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作者：孙钦升沈阳药科大学

学位级别：硕士

转录因子Pokemon是一个重要的原癌基因,在胚胎发育、分化和癌症的发生过程中发挥重要作用。Survivin是凋亡蛋白抑制因子家族的重要成员,与肿瘤的发生、转移、耐药性产生以及癌症患者的存活期密切相关。本研究通过OATFA分析发现并进一步... 详细信息

转录因子Pokemon是一个重要的原癌基因,在胚胎发育、分化和癌症的发生过程中发挥重要作用。Survivin是凋亡蛋白抑制因子家族的重要成员,与肿瘤的发生、转移、耐药性产生以及癌症患者的存活期密切相关。本研究通过OATFA分析发现并进一步鉴定了其与抑癌基因AP-2α间存在相互作用。转录因子Pokemon和AP-2α的相互作用影响survivin的表达,通过进一步研究,发现AP-2α是通过直接结合于survivin的启动子上游来调控survivin的表达。在mRNA水平上,survivin的表达受AP-2α的抑制,这种抑制伴随细胞药物敏感性的增加。这些发现完善了survivn表达调控的信号通路,并对肿瘤发生和治疗的研究有重要意义。

关键词： Pokemon AP-2α survivin 转录因子相互作用

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Pu.1和cMyb在斑马鱼中性粒细胞发育中的相互作用

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遗传 2024年第4期46卷 319-332页

作者：洪佳馨徐颂恩张文清刘伟华南理工大学医学院发育生物学与再生医学团队广州510006

中性粒细胞发生是一个高度有序且被精密调控的过程,造血相关转录因子在其中起着关键作用。造血相关转录因子通过与其辅因子相互作用或转录因子之间相互作用形成复杂的调控网络,调控网络的异常可导致白血病的发生。目前参与该过程的转录... 详细信息

中性粒细胞发生是一个高度有序且被精密调控的过程,造血相关转录因子在其中起着关键作用。造血相关转录因子通过与其辅因子相互作用或转录因子之间相互作用形成复杂的调控网络,调控网络的异常可导致白血病的发生。目前参与该过程的转录因子有几十种,它们的结构与功能被广泛研究,但对转录因子之间调控关系的研究则相对缺乏。人PU.1和cMYB参与中性粒细胞发生的多个阶段且它们的异常通常与血液疾病相关,但目前对于在体情况下两者之间是否存在调控关系以及如何相互作用尚不明确。本研究利用cMyb过表达(cmybhyper)和Pu.1缺陷(pu.1^(G242D/G242D))的斑马鱼模型,通过整体原位杂交、qRT-PCR、荧光报告系统以及拯救实验检测中性粒细胞发育过程中Pu.1和cMyb的相互作用关系。结果显示,在pu.1^(G242D/G242D)突变体中,中性粒细胞的cmyb表达量显著升高,而在cmybhyper中,中性粒细胞的pu.1表达量则无明显变化。进一步在pu.1^(G242D/G242D)突变体中注射MO(morpholino)来降低cmyb的表达,并使用SB以及BrdU染色检测中性粒细胞的数量和增殖情况,发现cmyb的敲低可以拯救突变体中中性粒细胞异常增生的表型。这些结果表明,在中性粒细胞发育过程中Pu.1可以负调控cMyb的表达量。最后,本研究通过构建多位点突变质粒和荧光报告系统,证实了Pu.1能够直接结合在cmyb启动子+72 bp位点,从而负调控其表达。综上所述,本研究明确了Pu.1可以通过调控cmyb的表达参与中性粒细胞的发育,为理解两者之间调控关系及其在疾病中的作用提供了新的线索。

关键词： Pu.1 cMyb 转录因子相互作用斑马鱼中性粒细胞

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PDGF-BB诱导KLF5和hhLIM协同激活血管平滑肌的增殖相关基因表达

PDGF-BB诱导KLF5和hhLIM协同激活血管平滑肌的增殖相关基因表达

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作者：史慧静河北医科大学

学位级别：硕士

目的:血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cell, VSMC)增殖是高血压、动脉粥样硬化和血管再狭窄等血管重塑性疾病的共同细胞病理学基础。很多生长因子与细胞因子都会引起VSMC的增殖,其中血小板衍生因子BB(PDGF-BB)具有强效的促进VSM... 详细信息

目的:血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cell, VSMC)增殖是高血压、动脉粥样硬化和血管再狭窄等血管重塑性疾病的共同细胞病理学基础。很多生长因子与细胞因子都会引起VSMC的增殖,其中血小板衍生因子BB(PDGF-BB)具有强效的促进VSMC增殖的活性。Krüpple样因子5(krüpple-like factor,IKLF/KLF5)是KLF家族中与胚胎发育、细胞增殖和肿瘤发生密切相关的转录调节因子。我们在前期研究中发现,在血管新生内膜的VSMC中,KLF5的表达明显增加,后者参与反式激活PDGF-A基因的转录调节。作为转录因子,KLF5能够和许多转录因子、辅转录因子发生相互作用,如RARα、c-jun、CBP, PPAR-δ、HDAC2、p300等相互作用,共同调节基因的转录。hhLIM是LIM家族的成员之一,具有典型的LIM结构域。LIM结构域含两个锌指结构,提供蛋白结合界面从而调节蛋白与蛋白的相互作用。目前的研究发现,hhLIM作为辅激活因子,可以通过与其他转录因子相互作用的方式调节基因转录。然而,KLF5与hhLIM是否相互作用以及调节细胞增殖的具体分子机制尚不明确。为了阐明KLF5和hhLIM在PDGF-BB调节VSMC增殖中的作用,本文在系统观察PDGF-BB对VSMC增殖活性影响的基础上,进一步探讨了KLF5和hhLIM在介导PDGF-BB促增殖中的作用和分子机制。旨在为揭示动脉粥样硬化、高血压和血管再狭窄等心血管疾病的发病机制提供新的实验和理论依据,为心血管疾病的防治提供特异性药物靶点。方法:流式细胞光度术分析细胞周期各时相的分布情况;Western blot分析检测KLF5、hhLIM和Cyclin E达变化;免疫共沉淀检查KLF5与hhLIM之间的相互作用;报告基因分析检测KLF5和hhLIM对CyclinE因表达的影响;免疫组织化学观察整体水平KLF5、hhLIM和Cyclin E达变化。结果:1 PDGF-BB促进VSMC细胞周期的进程流式细胞术分析结果显示,与对照组相比,0 ng、5 ng、10 ng、20 ng的PDGF-BB于作用VSMC后,G1期细胞数量减少,S期细胞数量增加,表明VSMC在PDGF-BB作用下增殖活性明显升高。细胞计数的结果也显示,PDGF-BB可以显著促进VSMC的增殖。上述结果提示,PDGF-BB可加快VSMC细胞周期进程,促进VSMC增殖。2 PDGF-BB促进hhLIM的表达用不同浓度的PDGF-BB刺激细胞24 h后,提取细胞总蛋白进行Western blot分析。Western blot结果显示,hhLIM的表达量呈剂量依赖性的增加,而KLF5的表达量没有明显的变化。提示,PDGF-BB能诱导hhLIM表达,不影响KLF5表达。3 PDGF-BB促进KLF5与hhLIM的相互作用提取被PDGF-BB刺激前后的VSMC总蛋白,进行免疫共沉淀。结果显示,在PDGF-BB刺激前后的VSMC中,KLF5和hhLIM均可被共沉淀,提示KLF5与hhLIM之间存在相互作用。PDGF-BB刺激后,免疫沉淀物中的KLF5和hhLIM均明显增多,说明PDGF-BB促进二者之间的相互作用。4 KLF5与hhLIM协同促进球囊损伤诱导的血管内膜增生为探讨KLF5和hhLIM在血管重塑中所发挥的作用,我们用腺病毒转染的方法使球囊损伤的大鼠颈总动脉过表达KLF5和hhLIM。HE染色结果,球囊损伤14天后,模型组和hhLIM过表达组内膜呈弥散性增厚,管腔缩小,内膜/中膜(I/M)比值分别为(3.33±0.26)和(3±0.26),两组之间无明显差异。而KLF5组(I/M比值4.12±0.23)与共转染KLF5与hhLIM组(I/M比值6.40±0.23)显著大于模型组和hhLIM过表达组(P作用促进VSMC增殖。免疫组化结果显示,正常血管内膜仅有少量PCNA表达。球囊损伤14天时,PCNA阳性染色的细胞及单细胞染色强度均较正常组显著增高。KLF5组(56±3.6%)尤其是共转染KLF5和hhLIM组(70±2.3%)PCNA阳性染色细胞数量显著高于model组(26±3.7%)和hhLIM组(33±1.7%)。上述结果提示,hhLIM协同KLF5促进球囊损伤诱导的血管内膜增生。5 KLF5和hhLIM协同促进血管平滑肌细胞增殖和细胞周期的进程细胞计数分析结果显示,过表达KLF5血管平滑肌的细胞数明显高于过表达hhLIM和pAd组,说明KLF5可以促进VSMC增殖。同时过

关键词： PDGF-BB KLF5 hhLIM Cyclin E 基因表达转录因子相互作用血管平滑肌细胞

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