检索结果-南通市图书馆

化学工业与工程 2015年第6期32卷 74-79页

作者：杨柯张国畅陈洵天津大学化工学院天津300072

表达有毕赤酵母木糖还原酶(XR)和木糖醇脱氢酶(XDH)的重组酿酒酵母,能代谢木糖。但是XR和XDH分别偏好辅酶NADPH和NAD+,造成辅酶的不平衡和副产物的积累,所以重组酿酒酵母利用木糖产生乙醇的效率很低。转氢酶可以催化辅酶NADPH和NADH之... 详细信息

表达有毕赤酵母木糖还原酶(XR)和木糖醇脱氢酶(XDH)的重组酿酒酵母,能代谢木糖。但是XR和XDH分别偏好辅酶NADPH和NAD+,造成辅酶的不平衡和副产物的积累,所以重组酿酒酵母利用木糖产生乙醇的效率很低。转氢酶可以催化辅酶NADPH和NADH之间的相互转化,因此本实验将黑曲霉的转氢酶基因NNT转入到重组酿酒酵母中,通过实验确定了NNT基因的表达蛋白在酵母细胞内定位于线粒体中,NNT基因分别用p PGK1、p CCW12和p HXT7启动子进行表达,在微好氧的木糖发酵条件下,NNT基因的导入使酿酒酵母甘油产量下降,乙醇产率提高,在由p CCW12和p HXT7表达NNT基因的重组酿酒酵母中,木糖醇产率分别下降86.3%和49.3%,乙醇产率提高16.7%和12.7%,说明转氢酶NNT的存在改善了木糖代谢的辅酶不平衡,提高了乙醇的转化率。

关键词：酿酒酵母转氢酶木糖甘油乙醇

来源：

维普期刊数据库

同方期刊数据库评论

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

棕色固氮菌吡啶核苷酸转氢酶的分离纯化及性质的探讨

引用

微生物学杂志 1982年第3期 5-10页

作者：戴祥鹏王雨勤曾青张宪武冯鲁昕唐玲中国科学院林业土壤研究所山东大学生物系山东大学生物系实习生

由棕色固氮菌菌体经超声波破碎处理的无细胞提取液,经50℃加热处理15分钟,硫酸铵区分,DEAE纤维素(DE—32)柱层析,SephadexG—100纯化,得到聚丙烯酰胺凝胶电泳均一的转氢酶制备物(胶浓度7.5％)。酶比活提高了

关键词：棕色固氮菌无细胞提取液亚细胞转氢酶分离纯化

来源：

同方期刊数据库评论

在线全文

同方期刊数据库

学校读者我要写书评

暂无评论

大肠杆菌高得率合成琥珀酸的系统代谢工程研究

大肠杆菌高得率合成琥珀酸的系统代谢工程研究

引用

作者：孟娇天津大学

学位级别：硕士

琥珀酸是一种重要的平台化合物,琥珀酸及其衍生物被广泛地应用于食品、医药和化工等领域。大肠杆菌是目前生产琥珀酸的主要菌株。然而由于胞内NADH的供应不足,大肠杆菌经TCA还原臂生成琥珀酸的最大理论得率被限制为1 mol/mol葡萄糖。本... 详细信息

琥珀酸是一种重要的平台化合物,琥珀酸及其衍生物被广泛地应用于食品、医药和化工等领域。大肠杆菌是目前生产琥珀酸的主要菌株。然而由于胞内NADH的供应不足,大肠杆菌经TCA还原臂生成琥珀酸的最大理论得率被限制为1 mol/mol葡萄糖。本文首次计算并报道出当磷酸戊糖(PP)途径和糖酵解途径的碳流量比为6:1时,琥珀酸能实现其最大理论得率1.714 mol/mol葡萄糖。基于这个理算计算,我们战略性地调控了产琥珀酸的多条途径。系统的代谢工程策略,包括过表达氧化PP途径的关键基因,强化葡萄糖的运输效率,过表达羧化途径的关键酶,以及强化琥珀酸胞内到胞外的运输,琥珀酸的得率提高到1.54mol/mol葡萄糖,相比出发菌株ZTK提高了52%,达到理论最大得率的90%。来自谷氨酸棒杆菌的解调基因zwf243-gnd361被首次引入大肠杆菌的琥珀酸生产菌株ZTK。通过比较过表达大肠杆菌自身的zwf-gnd和谷氨酸棒杆菌的突变基因zwf243-gnd361对琥珀酸得率及胞内NADH/NAD+的影响,发现过表达来自谷氨酸棒杆菌的解调基因zwf243-gnd361能有效地提高胞内NADH的水平,促进琥珀酸的合成。进一步过表达了PP途径的关键基因pgl、tal B和tktA,琥珀酸的得率提高到1.21 mol/mol葡萄糖。引入产琥珀酸放线杆菌的pepck,过表达大肠杆菌自身的sthA,敲除乙酸形成基因ackA-pta,菌株WSA150琥珀酸得率提高到1.36 mol/mol葡萄糖。在菌株WSA150的基础上,过表达葡萄糖运输途径的基因galp,菌株的比糖耗速率提高了12%。过表达来自谷氨酸棒杆菌的pyc,副产物丙酮酸的积累量减少将近一半,琥珀酸的得率提高到1.40 mol/mol葡萄糖,达到理论最大得率的82%。我们进一步强化厌氧条件下的四碳二羧酸运输蛋白的表达量从而去提高琥珀酸的得率。结果表明只过表达dcuB,琥珀酸的得率上升到1.53 mol/mol葡萄糖,达到理论最大得率的89%。只过表达dcuC,琥珀酸的得率上升到1.46 mol/mol葡萄糖,达到理论最大得率的85%。同时过表达dcuB和dcuC,琥珀酸的得率上升到1.54 mol/mol葡萄糖,较出发菌株ZTK提高52%,达到理论最大得率的90%。最后在过表达dcuB的基础上敲除基因zwf243-gnd361前面的阻遏蛋白结合位点,摆脱诱导剂IPTG的诱导,菌株比生长和比糖耗速率分别提高63%和13%,琥珀酸的得率为1.50 mol/mol葡萄糖,占理论最大得率的88%。本研究中描述的系统代谢工程策略同样也适用于在大肠杆菌中合成其他NADH依赖型的产品。

关键词：大肠杆菌琥珀酸磷酸戊糖途径转氢酶辅因子

来源：

同方学位论文库评论

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

利用辅酶工程技术提高酿酒酵母木糖发酵生产乙醇能力

利用辅酶工程技术提高酿酒酵母木糖发酵生产乙醇能力

引用

作者：杨柯天津大学

学位级别：硕士

生物乙醇作为一种洁净的可再生能源，受到日益广泛的关注。木糖是自然界含量最丰富的五碳糖之一，广泛存在于林业及农业作物的半纤维素中，若能利用木糖生产生物乙醇，则会大大降低传统生物乙醇的生产成本。酿酒酵母在乙醇生产方面... 详细信息

生物乙醇作为一种洁净的可再生能源，受到日益广泛的关注。木糖是自然界含量最丰富的五碳糖之一，广泛存在于林业及农业作物的半纤维素中，若能利用木糖生产生物乙醇，则会大大降低传统生物乙醇的生产成本。酿酒酵母在乙醇生产方面有很多优势，但不能利用木糖，本课题组已将毕赤酵母木糖代谢的XYL1和XYL2基因导入到酿酒酵母中，构建出有木糖代谢能力的重组酿酒酵母菌株KAM-6X，由于木糖代谢过程中木糖还原酶XR和木糖醇脱氢酶XDH分别依赖辅酶NADPH和NAD+，导致辅酶的不平衡，所以重组酿酒酵母中木糖-乙醇转化率较低。木糖代谢过程中消耗的NADPH主要由PPP途径的氧化还原阶段产生，并伴随生成CO2消耗了碳源;同时由于酿酒酵母内不含转氢酶，不能催化辅酶NADH和NADPH之间的相互转化。所以在本研究中，我们通过两种途径分别对重组酿酒酵母菌株的辅酶生成和转化方面进行改造：首先：在重组酿酒酵母菌株中缺失PPP途径中编码葡萄糖-6-磷酸脱氢酶（G6PDH）的基因zwf1，阻断此途径的NADPH生成，然后分别导入外源依赖NADP+的甘油醛-3-磷酸脱氢酶基因GAPN和GDP1来替代zwf1基因产生NADPH，并且不生成CO2，但是混合糖发酵结果显示，缺失zwf1基因的酵母菌株基本不能利用木糖进行生长，说明zwf1基因在木糖代谢的PPP途径中具有关键作用，不能进行缺失。因此将GAPN和GDP1基因分别导入未缺失zwf1的重组酿酒酵母菌株KAM-6X和KAM-6X-NOXE中，其中GAPN基因分别用pPGK1、pHXT7、pFBA1启动子进行过表达，GDP1基因分别用pPGK1、pCCW12、pHXT7过表达，木糖的发酵结果显示：副产物木糖醇和甘油的产生减少，同时乙醇产率提高。说明木糖转化乙醇的能力增强，有更多的碳源向产生乙醇的方向流动，但是GAPN的重组菌株比GDP1的重组菌株在木糖发酵改善乙醇产量方面的效更加明显。第二：在重组酿酒酵母中导入黑曲霉转氢酶基因NNT，将转氢酶NNT与荧光蛋白相偶联导入重组酵母中，通过观察荧光发现转氢酶NNT定位于线粒体中，然后分别用启动子pPGK1、pCCW12、pHXT7对基因NNT进行表达，构建出重组质粒转入酿酒酵母菌株KAM-6X中进行微好氧的木糖发酵，结果显示：甘油和木糖醇的产量降低，同时乙醇产率提高。综上所述:通过导入外源GAPN和GDP1基因来弥补木糖代谢过程中第一步反应消耗的NADPH;导入转氢酶基因NNT来实现辅酶NADH和NADPH之间的相互转化，这些辅酶工程方法在提高酿酒酵母木糖代谢产生乙醇方面有积极的效果。

关键词：酿酒酵母木糖乙醇辅酶 GAPN GDP1 转氢酶

来源：

同方学位论文库评论

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

Comin牌检测试剂盒

引用

植物生理学报 2014年第5期 684-684页

简介苏州科铭生物技术有限公司自主研发、生产和销售Comin牌检测试剂盒,目前拥有26个系列200种常用测定指标330种检测试剂盒,其中辅酶Ⅰ(NAD)系列(15种)、辅酶Ⅱ(NADP)系列(16种)、维生素C系列(7种)、脂肪酸系列(15种)、淀粉系列(13种)... 详细信息

简介苏州科铭生物技术有限公司自主研发、生产和销售Comin牌检测试剂盒,目前拥有26个系列200种常用测定指标330种检测试剂盒,其中辅酶Ⅰ(NAD)系列(15种)、辅酶Ⅱ(NADP)系列(16种)、维生素C系列(7种)、脂肪酸系列(15种)、淀粉系列(13种)、蔗糖系列(17种)、P450系列(10种)、土壤系列(14种)和转氢酶系列(2种)是市场上独家拥有的试剂盒。详情请登录本公司网站查询,或者致电本公司申请纸质版本产品手册。

关键词：检测试剂盒 Comin 辅酶Ⅱ 菸酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸转氢酶纸质版公司网站产品手册测定指标

来源：

同方期刊数据库评论

在线全文

同方期刊数据库

学校读者我要写书评

暂无评论

欢迎您,

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

在线全文

在线全文

在线全文

在线全文

在线全文

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：

通借通还

欢迎您,

建议与咨询 留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

在线全文

在线全文

在线全文

在线全文

在线全文

请选择保存的检索档案： 新增检索档案 确定 取消

请选择收藏分类： 新增自定义分类 确定 取消

通借通还

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：