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外源基因转染细胞技术的研究进展

现代生物医学进展 2014年第7期14卷 1382-1384,1270页

作者：王月丽魏继楼程红蕾刘芳罗素梅王若雨大连大学附属中山医院肿瘤科辽宁大连116001

细胞转染技术是分析细胞内基因及基因产物功能的重要工具。它不仅是基因功能研究、基因免疫的理论和技术基础,也是研究基因表达调控、突变分析等的常规工具。同时也是体内应用的重要过程,比如基因治疗、疫苗接种、药物开发等。在过去的4... 详细信息

细胞转染技术是分析细胞内基因及基因产物功能的重要工具。它不仅是基因功能研究、基因免疫的理论和技术基础,也是研究基因表达调控、突变分析等的常规工具。同时也是体内应用的重要过程,比如基因治疗、疫苗接种、药物开发等。在过去的40年里,已开发了多种外源基因转染细胞的方法。主要包括以病毒介导的外源基因转染细胞方法和非病毒介导的细胞转染方法。其具体可细分为三类:即生物学方法、化学方法、物理方法。这些方法的提出使外源分子如DNA、RNA等导入特定细胞并表达目的基因及产生特定功能的蛋白质分子得以实现。理想的细胞转染方法应该具有较好的生物降解性、稳定性、靶向性强、有助于基因的表达并能应用于基因方面疾病的治疗。但每种方法都有自己的优势和不足,应根据具体实验的设计和目的来选择最佳细胞转染方法.

关键词：细胞转染技术基因

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用转染技术建立巨噬细胞传代株

北京大学学报（医学版） 1986年第4期30卷 281-284页

作者：丁桂凤北京医科大学微生物学与免疫学教研室

本文报告应用转染技术建立巨噬细胞传代株,探讨应用不同来源的DNA获得具有不同功能特性的巨噬细胞株,应用SV40DNA、C-myc基因,U937DNA和胰岛素基因已获得7株细胞,经鉴定它们均有巨噬细胞的特性,即可分泌胶元酶、溶菌酶,其中有30—40％... 详细信息

本文报告应用转染技术建立巨噬细胞传代株,探讨应用不同来源的DNA获得具有不同功能特性的巨噬细胞株,应用SV40DNA、C-myc基因,U937DNA和胰岛素基因已获得7株细胞,经鉴定它们均有巨噬细胞的特性,即可分泌胶元酶、溶菌酶,其中有30—40％的细胞带有Fc受体,并有经Fc受体介导的吞噬功能。细胞株内细胞功能各异是因为细胞株尚未克隆化。从本试验结果看不仅经转染方法可获得巨噬细胞株,而且有可能经此法获得B或T淋巴细胞传代株。

关键词：巨噬细胞转染方法红血球绵羊 DNA 细胞表面吞噬细胞红细胞受体介导单核细胞因子转染技术

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基因转染技术在抗肝纤维化中应用的研究进展

广西医学 2021年第6期43卷 747-749页

作者：艾丁丁罗伟生广西中医药大学脾胃科南宁市530000

基因治疗是指将外源性正常基因导入靶细胞以治疗疾病的一种方法,现阶段主要运用于肿瘤及某些特殊疾病的治疗。有研究显示,将基因治疗的转染技术用于抗肝纤维化的治疗可以逆转纤维化,或可成为治疗肝纤维化的潜在方案。本文就基因转染技... 详细信息

基因治疗是指将外源性正常基因导入靶细胞以治疗疾病的一种方法,现阶段主要运用于肿瘤及某些特殊疾病的治疗。有研究显示,将基因治疗的转染技术用于抗肝纤维化的治疗可以逆转纤维化,或可成为治疗肝纤维化的潜在方案。本文就基因转染技术在抗肝纤维化中应用的研究进展进行综述。

关键词：肝纤维化基因治疗转染技术治疗

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小型转染:一种简便而快速的转染技术

国际生物制品学杂志 1992年第3期 140-141页

作者：潘卫

把外源性DNA引入活细胞的转染技术大大地促进了病毒分子生物学的研究。目前应用最广泛的转染技术是由磷酸钙和DEAE-dextran介导的,最近又建立了一种新的脂质体转染技术。然面,所有这些方法都有耗时、繁琐和昂贵等缺点。应用24孔和98孔... 详细信息

把外源性DNA引入活细胞的转染技术大大地促进了病毒分子生物学的研究。目前应用最广泛的转染技术是由磷酸钙和DEAE-dextran介导的,最近又建立了一种新的脂质体转染技术。然面,所有这些方法都有耗时、繁琐和昂贵等缺点。应用24孔和98孔细胞培养板的新的小型转染技术解决了这些问题,并在不同的细胞系的病毒基因的即时转染和稳定转染中获得成功。作者在人横纹肌肉瘤(RD),神经纤维瘤(SK-N-MC)和Hela细胞系上,用带HIV LT

关键词：转染技术基因质粒基因载体细胞系

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有待寻找高效率的转染技术

生理科学进展 1993年第1期 42-42页

作者：杨和平

基因转移是进行基因治疗最关键的技术。要求转移至靶细胞的基因安全、忠实和长效表达。逆转录病毒是目前发展较快的一种载体,它可用于体内外转染细胞。打孔球囊导管(perforated balloon catheter)可将逆转录病毒载体导入心血管组织中,... 详细信息

基因转移是进行基因治疗最关键的技术。要求转移至靶细胞的基因安全、忠实和长效表达。逆转录病毒是目前发展较快的一种载体,它可用于体内外转染细胞。打孔球囊导管(perforated balloon catheter)可将逆转录病毒载体导入心血管组织中,为基因转移常见方法之一。Fligelman等应用打孔球囊导管将含病毒颗粒(virions)的逆转录病毒载体注入兔主动脉,时间仅1min,且不需结扎血管(以往实验需结扎30min)。实验分三组:注射含β-半乳糖苷酶

关键词：转染技术基因治疗球囊导管打孔心血管基因疗法外源基因基因转移

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转染实验技术(生物实验室系列)

生物技术通讯 2014年第4期 500-500页

化学工业出版社出版本书覆盖了转染前目的基因的获取、载体的选择,各种转染技术,转染技术的应用等。作为一本实验技术类书籍,本书不仅较详细地阐述了有关技术的具体操作和程序,更着力于对各种技术的基本原理及其相关理论基础进行深层次... 详细信息

化学工业出版社出版本书覆盖了转染前目的基因的获取、载体的选择,各种转染技术,转染技术的应用等。作为一本实验技术类书籍,本书不仅较详细地阐述了有关技术的具体操作和程序,更着力于对各种技术的基本原理及其相关理论基础进行深层次的剖析。

关键词：生物实验室转染实验转染技术版本书

大鼠Slit2基因慢病毒干扰载体的构建及其对大鼠RPE细胞中Slit2基因的下调作用

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中华实验眼科杂志 2017年第8期35卷 683-689页

作者：蒋少秋周希瑗重庆医科大学附属第二医院眼科重庆市眼科研究所眼科学重庆市市级重点实验室 400010

背景年龄相关性黄斑变性（AMD）是老年人致盲的首要原因。目前，AMD的治疗方式在取得显著疗效的同时亦有一定的不足，寻找新的有效治疗靶点是当前的研究热点。目的构建大鼠Slit2基因慢病毒干扰载体，筛选有效干扰序列以用于大鼠视网膜... 详细信息

背景年龄相关性黄斑变性（AMD）是老年人致盲的首要原因。目前，AMD的治疗方式在取得显著疗效的同时亦有一定的不足，寻找新的有效治疗靶点是当前的研究热点。目的构建大鼠Slit2基因慢病毒干扰载体，筛选有效干扰序列以用于大鼠视网膜色素上皮（RPE）细胞中Slit2基因沉默，为大鼠相关体内实验奠定基础。方法设计2条大鼠Slit2基因siRNA序列，退火形成DNA，连接形成慢病毒干扰载体并进行测序鉴定。采用三质粒共转染293T细胞法收获慢病毒（Lv-rSlit2-siRNA），用药物筛选法测定病毒悬液滴度。将大鼠RPE细胞分为空白对照组、空病毒组、Lv—rSlit2-siRNAl组和Lv—rSlit2-siRNA2组，根据分组分别用仅有病毒的载体和不同序列的Lv—rSlit2-siRNA载体转染细胞，分别采用实时荧光定量PCR法和Western blot法测定各组细胞中Slit2mRNA及蛋白的表达以确定Slit2基因的敲减率，筛选有效干扰序列。采用0、100、200和400μmol／LCoCl，孵育大鼠RPE细胞以制备缺氧细胞模型并转染筛选Lv—rSlit2-siRNA2干扰序列，采用实时荧光定量PCR法和ELISA法测定大鼠RPE细胞中血管内皮生长因子A（VEGFA）表达变化及细胞上清液中VEGFA质量浓度。结果成功构建2条大鼠Slit2基因慢病毒干扰载体，病毒滴度分别为5×10^8TU／ml和3×10^8TU／ml，转染病毒后72h于荧光显微镜下观察RPE细胞慢病毒转染率均在70％以上。Lv—rSlit2-siRNAl组和Lv—rSlit2-siRNA2组大鼠RPE细胞中Slit2mRNA相对表达量分别为0．67±0．09和0．23±0．11，明显低于空白对照组的1．03±0．31和空病毒组的0．92±0．07；Lv—rSlit2-siRNAl组和Lv—rSlit2-siRNA2组大鼠RPE细胞中Slit2蛋白相对表达量分别为0．62±0．07和0．49±0．02，明显低于空白对照组的1．00±0．10和空病毒组的0．95±0．11，差异均有统计学意义（均P〈0．01）。0、100、200和400μmol／LCoCl，作用后，空白对照组和Lv—rSlit2-siRNA2组大鼠RPE细胞中VEGFAmRNA的相对表达量明显不同，差异均有统计学意义（F浓度=127．998，P〈0．01；Fn自=69．663，P〈0．01），不同浓度CoCl2作用后各组大鼠RPE细胞中VEGFA蛋白相对表达量均明显不同，差异均有统计学意义（F浓度=17．059，P〈0．01；F分组=91．791，P〈0．01）。100、200和400μmol／LCoCl2作用后Lv—rSlit2-siRNA2组大鼠RPE细胞中VEGFAmRNA表达量及蛋白质量浓度均明显低于空白对照组，差异均有统计学意义（均P〈0．01）。结论大鼠Slit2基因慢病毒干扰载体构建成功并筛选出有效干扰重组序列，其能有效下调大鼠RPE细胞中Slit2基因的表达，并抑制缺氧环境下VEGFA在大鼠RPE细胞中的表达。

关键词：慢病毒转染技术 RNA干扰视网膜色素上皮/基因血管内皮生长因子A/代谢

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ras基因与人类肿瘤

肿瘤防治研究 1989年第3期16卷 186-187,183页

作者：甄珠鄂征邓国仁安捷李廷钧北京市肿瘤研究所

自1982年从人膀胱癌细胞系分离克隆出第一个人癌基因EJ-Ha-ras后,迄今已发现了几十种人癌基因。在这些研究中,ras基因家族几乎占用转染技术发现的人类转化基因的90％。本文拟就ras基因的特性及功能等做一简要介绍。一、ras基因家族 ras... 详细信息

自1982年从人膀胱癌细胞系分离克隆出第一个人癌基因EJ-Ha-ras后,迄今已发现了几十种人癌基因。在这些研究中,ras基因家族几乎占用转染技术发现的人类转化基因的90％。本文拟就ras基因的特性及功能等做一简要介绍。一、ras基因家族 ras基因首先发现于Harvey和Kirsten大鼠肉瘤(ratsarcoma)中。在诱变此两瘤的逆转病毒中,找到了能引起细胞癌变的核苷酸序列。

关键词：膀胱癌细胞系细胞癌变核苷酸序列转染技术大鼠突变易发点细胞恶变膀胧癌转化细胞核酸杂交

血管紧张素转化酶反义cDNA对大鼠心脏成纤维细胞胶原合成的抑制作用

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中国动脉硬化杂志 2003年第6期11卷 512-516页

作者：周法光吴可贵林明王向宇许昌生王华军福建医科大学附属第一医院心内科福建省高血压研究所福建省福州市350005

为研究血管紧张素转化酶反义cDNA对心脏成纤维细胞胶原合成的影响 ,以脂质体为载体 ,用血管紧张素转化酶反义cDNA转染体外培养的自发性高血压大鼠心脏成纤维细胞 ,测定3H 脯氨酸掺入率以评价对心脏成纤维细胞胶原合成的作用。用反转录... 详细信息

为研究血管紧张素转化酶反义cDNA对心脏成纤维细胞胶原合成的影响 ,以脂质体为载体 ,用血管紧张素转化酶反义cDNA转染体外培养的自发性高血压大鼠心脏成纤维细胞 ,测定3H 脯氨酸掺入率以评价对心脏成纤维细胞胶原合成的作用。用反转录聚合酶链反应检测反义基因的表达 ,及其对血管紧张素转化酶基因表达的影响 ,同时检测细胞血管紧张素转化酶活性的变化。血管紧张素转化酶反义cDNA能在心脏成纤维细胞中表达 ,在转染后第 4天达到表达高峰 ,至少持续 1周 ,能减少自发性高血压大鼠心脏成纤维细胞的血管紧张素转化酶mRNA的表达 ,且减少程度与反义cDNA的表达水平呈正相关 ;转染能减少自发性高血压大鼠心脏成纤维细胞的血管紧张素转化酶活性 (14 .2 3± 1.6 2比 2 6 .5 3± 2 .5 0u 10 5个细胞 ,P 0 .0 5 ) ;反义cDNA明显减少自发性高血压大鼠心脏成纤维细胞3H 脯氨酸掺入率 (4 35 5 .7± 75 .9比 6 310 .3± 98.9cpm 10 5个细胞 ,P 0 .0 5 )。以脂质体为载体 ,血管紧张素转化酶反义核酸能抑制自发性高血压大鼠心脏成纤维细胞过高的基础胶原合成活性。

关键词：分子生物学反义cDNA 胶原合成转染技术血管紧张素转化酶脂质体成纤维细胞