关键前体。其次,通过过表达谷氨酰胺合成路径关键酶—谷氨酸脱氢酶(Gdh A)和谷氨酰胺合成酶(Gln A),强化了氮供应路径,证明了谷氨酰胺的供应不足是限制软骨素合成的关键因素之一。再次,通过引入氨基葡萄糖合成酶(GlmS)突变体(GlmS),减缓了产物的反馈抑制,提高了谷氨酰胺的利用效率。最后,通过共表达基因gdh A、gln A和glm S,强化了氮供应路径的效率,使得重组菌株E.coli CL09的软骨素产量达到了184.1 mg·L,与对照菌株E.coli CL08相比,提高了39.4%。(3)优化软骨素合成的碳供应路径。首先,通过过表达软骨素前体UDP-Glc A合成路径关键酶—葡萄糖-6-磷酸异构酶(Pgi)、葡萄糖磷酸变位酶(Pgm)、葡萄糖-1-磷酸尿苷酸转移酶(Gal U)和UDP-葡萄糖脱氢酶(Kfo F),强化了碳供应路径,其中kfo F为UDP-Glc A合成路径的关键基因。其次,通过过表达软骨素前体UDP-GalNAc合成路径关键酶—GlmS、磷酸葡萄糖胺变位酶(GlmM)、UDP-N-乙酰氨基葡萄糖焦磷酸化酶(Glm U)和UDP-氨基葡萄糖异构酶(Kfo A),强化了碳供应路径,其中glm S和glm M为UDP-Gal NAc合成路径的关键基因。最后,通过RBS工程,组合优化了关键基因kfo F、glm S和glm M,进一步强化了碳供应路径,重组菌株E.coli CL39的软骨素产量达到了182.1 mg·L,比对照菌株E.coli CL15提高了49.1%。(4)平衡软骨素合成的碳供应和氮供应路径。借助具有不同拷贝数的表达载体,通过组合优化碳供应路径(glm S、glm M和kfo F基因)与氮供应路径(gdh A和gln A基因),改善软骨素合成所需要的碳供应和氮供应,重组菌株E.coli CL46的软骨素产量达到了212.5 mg·L。最终,在5 L发酵罐中,重组菌株E.coli CL46的软骨素产量为3.5g·L,比重组菌株E.coli CL01提高了354.5%。

关键词：软骨素代谢工程大肠杆菌 RBS调控

同方学位论文库评论

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

氨糖软骨素钙姜黄复合物对骨密度的协同作用

食品工业 2023年第2期44卷 131-134页

作者：何晶邱春媚黄远英殷光玲张旭光汤臣倍健股份有限公司广州510663

研究采用动物试验,评估一种氨糖软骨素钙姜黄复合物对骨密度的影响及其安全性。复合物给予剂量为0.345,0.690和2.070 g/(kg·bw)。通过试验考察动物生长发育情况,2.070 g/(kg·bw)剂量组大鼠股骨中心和远心端骨密度,骨钙含量显著高于溶... 详细信息

研究采用动物试验,评估一种氨糖软骨素钙姜黄复合物对骨密度的影响及其安全性。复合物给予剂量为0.345,0.690和2.070 g/(kg·bw)。通过试验考察动物生长发育情况,2.070 g/(kg·bw)剂量组大鼠股骨中心和远心端骨密度,骨钙含量显著高于溶剂对照组(P软骨素钙姜黄复合物对于大鼠有增加骨密度的作用。通过小鼠的急性毒性试验、Ames试验及小鼠精子畸形试验,评估氨糖软骨素钙姜黄复合物的安全性。试验结果表明,氨糖软骨素钙姜黄复合物对小鼠未见明显毒性,试验动物均未产生异常反应,试验为阴性结果。氨糖软骨素钙姜黄的组合对骨密度有积极影响,且具有较好的安全性。试验结果为氨糖、软骨素、钙及姜黄的组合使用及相关食品开发提供研究基础。

关键词：骨密度氨糖软骨素钙姜黄

顺序一锅多酶级联合成不均一和均一的软骨素多糖及其衍生物

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

顺序一锅多酶级联合成不均一和均一的软骨素多糖及其衍生物

作者：许璇山东大学

学位级别：硕士

糖胺聚糖（Glycosaminoglycans,GAGs）是由二糖重复单元组成的一类复杂线性多糖,糖链骨架中存在不同程度的硫酸化和异构化修饰,呈高负电性。二糖单元的组成及硫酸化修饰的差异造成糖链结构的多样性,也是GAGs功能多样化的结构本质。GAGs... 详细信息

糖胺聚糖（Glycosaminoglycans,GAGs）是由二糖重复单元组成的一类复杂线性多糖,糖链骨架中存在不同程度的硫酸化和异构化修饰,呈高负电性。二糖单元的组成及硫酸化修饰的差异造成糖链结构的多样性,也是GAGs功能多样化的结构本质。GAGs的重要生理功能及与重大疾病的密切关系受到国内外科学家们的关注。基于GAGs良好的组织相容性和生物安全性,已经被广泛应用到药物研发、临床医学和日用化妆品等领域。硫酸软骨素（Chondroitin sulfate,CS）是由[-4GlcAβ1-3GalNAcβ1-]二糖重复单元构成的一类糖胺聚糖。根据硫酸化位点和修饰程度的不同,CS可以分为多种类型。类型不同的CS携带着多样的生物信息,参与了不同的生命过程。CS生物合成前体-未硫酸化修饰的软骨素（Chondroitin,CH）是部分致病菌荚膜多糖的结构组分,致病菌表达与哺乳动物细胞表面相似的糖链结构,其可能的功能在于帮助病原菌逃避宿主细胞的免疫防御;动物实验表明CH能够选择性下调促炎级联因子的表达水平,在前列腺癌基质中呈现高表达,可以作为肿瘤发生发展的生物标志物。CS的生物活性与糖链长度和硫酸化修饰紧密相关,高分子量CS在临床上可以用于炎症反应的治疗,而低分子量CS则具有促进炎症反应的活性。由于良好的生物可降解性和组织相容性,CS及其衍生物还用于生物材料和药物递送系统等研究领域。动物组织提取是商品化CS生产的主要方法,受生物体内多糖合成内在因素的影响,该方法难以获取具有明确化学结构和糖链长度的CS糖链。结构明确CS糖链的高效获得成为制约其生物学功能全面阐述和新用途开发的关键科学问题之一。近年来,在均一CS糖链的制备领域已经发展了化学法、酶法、化学酶法、固相合成及微生物发酵等策略。这些策略均有各自的优势,但普遍存在步骤繁琐、纯化困难等挑战,因而高效制备CS糖链还存在一定的局限性。本论文应对CH糖链高效制备这一科学问题,开展体外合成方法学研究。将一锅多酶反应（One-Pot Multienzyme,OPME）体系优化并应用到CH糖链的体外合成研究中,结合了糖核苷酸denovo合成和糖基转移酶催化复杂糖链合成两个顺序反应步骤。能够以价格低廉的单糖为原料,通过酶促级联催化反应高效合成聚合度不均一的CH糖链,避免了价格昂贵糖核苷酸的大量使用,发展了经济、高效的聚合度不均一 CH糖链体外合成新策略。基于此,发展了聚合度均一 CH糖链的体外重塑合成技术:利用软骨素合酶以外源寡糖片段为受体进行同步化糖链延伸的反应特性,辅助使用糖链水解酶对不均一的CH糖链进行降解产生外源CH寡糖片段,建立均一 CH糖链的重塑合成技术,实现了聚合度均一 CH糖链的按需合成。论文第二章,为了寻求经济高效的CH糖链体外合成新策略,基于课题组在糖核苷酸酶法合成方面的工作基础,结合糖核苷酸de novo合成和CH糖链聚合反应两个顺序酶促反应过程,建立了顺序OPME体系,以级联进行的方式实现CH糖链的体外高效合成。该策略利用GalNAc和GlcA两种单糖为原料,首先通过多酶级联顺序合成相应的糖核苷酸,在两种糖核苷酸达到相似的转化率之后,通过 PmCS（Chondroitin synthase from Pasteurella multocida）的添加实现了 CH 糖链的高效合成（180 mg,45%）。该策略能够避免糖核苷酸的大量消耗,简化了产物纯化环节,具有经济高效的优点。进一步利用原核生物酶底物选择宽泛性优势,在OPME体系中通过代谢掺入的策略引入系列GalNAc的结构类似物,制备了不均一 CH 糖链衍生物:Azido-CH（167 mg,38%）和 TFA-CH（154 mg,34%）衍生物;碱性条件处理TFA-CH后进一步制备了NH2-CH衍生物（20mg,91%）。随后利用Azido-CH糖链中引入的N3基团,通过Azide-Alkyne生物正交反应,开展化学交联CH水凝胶的制备。由于炔基试剂Alkyne-PEG-Alkyne的使用,CH糖链内部和糖链之间发生了多重交联,进而改变了CH糖链的表面结构,使其由未交联的光滑片状结构发展成交联后的多孔疏松结构。结果表明制备的CH水凝胶具有更大的比表面积,在药物缓释、3D细胞培养和长效关节炎治疗药物等方面具有广阔的应用前景。论文第三章,发展了低成本、高效的聚合度均一 CH糖链的体外重塑合成策略。化学结构明确的糖类化合物的高效获得是开展糖生物学和糖构效关系研究的关键科学问题之一。在体外OPME反应体系中实现不均一 CH糖链高效制备的基础上,分析CH糖链聚合反应过程,进一步发展了聚合度均一 CH糖链的重塑合成技术。利用透明质酸酶（Hyaluronidase,HAase）也能够识别CH糖链并水解成四糖或六糖寡糖片段的催化反应特性,将不均一 CH糖链水解成CH tetrasaccharide[-4GlcAβ1-3GalNAcβ1-

关键词：软骨素一锅多酶级联催化聚合度糖核苷酸

比较关节腔内分别注射臭氧、透明质酸钠及硫酸软骨素治疗膝关节骨性关节炎患者的疗效及安全性

同方学位论文库评论

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

实用疼痛学杂志 2019年第4期15卷 282-288页

作者：钱黎陈黔潘奇王大寿段斌武贵州省骨科医院疼痛科贵阳市550002

目的比较膝关节腔内分别注射臭氧、透明质酸钠及硫酸软骨素对膝关节骨性关节炎患者的疗效及安全性。方法收集2016年1月至2017年12月就诊于贵州省骨科医院疼痛科的膝关节骨性关节炎患者149例,性别不限,年龄≥18岁,采用随机数字表法将其分... 详细信息

目的比较膝关节腔内分别注射臭氧、透明质酸钠及硫酸软骨素对膝关节骨性关节炎患者的疗效及安全性。方法收集2016年1月至2017年12月就诊于贵州省骨科医院疼痛科的膝关节骨性关节炎患者149例,性别不限,年龄≥18岁,采用随机数字表法将其分为3组,臭氧组(A组)、透明质酸钠组(B组)及硫酸软骨素组(C组),其中A组50例,B组49例,C组50例。A组关节腔内注射25μg/ml臭氧5ml,B组注射透明质酸钠20mg/2ml,C组注射硫酸软骨素40mg,以0.9%氯化钠注射液稀释至2ml,每周1次,5次为一个疗程。观察并记录患者注射时出现膝关节酸胀情况;注射前、注射时、注射后1min、注射后5min的心率、血压和脉搏血氧饱和度,及治疗前、治疗1次、治疗5次、治疗完成后1个月、3个月时患者的视觉模拟评分(VAS)和Lysholm功能评分。结果与注射前比较,A组心率在注射时升高[(94±10)比(78±9)次/min](P软骨素疗效较前两者效果稍差,但注射臭氧时患者会有明显酸胀不适感和短暂心率升高。

关键词：臭氧透明质酸软骨素注射,关节内骨关节炎,膝

海藻酸钠—硫酸软骨素共混膜的结构及性能研究

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

化学研究与应用 2007年第7期19卷 740-744页

作者：王碧覃松杨意阮尚全内江师范学院化学与生命科学系四川内江641112

利用溶液共混法成功制备了新型生物膜材料-硫酸软骨素共混膜,通过红外光谱、X-射线衍射、原子吸收光谱和扫描电镜对共混膜的结构进行了表征,并测定了不同配比共混膜的抗张强度、断裂伸长率,吸水率,同时考察了介质pH值和离子强度对共混... 详细信息

利用溶液共混法成功制备了新型生物膜材料-硫酸软骨素共混膜,通过红外光谱、X-射线衍射、原子吸收光谱和扫描电镜对共混膜的结构进行了表征,并测定了不同配比共混膜的抗张强度、断裂伸长率,吸水率,同时考察了介质pH值和离子强度对共混膜吸水率的影响。结果表明:共混膜中海藻酸钠、软骨素之间具有较强的相互作用和良好的相容性,共混膜具有良好的力学性能。作为一种潜在的生物材料可望在生物医学领域得到应用。

关键词：海藻酸软骨素共混相容性力学性能

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

氨糖+软骨素:1+1>2

江苏卫生保健（今日保健） 2016年第6期 28-29页

作者：陈祎生

骨关节炎又称退行性关节炎,增生性关节炎,是一种既相当常见又非常难治的疾患,多见于中老年人,好发于全身各关节,尤其是负重大活动多的膝、髋、脊柱、踝、趾等关节。它以关节软骨破坏为主要特点,可出现关节疼痛、胀痛、发僵、运动不灵活... 详细信息

骨关节炎又称退行性关节炎,增生性关节炎,是一种既相当常见又非常难治的疾患,多见于中老年人,好发于全身各关节,尤其是负重大活动多的膝、髋、脊柱、踝、趾等关节。它以关节软骨破坏为主要特点,可出现关节疼痛、胀痛、发僵、运动不灵活等症状。

关键词：软骨素增生性关节炎关节软骨病变关节退行性关节炎关节疼痛关节间隙软骨基质关节组织氨基葡萄糖

维普期刊数据库博看期刊