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低剂量力达霉素对小鼠P19胚胎癌细胞的生长抑制作用及其机制

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吉林大学学报（医学版） 2012年第2期38卷 249-253,I0003页

作者：李映王畅谭业辉甄红英姚程吉林大学第一医院肿瘤中心吉林长春130021 北京大学基础医学院细胞生物学系北京100191

目的:探讨低剂量力达霉素对小鼠P19胚胎癌细胞生长的影响及其可能的作用机制,为以肿瘤干细胞为靶点的肿瘤治疗提供依据。方法:体外培养P19细胞,实验分非加药组、阿霉素组和力达霉素组。MTT法检测力达霉素处理P19细胞后的剂量曲线和时间... 详细信息

目的:探讨低剂量力达霉素对小鼠P19胚胎癌细胞生长的影响及其可能的作用机制,为以肿瘤干细胞为靶点的肿瘤治疗提供依据。方法:体外培养P19细胞,实验分非加药组、阿霉素组和力达霉素组。MTT法检测力达霉素处理P19细胞后的剂量曲线和时间曲线。流式细胞术进一步确定力达霉素和阿霉素处理过的P19细胞的非凋亡剂量,并检测其细胞周期改变。Rea-l time PCR、Western blotting和免疫荧光化学技术检测力达霉素和阿霉素处理过的P19细胞中转录因子oct4 mRNA和蛋白质的表达水平。结果:MTT法分析结果显示,力达霉素和阿霉素分别处理P19细胞后的半数有效抑制浓度(IC50)为1×10-11mol·L-1和0.5×10-6mol·L-1,从0.001 nmol·L-1到0.1 nmol·L-1浓度范围内的力达霉素处理细胞120 h后,仍可有效抑制小鼠P19胚胎癌细胞生长。流式细胞术分析表明,非凋亡剂量0.01 nmol·L-1力达霉素阻滞P19细胞生长发生在G1期,而0.5μmol·L-1阿霉素阻滞P19细胞生长则发生在G2期。Rea-l time PCR、Western blotting和免疫荧光化学实验均揭示低剂量力达霉素下调P19细胞中的oct4表达,而阿霉素无此作用。结论:低剂量力达霉素抑制P19细胞生长可能与其下调了胚胎干细胞基因oct4有关。

关键词：力达霉素 P19胚胎癌细胞转录因子oct4

盐霉素对人肺腺癌A549细胞株生物学特性的影响

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中华实验外科杂志 2013年第8期30卷 1592-1594页

作者：石俊杰王哲李阳张翼翔刘晶顾春东大连医科大学附属第一医院胸外科肺癌诊疗基地 116011 中英再生医学中心

目的观察盐霉素对人肺腺癌A549细胞株生物学特性的影响。方法无血清培养A549干细胞，进行划痕、Transwell和细胞计数实验，运用流式细胞仪检测细胞侧群比例，采用Westernblot检测盐霉素对转录因子oct4表达的影响。结果空白对照组、30mg... 详细信息

目的观察盐霉素对人肺腺癌A549细胞株生物学特性的影响。方法无血清培养A549干细胞，进行划痕、Transwell和细胞计数实验，运用流式细胞仪检测细胞侧群比例，采用Westernblot检测盐霉素对转录因子oct4表达的影响。结果空白对照组、30mg／L、60mg／L盐霉素组迁移距离分别为70、40、10um，侵袭细胞数目分别为（32．3±2．5）、（21．4±1．8）、（1．3±0．3）个／HP，细胞存活率分别为98％、74％、50％；60mg／L组、30mg／L组、空白对照组、利血平阻断组侧群比例分别为3．4％、10．5％、12．5％、0．7％。Westernblot示随着盐霉索浓度增加，oct4的表达量下降。结论盐霉素对人肺腺癌细胞株A549生物学特性具有重要影响。

关键词：肺腺癌盐霉素干细胞转录因子oct4

在细胞重编程过程中阶段特异性基因簇的预测研究

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在细胞重编程过程中阶段特异性基因簇的预测研究

作者：塔娜内蒙古大学

学位级别：硕士

细胞重编程是在特定诱导条件下,将分化的成熟体细胞重编程为多能性甚至全能性细胞的过程。了解细胞重编程过程中不同阶段基因表达的特异性变化,对于阐明诱导性多能干细胞(induced pluripotent stem cells,iPSCs)的重编程机制、提高其诱... 详细信息

细胞重编程是在特定诱导条件下,将分化的成熟体细胞重编程为多能性甚至全能性细胞的过程。了解细胞重编程过程中不同阶段基因表达的特异性变化,对于阐明诱导性多能干细胞(induced pluripotent stem cells,iPSCs)的重编程机制、提高其诱导效率具有重要作用。目前的生物实验已通过对多能性转录因子的筛选、组合及过表达,成功将成熟体细胞诱导分化为iPSCs。但是,现有研究未见从转录因子的结合峰及组蛋白修饰等其它因素的角度筛选阶段特异性基因簇的研究。因此,本文基于转录因子的结合峰及结合组蛋白修饰等其他因素建立理论预测模型对重编程阶段特异性基因簇进行预测。本文的研究内容共包括三部分:(1)基于转录因子(transcription factor,TF)结合谱特征的阶段特异性基因簇的预测。(2)基于组蛋白修饰(histone modification,HMs)特征的阶段特异性基因簇的预测。(3)基于TF结合联合HMs特征的阶段特异性基因簇的预测。本文的ChIP-seq数据和微阵列转录组数据均来自Gene Expression Omnibus(GEO)数据库,登录号分别为GSE67520和GSE67462。ChIP-seq数据包含小鼠成纤维细胞(MEF)进入iPSCs的9个重编程时间点。首先通过基因差异表达分析确定了阶段特异性基因簇。然后统计了TF oct4、三种HMs(H3k4me3,H3k27me3,H3k27ac)及RNA聚合酶(RNApol)在这些阶段特异性基因簇的启动子,增强子及增强子细分区域上的结合峰peak个数。本文分别建立了关于TF oct4、HMs及oct4联合HMs与阶段性特异性基因簇之间的理论预测模型。最后,利用评价指标精准率(Precision)、召回率(Recall)和F1值(F1-score)、接受者操作特征曲线下的面积(Roc area)和准确率(accuracy)对分类器的性能进行了评价。我们的结果表明利用多组学Chip-seq数据结合机器学习技术可以有效提高细胞重编程过程中阶段特异性基因簇的预测。

关键词：细胞重编程 GEO 转录因子oct4 组蛋白修饰机器学习深度学习

oct4基因转染对人牙髓细胞增殖和多向分化能力的影响

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Oct4基因转染对人牙髓细胞增殖和多向分化能力的影响

oct4基因转染对人牙髓细胞增殖和多向分化能力的影响

全国第八次牙体牙髓病学学术会议

作者：韦曦张芳刘路周晓燕中山大学光华口腔医学院附属口腔医院牙体牙髓病科

目的:检测转录因子oct4转染人牙髓细胞(dental pulp cells,DPCs)对其增殖和多向分化能力的影响。方法:采用Admax包装系统构建携带目的基因oct4和增强型绿色荧光蛋白(EGFP)报告基因的腺病毒载体,以最适MOI转染DPCs,培养1、2、3、5、7、1... 详细信息

目的:检测转录因子oct4转染人牙髓细胞(dental pulp cells,DPCs)对其增殖和多向分化能力的影响。方法:采用Admax包装系统构建携带目的基因oct4和增强型绿色荧光蛋白(EGFP)报告基因的腺病毒载体,以最适MOI转染DPCs,培养1、2、3、5、7、1 4d后,CCK-8法检测细胞增殖情况;转染DPCs48h后,分别于成牙本质、成脂诱导液中培养21d,采用茜素红、油红O染色,以及实时荧光定量RT-PCR检测各组间成牙本质、成脂分化能力的改变,以Ad5-EGFP和未加病毒组作为对照。结果:利用Admax包装系统成功构建并获得高滴度重组腺病毒载体,CCK8结果显示Ad5-oct4-EGFP转染组2d起OD值高于对照组,7、1 4d与对照组相比有统计学差异(poct4.-EGFP组与对照组相比,矿化结节数量多且体积大,实时荧光定量RT-PCR结果显示,牙本质涎磷蛋白(De ntin sialophosphoprotein,DSPP)、骨涎蛋白(bone sialoprotein,BSP)和Ⅰ型胶原mRNA水平高于对照组(poct4-EGFP组细胞浆内出现较多红色脂滴,LPL和PPARγ2 mRNA水平较对照组显著上调(P转录因子oct4可通过改善DPCs的增殖和多向分化能力,提高细胞的干性。

关键词：牙髓细胞转录因子oct4 增殖分化

来源： cnki会议评论

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中华口腔医学研究杂志（电子版） 2013年第3期7卷 4-8页

作者：张芳刘路韦曦中山大学光华口腔医学院·附属口腔医院广东省口腔医学重点实验室广州510055

目的研究腺病毒介导的转录因子oct4转染人牙髓细胞(DPCs)对其增殖和多向分化能力的影响。方法以Admax包装系统构建携带目的基因oct4和增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的腺病毒载体Ad5-oct4-EGFP,筛选最佳感染复数(MOI)转染DPCs,检测其增殖及... 详细信息

目的研究腺病毒介导的转录因子oct4转染人牙髓细胞(DPCs)对其增殖和多向分化能力的影响。方法以Admax包装系统构建携带目的基因oct4和增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的腺病毒载体Ad5-oct4-EGFP,筛选最佳感染复数(MOI)转染DPCs,检测其增殖及成牙本质、成脂分化能力的改变。结果采用Admax包装系统成功构建并获得高滴度的腺病毒载体,筛选最适MOI=200,CCK-8检测结果显示,Ad5-oct4-EGFP组2d起吸光度(A)值高于对照组,7、14d与对照组相比差异有统计学意义(Poct4-EGFP组与对照组相比,矿化结节数量多且体积最大,实时荧光定量反转录聚合酶链反应(RT-PCR)结果显示,DSPP、BSP和CollagenⅠmRNA的表达量高于对照组(Poct4-EGFP组细胞浆内出现较多脂滴,脂肪特异性标志LPL和PPARγ2mRNA水平较对照组显著上调(P0.05)。结论转录因子oct4可促进DPCs增殖和多向分化能力,改善DPCs的干性。

关键词：牙髓细胞转录因子oct4 增殖多向分化