检索结果-南通市图书馆

多溴联苯醚在Caco-2单层细胞模型中的转运及机理

维普期刊数据库

同方期刊数据库评论

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

多溴联苯醚在Caco-2单层细胞模型中的转运及机理

作者：张凯琼上海大学

学位级别：硕士

多溴联苯醚(PBDEs)是一种典型的持久性有机污染物。由于其具有亲脂性,PBDEs易于在生物体内蓄积并通过食物链放大,并能够对生态系统和人体产生一定的负面效应。目前,在许多人体组织和器官中均能检测到PBDEs。经口摄入是PBDEs人体暴露最... 详细信息

多溴联苯醚(PBDEs)是一种典型的持久性有机污染物。由于其具有亲脂性,PBDEs易于在生物体内蓄积并通过食物链放大,并能够对生态系统和人体产生一定的负面效应。目前,在许多人体组织和器官中均能检测到PBDEs。经口摄入是PBDEs人体暴露最重要的途径。小肠是PBDEs吸收的主要场所,也是阻止外源性物质进入人体的重要屏障。本研究以Caco-2单层细胞模型为工具,对PBDEs的肠道吸收特性及转运机理进行研究。在10ng/m L暴露浓度下,BL-AP方向上穿透率随暴露时间(4-24 h)延长而增加,且呈现显著的线性关系。细胞残留率也随暴露时间延长而增大。PBDEs在细胞中的穿透率和细胞残留状况存在差异,随着logKOW值的增大,穿透率逐渐降低,且与logKOW之间存在显著的线性关系。细胞残留率随logKOW值增大先增后减,呈抛物线趋势。4 oC条件下,PBDEs在AP-BL和BL-AP两个方向上PBDEs的穿透率均显著降低,说明PBDEs双向转运过程中均存在能量依赖,可能有主动转移机制参与PBDEs的吸收及外排过程。本文选用维拉帕米、MK571和Ko143分别作为P-糖蛋白、多药耐药相关蛋白和乳腺癌耐药蛋白的抑制剂,研究三种外排蛋白在PBDEs转运过程的作用。结果表明,三种外排蛋白可能均参与了PBDEs的外排过程。最后,还研究了流入转运蛋白有机阳离子转运体(OCTs)是否参与了PBDEs的转运,结果显示,抑制剂西咪替丁能够显著降低PBDEs在AP-BL方向上的穿透率,说明OCTs可能参与了PBDEs的摄取过程。

关键词： Caco-2单层细胞模型多溴联苯醚外排蛋白转运机理

麦胚凝集素修饰纳米粒跨粘膜细胞转运机理及入脑通路的初步探讨

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

麦胚凝集素修饰纳米粒跨粘膜细胞转运机理及入脑通路的初步探讨

作者：武炳贤复旦大学

学位级别：硕士

随着社会的发展及老龄化程度的增加,许多脑内疾病已成为威胁人类健康的一大问题。许多蛋白多肽类药物具有良好的中枢治疗活性,但由于药物在体内稳定性差以及血脑屏障(BBB)的存在,很大程度上限制了这些药物的脑部递送,因而很难发挥其中... 详细信息

随着社会的发展及老龄化程度的增加,许多脑内疾病已成为威胁人类健康的一大问题。许多蛋白多肽类药物具有良好的中枢治疗活性,但由于药物在体内稳定性差以及血脑屏障(BBB)的存在,很大程度上限制了这些药物的脑部递送,因而很难发挥其中枢治疗作用。BBB是存在于血液和脑组织间的一层屏障系统由极化的脑毛细血管内皮细胞通过复杂的细胞间紧密连接构成,它对于维系脑内环境的相对恒定十分重要,但同时BBB也限制了治疗性药物向脑部的转运,是药物进入脑组织发挥治疗作用的主要屏障。构建新型的具有提高药物脑内递送能力的药物传递系统,已成为药剂学的研究热点。鼻腔嗅粘膜与脑之间存在直接通路,通过鼻腔给药,有望帮助药物绕过BBB,提高其脑内递释,具有很高的研究价值和临床意义。纳米粒(NP)递药系统是将药物包载在生物可降解的高分子材料中,可以有效防止药物在体内的降解,提高药物稳定性,有望增加药物的吸收。然而,普通NP通过鼻腔给药仍存在许多不足:NP粒径较大,很难穿过细胞间紧密连接吸收,透粘膜吸收能力较弱;对鼻粘膜的粘附能力弱,容易在鼻纤毛摆动的影响下被清除,鼻腔中滞留时间不长,影响了NP的摄取量;在鼻粘膜上缺乏部位选择性,无法更有效地将药物转运到与脑有通路的嗅粘膜,因而脑内递药效率差。本课题组高小玲博士构建了一种新型的经鼻给药脑内递药系统—凝集素修饰纳米粒递药系统。以表面修饰麦胚凝集素的NP(WGA-NP)作为药物的载体,在增强药物体内稳定性的同时,还能与鼻腔嗅粘膜上选择性高表达的N-乙酰氨基葡萄糖特异结合,延长递药系统在鼻粘膜上的滞留时间,介导鼻粘膜特别是嗅粘膜对递药系统的吸收,选择性地递送更多的药物入脑。本课题拟采用体外细胞实验及组织切片观察进一步探讨WGA-NP递药系统跨粘膜的机理及经鼻入脑的通路。本文第一部分为WGA-NP的构建与表征。使用香豆素-6(Cou-6)及量子点(QDs)两种不同的荧光染料作为探针,将一定比例的甲氧基聚乙二醇-聚乳酸(MPEG-PLA)和马来酰亚胺聚乙二醇-聚乳酸(MAL-PEG-PLA)经乳化/溶媒蒸发法制备得到NP,该NP表面的马来酰亚胺基与巯基化的WGA通过共价连接,得到WGA-NP。制备条件:MPEG-PLA:MAL-PEG-PLA质量比为9:1;巯基化试剂2-IT:WGA摩尔比为60:1;MAL-PEG-PLA:WGA摩尔比为3:1;反应时间为9h。制备得到NP及WGA-NP大小均匀、形态圆整,平均粒径100nm左右,Zeta电位-20mv左右。通过免疫电镜观察证实WGA-NP表面连接有WGA;通过红细胞凝集试验证实,连接于WGA-NP表面的WGA仍具特异性糖基结合的活性。通过冷冻电镜观察证实每个NP内部均包封有数个荧光探针分子。体外泄漏试验证实Cou-6体外泄漏量小;通过比较QDs和NP-QDs的光稳定性,证实NP的包封可有效提高QDs的光稳定性;通过比较WGA-NP-Cou-6和WGA-NP-QDs的光稳定性,证实QDs荧光寿命更长,光稳定性更好,可作为一种新型荧光探针用于递药系统的示踪。为了考察鼻腔给药是否优于其他常规给药方式,第二部分首先比较了中枢活性药物盐酸美沙酮,三种途径大鼠给药后生物利用度的差别,得到鼻腔给药起效快,生物利用度较高,安全性相对较好的结果。为了评价WGA-NP经鼻给药后能否有效提高药物的入脑量,发挥药物的治疗活性,进一步选用具有促进记忆和智力作用的蛋白多肽药物—血管活性肽(VIP)为模型药物,采用复乳/溶媒蒸发法制备的NP-VIP及WGA-NP-VIP,通过Morris水迷宫实验比较不同给药方案组大鼠间的药效学差别,研究WGA-NP递药系统用于蛋白多肽类药物脑内递送的可行性。采用AF64A侧脑室注射构建大鼠中枢胆碱能神经元损毁AD模型,通过Morris水迷宫实验评价VIP不同制剂对大鼠空间记忆障碍的改善作用。结果证实痴呆模型组大鼠在行为学上表现出明显的空间记忆障碍特征,建模成功;皮下注射及鼻腔给予VIP水溶液,对于改善AF64A侧脑室注射所致大鼠空间记忆障碍无效,结果与痴呆模型组无显著性差异;NP-VIP(25μg/kg)鼻腔给药后,能够对大鼠中枢胆碱能系统发挥一定的保护作用,改善大鼠的空间记忆障碍,说明VIP经NP包载后提高了稳定性和入脑量;WGA-NP-VIP鼻腔给药,在剂量减半(12.5μg/kg)的情况下仍可产生明显的空间记忆改善作用,水迷宫实验结果与正常对照组类似,说明WGA-NP是更有效的脑内递药系统,为具有脑内治疗活性药物,特别是稳定性差、难以通过血脑屏障的蛋白多肽类药物脑内递送提供了有效手段。第三部分为WGA-NP递药系统体外跨细胞转运机理的初步探讨。通过体外细胞培养的方法,成功建立Caco-2细胞单分子层模型,光学显微镜和电镜观察证实经过21天的培养后,细胞形成了紧密的单分子层结构,并分化出极性上皮细胞特有的微绒毛及细胞间紧密连接结构;跨膜电阻大于400Ω·cm,

关键词：纳米粒麦胚凝集素鼻腔给药脑内递送转运机理香豆素-6 量子点血管活性肠肽 Caco-2细胞

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

水稻体内镉转运机理的研究进展

水稻体内镉转运机理的研究进展

农业环境与生态安全——第五届全国农业环境科学学术研讨会

作者：刘仲齐农业部环境保护科研监测所

部分水稻产区土壤重金属镉（Cd）严重超标,生产出的镉超标大米引起了人们的广泛关注。低积累品种能显著减少大米中的Cd含量,从而有效降低食品安全风险。Cd从土壤进入水稻根系,再从根系向地上部分转运,要受到一系列离子通道的识别。有些... 详细信息

部分水稻产区土壤重金属镉（Cd）严重超标,生产出的镉超标大米引起了人们的广泛关注。低积累品种能显著减少大米中的Cd含量,从而有效降低食品安全风险。Cd从土壤进入水稻根系,再从根系向地上部分转运,要受到一系列离子通道的识别。有些水稻品种通过金属离子专用通道来调控Cd的转运效率,多数品种则是利用阳离子通道甚至是离子通用通道进行Cd的转运。离子通道基因的表达水平和表达时间直接决定着水稻体内的Cd转运效率和在各器官中的积累量。发掘和利用Cd专用离子通道基因是选育低积累品种的遗传基础。

关键词：水稻镉离子通道转运机理低积累

来源： cnki会议评论

在线全文

cnki会议

学校读者我要写书评

暂无评论

石油污染土壤微生物修复技术及机理研究进展

应用化工 2023年

作者：张钊河北工程大学能源与环境工程学院

综述了环境微生物技术在石油污染土壤修复中的应用方法，重点介绍了人为干预提高石油降解微生物治理油污土壤的原位和异位修复技术和微生物去除石油组分的作用机理。目前，针对微生物修复的研究热点多为石油降解微生物的选取及多种微生... 详细信息

综述了环境微生物技术在石油污染土壤修复中的应用方法，重点介绍了人为干预提高石油降解微生物治理油污土壤的原位和异位修复技术和微生物去除石油组分的作用机理。目前，针对微生物修复的研究热点多为石油降解微生物的选取及多种微生物的复合菌对石油组分的去除效果，但对微生物技术的实际应用和机理研究相对较少。提出了未来微生物技术修复石油污染土壤的研究和发展方向，包括特定材料对微生物的固定化、利用宏组学与示踪技术进一步明确微生物的降解机理和质粒拼接手段构建高效基因工程菌。

关键词：石油污染土壤微生物修复吸收转运机理功能基因

同方期刊数据库评论

在线全文

同方期刊数据库

学校读者我要写书评

暂无评论

甘氨酸转运体二聚体的形成及其生理学意义

甘氨酸转运体二聚体的形成及其生理学意义

作者：王静如广州大学

学位级别：硕士

甘氨酸作为兴奋性突触中NMDA受体的共同激动剂,调节谷氨酸神经元的信号传导。甘氨酸转运体1(Gly T1)负责甘氨酸的再摄取,是治疗中枢神经系统疾病潜在的药物靶标。尽管目前在转运体的结构和转运机制方面的研究取得了重大进展,但通过寡聚... 详细信息

甘氨酸作为兴奋性突触中NMDA受体的共同激动剂,调节谷氨酸神经元的信号传导。甘氨酸转运体1(Gly T1)负责甘氨酸的再摄取,是治疗中枢神经系统疾病潜在的药物靶标。尽管目前在转运体的结构和转运机制方面的研究取得了重大进展,但通过寡聚作用对转运体功能的调控仍不清楚。在本研究中,我们通过免疫共沉淀和配体结合检测到两种形式的Gly T1结合成二聚体和多聚体。为了研究Gly T1二聚体的功能,我们将在TM6细胞外端附近的EL3中的Leu288突变为半胱氨酸Cys,并进行氧化交联。通过分析菲咯啉铜(Cu P)诱导的二聚体对转运活性的影响,发现交联形成的Gly T1-L288C二聚体抑制了转运体的转运活性。Gly T1天然二聚体的活性仅比具有完全活性的单体高30%。此外,分子内离子对K286-E289被证明对稳定EL3的构象至关重要。该构象可调节Gly T1二聚体的形成和转运功能。我们还解析了转运体构象以及细胞内分子因素对Gly T1二聚体形成和转运功能的影响。在Na和Cl同时存在的情况下,底物甘氨酸显著减少了氧化交联的二聚体,这表明底物运输过程中结构域的大规模旋转破坏了Gly T1二聚体界面的相互作用。PIP2和棕榈酸与Gly T1结合显著增加Gly T1-L288C二聚体的形成,建议这些化学分子作为Gly T1二聚体形成的重要调节剂。这些信号分子通过调节二聚体的形成进而调控转运体Gly T1的转运活性。本研究从分子水平上解明了甘氨酸转运体寡聚化、寡聚化对转运活性的影响、分子因素通过调节寡聚化进而调控转运体活性的机制,为我们理解甘氨酸转运体结构与功能之间的关系以及寡聚化的生理学意义提供了新见解。

关键词：甘氨酸转运体寡聚化结构与功能转运活性转运机理功能调节生理学意义

多环芳烃在冬小麦体内的吸收与转运及富集研究进展

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

环境科学研究 2017年第9期30卷 1398-1405页

作者：石陶然田凯包环宇侯劭炜刘雪平吴福勇西北农林科技大学资源环境学院陕西杨凌712100 农业部西北植物营养与农业环境重点实验室陕西杨凌712100 河南城建学院市政与环境工程学院河南平顶山467036

多年来以煤炭为主的能源消费结构和经济社会持续发展,导致我国PAHs(多环芳烃)排放量居高不下,直接造成土壤和大气PAHs严重污染.为了探明PAHs在冬小麦体内的积累过程和调控机制,在系统分析PAHs在冬小麦体内的吸收、转运和富集的基础上,... 详细信息

多年来以煤炭为主的能源消费结构和经济社会持续发展,导致我国PAHs(多环芳烃)排放量居高不下,直接造成土壤和大气PAHs严重污染.为了探明PAHs在冬小麦体内的积累过程和调控机制,在系统分析PAHs在冬小麦体内的吸收、转运和富集的基础上,重点阐述了冬小麦PAHs根系吸收和叶面吸收影响因素方面的最新研究进展.研究发现:(1)小麦根系对PAHs的吸收包括主动吸收和被动吸收两种方式,其中主动吸收是一个载体协助、消耗能量、PAHs与H+共运的过程;被动吸收除了在高等植物中普遍存在的简单扩散外,水-甘油通道也参与了该过程.(2)PAHs通过气态、颗粒态沉降到小麦叶面角质层或直接通过气孔进入叶片.(3)影响PAHs根系和叶面吸收的主要因素包括PAHs理化性质、植物生理状况、环境因素等.(4)小麦根系吸收的PAHs可以向地上部转运,并且与辛醇-水分配系数(KOW)、蒸腾速率、土壤中氮的形态和浓度有关.主要问题:(1)对于小麦叶片吸收的PAHs向基运输机理有待进一步研究.(2)农田生态系统中冬小麦往往遭受土壤及大气双重污染,根系吸收及叶面吸收分别对其体内积累PAHs的贡献尚不清楚.因此,需关注韧皮部、木质部在PAHs转运中所起的作用;利用同位素示踪、双光子激发显微镜等先进技术观察和跟踪PAHs如何进入小麦以及在小麦叶中的转移和分布,阐明PAHs叶面吸收的微观机理;注重大田试验研究,为揭示冬小麦对PAHs的吸收、积累及调控机理,同时也为有机污染地区生产安全农产品提供重要依据.

关键词：多环芳烃小麦根系吸收叶面吸收转运机理

维普期刊数据库

同方期刊数据库评论

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

多肽TAP亲和活性预测与分子模拟研究

多肽TAP亲和活性预测与分子模拟研究

作者：潘显超重庆大学

学位级别：硕士

抗原加工转运蛋白(Transporter associated with antigen processing, TAP)隶属于ABC转运蛋白(ATP-binding cassette, ABC)家族，其主要生理功能是将细胞质中蛋白酶体降解的多肽片段在ATP的驱动下转运至内质网腔，并参与抗原肽-人类白... 详细信息

抗原加工转运蛋白(Transporter associated with antigen processing, TAP)隶属于ABC转运蛋白(ATP-binding cassette, ABC)家族，其主要生理功能是将细胞质中蛋白酶体降解的多肽片段在ATP的驱动下转运至内质网腔，并参与抗原肽-人类白细胞抗原(Human leukocyte antigen, HLA)复合物的组装过程。研究发现：TAP与多种人类疾病的发生密切相关，如自身免疫性疾病(如Ⅰ型糖尿病)、肿瘤和病毒感染等。因此，TAP结构-功能关系以及转运机理研究对于探索细胞免疫、病毒逃逸与肿瘤发生机理等均具有重要的理论意义。然而，由于缺乏TAP三维晶体结构，其结构-功能关系及转运机理至今尚不清楚。随着计算机技术的飞速发展，计算生物学方法与技术已经成为生命科学领域的一种重要研究方法，如定量构效关系(Quantitative structural-activity relationship,QSAR)、同源模建(Homology modeling)、分子对接(Molecular docking)和分子动力学(Molecular dynamics, MD)等。本文采用上述方法，针对多肽TAP亲和活性与选择特异性、ATP水解与TAP构象偶联以及TAP结构-功能关系等方面进行了探索性研究，并取得了阶段性研究成果。 ①应用VHSE (Principal component score vector of hydrophobic, steric, andelectronic properties)氨基酸描述子对613个抗原9肽进行结构表征，在此基础上采用支持向量回归(Support vector regression, SVR)成功建立了多肽TAP亲和活性预测模型，最优线性支持向量机模型的R2、Q2和R2ext分别为0.7386、0.7270和0.6057。结果表明：1)电性为影响TAP亲和活性的首要因素，其次是立体和疏水性质;2)底物9肽的P1(N-端)、P2、P7和P9(C-端)位氨基酸物化性质对TAP亲和活性有重要影响，而P3、P4、P5和P6位对模型贡献相对较小，P8位则与活性无关。依据最优模型对模拟点突变9肽的TAP亲和活性预测结果，同时结合变量载荷分析，对TAP的底物选择特异性进行了分析和总结。 ②为探索ATP水解与TAP-NBD构象变化的偶联关系，论文以TAP1-NBD晶体结构为模板，构建了4种核苷酸结合构象，即ATP/ATP、ATP/ADP、ADP/ADP和NOATP，并分别进行了80ns的分子动力学模拟研究。结果显示：对于ATP/ATP结合构象，NBD的重要结构域以及保守氨基酸残基间的距离相对稳定，NBD1-NBD2以及ATP-NBD间的氢键相互作用对维系构象的稳定有重要作用;对于ATP/ADP结合构象，除结合ADP位点中A-loop与C-loop的距离增加外，其他结构域间的距离均不同程度减小;对于ADP/ADP结合构象，所有重要结构域间的距离均增加;而对于NOATP结合构象，距离均减小。以上研究结果表明：当NBD结合2个ATP时，可形成相对稳定的二聚体结构;ATP水解可引起NBD的A-loop和α螺旋亚结构域(不包括C-loop)的构象改变。当NBD结合ATP/ADP或NOATP时，NBD1-NBD2接触表面相互作用更加复杂，ATP结合位点仍结合紧密，甚至进一步二聚化;而当NBD结合2个ADP，即ATP全部水解时，2个结合位点均处于开放状态，表明在底物转运过程中，ATP水解后仅释放出磷酸基团，生成的ADP仍保留在结合位点中。研究结果暗示：TAP在底物转运过程中ATP水解过程与“开关”模型基本一致。 ③以3个ABC转运蛋白晶体结构作为TAP模板分子，构建了4个TAP分子模型，并采用PROCHECK、WHATHECK和ERRAT等方法对上述模型进行质量评价。在此基础上，利用上述模型对TAP转运底物前后的构象变化进行了比较研究。结果显示：基于P-gp和TM0287/0288构建的3个TAP模型接近底物转运前的初始构象;而基于Sav1866构建的TAP模型则接近底物转运后的构象。基于上述2种不同构象和多序列比对结果，对TMD结构域中的保守氨基酸残基的功能进行了细致的分析。研究表明：TAP的TMH2与TMH5间的π-π堆积作用以及内质网侧的TAP-ELs间的相互作用均与底物转运过程中跨膜螺旋构象的改变密切相关。此外，结合相关实验研究结果，对TAP结合和转运底物起关键作用的氨基酸残基进行了分析和讨论。 ④以基于P-gp和TM0287/0288构建的3个TAP模型为受体模型，具亲和活性的参考9肽(RRYQKSTEL)为配体，采用Surflex-Dock分子对接方法对底物与TAP结合口袋的作用模式进行了探索性研究。初步研究结果显示：9肽以一种相对扭曲的构象与TAP结合

关键词： TAP 选择特异性转运机理分子对接分子动力学

替米考星纳米结构脂质载体处方优化、质量评价及在肠上皮细胞上的吸收机制研究

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

替米考星纳米结构脂质载体处方优化、质量评价及在肠上皮细胞上的...

作者：张茜南京农业大学

学位级别：硕士

替米考星（TMS）是一种大环内酯类动物专用抗生素,其以强大的抗菌作用成为畜禽呼吸道感染防治的首选药,还具有潜在的抗病毒和抗炎作用。由于其注射给药易导致心脏与肾脏毒性,因此其口服给药是兽医临床上应用最广泛的给药途径。然而,替... 详细信息

替米考星（TMS）是一种大环内酯类动物专用抗生素,其以强大的抗菌作用成为畜禽呼吸道感染防治的首选药,还具有潜在的抗病毒和抗炎作用。由于其注射给药易导致心脏与肾脏毒性,因此其口服给药是兽医临床上应用最广泛的给药途径。然而,替米考星的溶解度低、适口性差、在胃酸中不稳定等均影响其临床疗效。纳米结构脂质载体（NLCs）作为一种新型药物递送载体,具有载药量高、稳定性好、避免药物泄漏、增加药物渗透性和提高口服生物利用度等特性。故而,本研究通过正交设计获得替米考星纳米结构脂质载体（TMS-NLCs）的最优处方,然后对高剪切-超声分散法制备的TMS-NLCs进行理化性质和药学性能的表征,并探究其在肠细胞模型上的吸收作用与机制。首先利用单因素法筛选影响较大的处方与工艺因素,然后采用L9（34）正交试验设计表安排试验,筛选NLCs的最优处方及制备工艺。确定的最适制备方案为固液脂质比1:9,乳脂比3:10,药脂比3:10和冷水分散稀释比1:1;其他条件为:吐温80（T80）在油相中,油水混合时将油相加入水相,超声20 min后将热的初乳在60 s内分散入冷水中以形成TMS-NLCs。获得TMS-NLCs最优处方的粒径为283.03±6.64 nm,多分散系数（PDI）为 0.219±0.027,zeta 电位为-30.04±1.36 mV,包封率（EE）高达（93.46±0.50）%,载药量（DL）为（9.23±0.08）%。透射电镜下观察 TMS-NLCs 表面光滑呈球形,粒度分布相对均匀,且无团聚。然后对筛选的最优处方TMS-NLCs进行质量评价。先将其冷冻干燥获得冻干粉,利用X射线衍射（XRD）、差示扫描量热（DSC）以及傅立叶变换红外光谱（FT-IR）等技术考察药物与载体脂质基质的相互作用,同时对储存、高低温高速离心、稀释以及模拟胃肠液稳定性进行综合评价。采用超滤离心（UC）法分离TMS-NLCs与游离TMS,并通过高效液相色谱（HPLC）法测定包封率与载药量。选择透析袋法研究其体外释放行为。结果显示,使用10%蔗糖作为保护剂冻干效果最好。XRD、DSC和FT-IR表征结果揭示,TMS是以分子形式溶解在处方的脂质基质中,使得非晶体结构的TMS包裹于NLCs中。综合理化性质评价,表明TMS-NLCs具有良好的稳定性。建立UC-HPLC法测定TMS-NLCs包封率与载药量,替米考星在1～20 μg/mL范围内,峰面积与浓度呈良好线性关系（R2=0.9999）,日内及日间精密度RSD均小于5%,超滤膜吸附率、加样处理回收率以及超滤加样回收率均满足方法学要求,同时此法重复性好、准确度高、操作简便且快速易行。体外释放研究表明,无论在模拟胃液还是肠液中,TMS-NLCs均呈现出缓释特性。以上结果说明,NLCs是可用于TMS经口给药制剂的一种新载体。最后利用Caco-2和MDCK-cbAbcg2/Abcb1细胞单层模型评价TMS-NLCs的渗透性及其吸收机制。通过完整性、通透性以及单层细胞形态观察确证细胞单层模型的成功建立,而后利用MTT法筛选药物转运适宜浓度范围及评价示踪剂与抑制剂的毒性作用;最后进行一系列单、双向转运试验评价TMS-NLCs渗透性并阐明吸收机制。结果显示,MDCK-chAbcg2/Abcb1细胞培养6天后跨上皮电阻（TEER）值可达1700 Ω·cm2以上;Caco-2细胞培养21天后的TEER值稳定在450Ω·cm2以上;转运前后TEER值均无明显变化;FE-TEM观察发现,两种细胞均分化成类肠上皮细胞样结构;荧光黄Papp值在两种细胞上均＜0.50×10-6 cm/s,普奈洛尔Papp值均之10×10-6 cm/s,证实了两种细胞单层模型的成功构建。MTT分析显示,转运试验所选择的药物浓度均无明显细胞毒性,可保证转运结果可靠。在Caco-2和MDCK-chAbcg2/Abcb1细胞单层模型上进行渗透性评价显示,TMS为外排转运蛋白P-gp的底物,NLCs对P-gp作用效果与维拉帕米类似,有抑制P-gp外排的作用。双向转运结果揭示NLCs在提高Caco-2或MDCK-chAbcg2/Abcbl细胞吸收TMS的同时还降低P-gp的外排作用,从而提高TMS的渗透性。进一步研究发现,TMS-NLCs通过一种能量依赖性的主动跨细胞方式进行转运。利用不同内吞抑制剂预处理Caco-2或MDCK-chAbcg2/Abcb1细胞单层,研究发现TMS-NLCs主要是通过小窝蛋白/脂筏介导的内吞途径进行胞转,且可使TMS逃避肠道屏障上P-gp外排以及避免溶酶体降解,使其得以完整形式进行跨细胞转运。

关键词：替米考星纳米结构脂质载体正交设计稳定性 UC-HPLC法体外释放渗透性转运机理

猪卵泡液抑制素的粗提、鉴定和抑制素α亚基在大鼠中枢神经的免疫组化定位

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

猪卵泡液抑制素的粗提、鉴定和抑制素α亚基在大鼠中枢神经的免疫...

作者：柳伟荣南京农业大学

学位级别：硕士

一、猪卵泡液粗提物抑制素生物活性的测定用处理过的猪卵泡液经SephadexG—200和SephadexG—100二次凝胶过滤层析后，测定各组份对HCG诱导的小白鼠生殖器官发育及输卵管水肿抑制的影响。实验结果：猪卵泡液经二次凝胶过滤层析后的峰1对... 详细信息

一、猪卵泡液粗提物抑制素生物活性的测定用处理过的猪卵泡液经SephadexG—200和SephadexG—100二次凝胶过滤层析后，测定各组份对HCG诱导的小白鼠生殖器官发育及输卵管水肿抑制的影响。实验结果：猪卵泡液经二次凝胶过滤层析后的峰1对HCG诱导的小白鼠的卵巢增重、整个生殖器官增重以及输卵管水肿有明显的抑制作用。结果表明，峰1中含有生物活性较高的抑制素蛋白组分。二、免疫印迹法检测猪卵泡液抑制素选用猪卵泡液、猪卵泡液经过经SephadexG—200和SephadexG—100二次凝胶过滤层析后所得到两个峰，先进行SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)，然后以抑制素α亚基的单克隆抗体为一抗进行免疫印迹(Western Blot)。实验结果表明，在第二(猪卵泡液)、第三(峰1)泳道的18KD部位均出现棕色阳性反应条带，说明在猪卵泡液和所得的第一个峰中均含有抑制素α亚基。三、抑制素α亚基在大鼠下丘脑、垂体的免疫组化定位为研究抑制素通过血脑屏障的机理，对正常性成熟雌性大鼠以及去卵巢不注射和注射抑制素α片段、注射抑制素粗提物的大鼠下丘脑、垂体进行抑制素α亚基的免疫组化定位，结果显示，在正常性成熟雌性大鼠的下丘脑、垂体均出现棕色的阳性部位;去除卵巢后10天的大鼠下丘脑、垂体没有出现阳性反应部位;对于去除卵巢并注射抑制素α片段的大鼠，注射0.1μg后的各时间段在下丘脑、垂体没有发现阳性部位;注射0.2μg后4小时在下丘脑出现阳性部位，而在垂体没有发现;注射0.5μg后2小时就下丘脑、垂体发现阳性部位;注射抑制素粗提物0.2ml后4小时在下丘脑、垂体也出现了阳性反应部位。试验表明，正常大鼠下丘脑、垂体均存在着抑制素α亚基的结合位点;卵巢是抑制素的主要产生部位;对于注射的抑制素α片段、抑制素粗提物，均能到达其下丘脑、垂体，并存在剂量与时间上的关系，抑制素α亚基可以通过血脑柳伟荣:猪卵泡液抑制素的粗提、鉴定和抑制素。亚基在大鼠中枢神经的免疫组化定位屏障而到达神经中枢.

关键词：抑制素提纯生物活性血脑屏障转运机理