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EGF转基因鼠研究的展望

生物化学与生物物理学报 2001年第5期33卷 473-476页

作者：黄颍泉董铭麦经纶陈小圆东京大学医学部研究生院解剖和细胞生物学系!东京01130033 日本香港大学Queen Mary医院儿科系!香港中国

通过基因工程这一有力的工具 ,改变了信号转导级联反应中从配体本身开始 ,通过特异受体到达下游的单个或一组基因 ,来研究信号转导的特殊性、互补性及重复性 ,已得到了大量关于肿瘤基因和生长因子的信息。转基因鼠和含有改变基因的鼠系... 详细信息

通过基因工程这一有力的工具 ,改变了信号转导级联反应中从配体本身开始 ,通过特异受体到达下游的单个或一组基因 ,来研究信号转导的特殊性、互补性及重复性 ,已得到了大量关于肿瘤基因和生长因子的信息。转基因鼠和含有改变基因的鼠系被广泛应用于有关上皮生长因子受体 (EGFR)及其配体 ,胰岛素样生长因子(IGF)受体及其结合蛋白的研究。综述了近年来EGF和IGF I/胰岛素样生长因子结合蛋白 (IGFBP)转基因鼠模型的主要进展 ,同时基于现有的转基因模型 ,概述了活体中EGF和IGFBP的最新研究成果 ,重点在于通过各种转基因及基因剔除模型的使用 ,研究EGF和IGF在生殖、生长和发育中的调节作用

关键词：上皮生长因子受体胰岛素样生长因子结合蛋白胰岛素样生长因子转基因鼠过量表达

针对乙肝病毒前C/C双靶区反义锁核酸在转基因鼠体内抗病毒效果

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生物医学工程学杂志 2013年第4期30卷 828-832,837页

作者：邓益斌农乐根韦叶生右江民族医学院附属医院医学检验中心百色533000 暨南大学第一临床医学院临检中心广州510630

为探讨针对前C/C双靶区反义锁核酸(LNA)对转基因小鼠体内乙肝病毒复制的影响,本文采用完全随机设计分组,经尾静脉给药,实验组注射脂质体包裹的反义LNA片段,对照组分别注射5%葡萄糖液和空脂质体,采用荧光定量聚合酶链反应(PCR)技术、时... 详细信息

为探讨针对前C/C双靶区反义锁核酸(LNA)对转基因小鼠体内乙肝病毒复制的影响,本文采用完全随机设计分组,经尾静脉给药,实验组注射脂质体包裹的反义LNA片段,对照组分别注射5%葡萄糖液和空脂质体,采用荧光定量聚合酶链反应(PCR)技术、时间分辨免疫荧光技术、自动生化分析仪等分别检测血清乙肝病毒核酸、乙肝病毒表面抗原、清蛋白、谷丙转氨酶、尿素氮和肌酐等指标浓度;采用免疫组化法检测肝细胞内乙肝病毒核心抗原分布。结果表明,针对前C/C双靶区的反义LNA对乙肝病毒核酸复制、乙肝病毒表面抗原及核心抗原合成均有较强的抑制作用,且抑制效果明显高于单靶区。

关键词：锁核酸乙型肝炎病毒转基因鼠基因治疗

成年肌萎缩脊髓侧索硬化症转基因鼠脊髓细胞增殖的研究

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解剖学报 2008年第2期39卷 160-164页

作者：管英俊于丽岳炳德高海玲陈燕春张皓云潍坊医学院组织学与胚胎学教研室潍坊261042

目的观察成年肌萎缩脊髓侧索硬化症(ALS)转基因模型鼠脊髓内源性细胞的增殖和存活情况。方法对ALS转基因鼠进行BrdU注射,分别于不同时间点取材,冷冻切片,应用免疫荧光染色技术检测脊髓内细胞的增殖、分布和存活情况。结果成年ALS鼠脊髓... 详细信息

目的观察成年肌萎缩脊髓侧索硬化症(ALS)转基因模型鼠脊髓内源性细胞的增殖和存活情况。方法对ALS转基因鼠进行BrdU注射,分别于不同时间点取材,冷冻切片,应用免疫荧光染色技术检测脊髓内细胞的增殖、分布和存活情况。结果成年ALS鼠脊髓的中央管、灰质、白质均可检测到BrdU阳性细胞,经常可检测到形状相似、成对出现的细胞。在灰质内,BrdU阳性细胞主要分布于脊髓前角。在白质内,BrdU阳性细胞散在分布。前角ALS鼠脊髓内BrdU阳性细胞数量较野生型鼠多。BrdU末次注射后1d、14d均可检测到BrdU阳性细胞,但细胞数量逐渐减少,28d ALS鼠脊髓内仍可检测到少量BrdU阳性细胞,主要分布于中央管部位。增殖细胞核抗原(PCNA)阳性细胞的分布和变化规律与BrdU阳性细胞一致。在95d龄ALS鼠(BrdU末次注射1d后),脊髓中Nestin阳性细胞较野生型鼠多,多数Nestin阳性细胞分布于脊髓前角,某些细胞呈BrdU/Nestin双标阳性。在BrdU注射后14d、28d脊髓中,未检测到BrdU/Nestin双标阳性细胞。结论神经退行性病变可激活ALS转基因鼠脊髓的细胞增殖,且细胞存活可达28d。

关键词：肌萎缩脊髓侧索硬化症脊髓细胞增殖 BrdU标记免疫荧光染色转基因鼠

成年肌萎缩脊髓侧索硬化症转基因鼠脊髓增殖细胞的分化

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解剖学报 2009年第5期40卷 715-719页

作者：于丽管英俊高海玲陈燕春赵春艳杜红梅张皓云岳炳德潍坊医学院组织学与胚胎学教研室潍坊261053

目的探讨成年肌萎缩脊髓侧索硬化症(ALS)转基因模型鼠脊髓内增殖细胞的类型及分化情况。方法对ALS转基因鼠发病期进行BrdU标记,分别于不同时间点取材,冷冻切片,应用免疫荧光双标及三标染色技术检测ALS转基因鼠病变进展过程中脊髓内增殖... 详细信息

目的探讨成年肌萎缩脊髓侧索硬化症(ALS)转基因模型鼠脊髓内增殖细胞的类型及分化情况。方法对ALS转基因鼠发病期进行BrdU标记,分别于不同时间点取材,冷冻切片,应用免疫荧光双标及三标染色技术检测ALS转基因鼠病变进展过程中脊髓内增殖细胞的分化情况。结果成年ALS转基因鼠发病期脊髓的中央管、灰质、白质均未检测到BrdU/DCX双标记阳性细胞和BrdU/NeuN双标记阳性细胞。灰质、白质和中央管周围检测到大量NG2阳性细胞,阳性细胞数量随病变进展逐渐减少,NG2阳性细胞多呈BrdU阳性表达;可检测到少量BrdU/A2B5双标记阳性细胞;ALS转基因鼠发病期脊髓BrdU/GFAP双标记阳性细胞较多,部分双阳性细胞呈Nestin阳性,而野生型鼠脊髓内未检测到BrdU/GFAP双标记阳性细胞。结论神经退行性病变激活ALS转基因鼠脊髓内源性增殖细胞向神经胶质细胞方向分化,未检测到向神经元方向分化,内源性增殖细胞尚不能有效地促进退行性病变的修复。

关键词：肌萎缩脊髓侧索硬化症脊髓分化免疫荧光转基因鼠

IL-2 preS DNA疫苗免疫正常小鼠和HBV转基因鼠的免疫应答研究

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中华微生物学和免疫学杂志 2004年第11期24卷 914-918页

作者：沈肖方李建远王海燕王学波靳绍华刘芙君刘运祥山东省干细胞工程技术研究中心

目的　探讨IL 2preSDNA疫苗作为预防和治疗性疫苗的可行性及作用机理。方法应用基因重组技术 ,构建人白细胞介素 2 (hIL 2 )和前表面抗原 (preS)的真核表达载体 ,将此重组载体用基因枪分别注射正常的BALB c小鼠和HBV转基因小鼠 ,通过EL... 详细信息

目的　探讨IL 2preSDNA疫苗作为预防和治疗性疫苗的可行性及作用机理。方法应用基因重组技术 ,构建人白细胞介素 2 (hIL 2 )和前表面抗原 (preS)的真核表达载体 ,将此重组载体用基因枪分别注射正常的BALB c小鼠和HBV转基因小鼠 ,通过ELISA方法检测BALB c小鼠和HBV转基因鼠的抗 preS2、HBsAg及抗 HBs抗体水平 ;荧光定量PCR方法检测HBV转基因鼠血清中HBVDNA拷贝数 ,并用免疫病理HE染色观察小鼠肝组织炎症活动度 ,同时检测肝功能指标。结果　①基因枪注射真核表达质粒免疫正常小鼠后 ,10 0 %小鼠能在第 4、6周检测到抗preS1抗体 ,持续时间长达10周。②用IL 2preS真核表达质粒基因枪肌肉注射方式优于正常肌肉注射和皮下注射的方式 ,且所需质粒量 (10 μg 只 )仅为后者 (10 0 μg 只 )的 1 10。③在第 4周高峰期检测IgG亚类 ,是诱导以TH1(IgG2a)细胞免疫为主的反应。④基因枪注射真核表达质粒 (1μg 只 )免疫转基因小鼠后 ,80 %的小鼠产生了抗体 ,HBVDNA量下降 ,其中 2 0 %的小鼠HBsAg转阴。⑤HE肝组织染色显示 :肝组织有明显的炎细胞浸润、肝细胞肿大、颗粒样变性、转氨酶升高。结论　IL 2preSDNA疫苗能刺激小鼠机体产生体液和细胞免疫 ,可部分打破小鼠机体的免疫耐受。

关键词：正常小鼠 HBV IL-2 DNA疫苗注射转基因鼠正常基因枪真核表达质粒 BALB/c小鼠

分泌型卷曲相关蛋白4在肌萎缩脊髓侧索硬化症转基因鼠脊髓中的表达变化

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解剖学报 2012年第4期43卷 439-444页

作者：王珊珊陈燕春管英俊李晓琎于丽潍坊医学院组织学与胚胎学教研室山东潍坊261053

目的探讨分泌型卷曲相关蛋白4(sFRP4)在成年肌萎缩脊髓侧索硬化症(ALS)转基因模型鼠脊髓内的表达变化,及sFRP4在ALS发病中的作用。方法选取ALS转基因鼠和同窝野生型鼠各30只,分别于鼠95d、108d和122d取材,部分鼠经4%多聚甲醛心脏灌注固... 详细信息

目的探讨分泌型卷曲相关蛋白4(sFRP4)在成年肌萎缩脊髓侧索硬化症(ALS)转基因模型鼠脊髓内的表达变化,及sFRP4在ALS发病中的作用。方法选取ALS转基因鼠和同窝野生型鼠各30只,分别于鼠95d、108d和122d取材,部分鼠经4%多聚甲醛心脏灌注固定,分离脊髓和制备冷冻切片,部分鼠分离脊髓,提取RNA和蛋白。分别应用免疫组织化学染色技术、RT-PCR和Western blotting检测sFRP4 mRNA和蛋白水平在不同时间点的变化情况。结果与同窝野生型鼠比较,ALS转基因鼠sFRP4 mRNA和蛋白表达在95d、108d和122d均升高(P鼠比较,ALS转基因鼠sFRP4阳性细胞明显增多。免疫荧光双标结果显示,sFRP4标记的阳性细胞共表达胶质纤维酸性蛋白和β-tubulinⅢ,ALS转基因鼠sFRP4/GFAP双阳性细胞增多。结论在ALS转基因鼠发病脊髓中sFRP4阳性细胞明显增多,sFRP4 mRNA和蛋白表达升高,表明sFRP4与肌萎缩脊髓侧索硬化症的发生密切相关。

关键词：肌萎缩脊髓侧索硬化症 sFRP4 Wnt信号通路免疫组织化学反转录.聚合酶链式反应免疫印迹法转基因鼠

转基因鼠载脂蛋白E基因表达异常对学习和记忆能力的影响

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中华精神科杂志 2000年第2期33卷 118-120页

作者：廖峥嵘李英敏琦祖和孙明增杨迪恽军惕河北医科大学基础医学院生物教研室石家庄050017 河北医科大学基础医学院病理教研室石家庄050017 中国医学科学院基础所生化室中国医学科学院基础所生理室

目的　探讨载脂蛋白E(apoE)基因与神经系统记忆功能之间的关系。方法　以单克隆抗体酶联免疫吸附测定法分别测定apoE4 、apoE7转基因鼠及对照组鼠 (每组各 12只 )的血清apoE含量。通过主动回避反应 (跳台 )试验对apoE4 、apoE7转基因鼠... 详细信息

目的　探讨载脂蛋白E(apoE)基因与神经系统记忆功能之间的关系。方法　以单克隆抗体酶联免疫吸附测定法分别测定apoE4 、apoE7转基因鼠及对照组鼠 (每组各 12只 )的血清apoE含量。通过主动回避反应 (跳台 )试验对apoE4 、apoE7转基因鼠及对照组鼠的神经系统记忆功能进行检测。结果　人apoE基因不仅能在F1代仔鼠体内表达 ,且血清apoE含量 [apoE4 鼠 (1 72± 0 34 )mg/L ,apoE7鼠 (1 5 3± 0 2 4)mg/L]与对照组鼠 [(0 76± 0 0 7)mg/L]的差异均有显著性 (P 转基因鼠在学习 [(2 1± 2 1)min]和短期记忆 [(1 2± 1 2 )min]方面所表现出的受电击时间总和均长于对照组鼠 [(0 4± 0 3)min ,(0 1± 0 1)min],P 转基因鼠则只表现为短期记忆方面的错误次数 (2 2± 2 1)高于对照组鼠 (0 8± 1 6 ) ,P 基因的异常表达影响转基因鼠的大脑功能。

关键词：学习能力记忆能力转基因鼠载脂蛋白E

组织纤溶酶原激活剂突变体乳腺表达载体构建及在转基因鼠中表达的研究

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生物工程学报 1999年第2期15卷 166-170页

作者：卢一凡邓继先程萱周江黄培堂军事医学科学院生物工程研究所

通过ＰＣＲ方法从羊肝总ＤＮＡ中获得了羊β乳球蛋白（ＢＬＧ）基因第一和第二内含子，以羊β乳球蛋白基因（ＢＬＧ）５′区５ｋｂ为调控序列，构建了乳腺表达组织纤溶酶原激活剂突变体（ＬａｔＰＡ）载体。对５４０枚小鼠受精卵... 详细信息

通过ＰＣＲ方法从羊肝总ＤＮＡ中获得了羊β乳球蛋白（ＢＬＧ）基因第一和第二内含子，以羊β乳球蛋白基因（ＢＬＧ）５′区５ｋｂ为调控序列，构建了乳腺表达组织纤溶酶原激活剂突变体（ＬａｔＰＡ）载体。对５４０枚小鼠受精卵进行显微注射，经ＰＣＲ和Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ检测，获得６只整合有人ＬａｔＰＡ的转基因小鼠，整合率为３２％。同时研究了转基因在小鼠体内的表达。Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ分析表明，在一些转基因鼠乳腺中表达出ＬａｔＰＡ。在基因鼠乳汁中检测出ＬａｔＰＡ的表达达６μｇ／ｍＬ。这为未来利用转基因动物生产ＬａｔＰＡ提供依据。

关键词： La-tPA 内含子乳腺转基因鼠载体构建

人工合成免疫刺激DNA联合HBsAg DNA疫苗在HBV转基因鼠的免疫应答研究

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中国免疫学杂志 2003年第3期19卷 149-153页

作者：邓涛范公忍胡学玲陈佩兰陈乃玲胡大荣贾克明北京解放军肝病研究所北京100700

目的 :探讨免疫刺激DNA序列联合基因免疫在HBV转基因鼠的免疫应答。方法 :用人工合成硫代修饰的免疫刺激DNA寡核苷酸 (CpGODN)与HBVS区基因真核表达载体 (V HBs)联合免疫HBsAg转基因鼠 ,通过ELISA观察小鼠血清HBsAg及抗 HBs抗体水平 ,... 详细信息

目的 :探讨免疫刺激DNA序列联合基因免疫在HBV转基因鼠的免疫应答。方法 :用人工合成硫代修饰的免疫刺激DNA寡核苷酸 (CpGODN)与HBVS区基因真核表达载体 (V HBs)联合免疫HBsAg转基因鼠 ,通过ELISA观察小鼠血清HBsAg及抗 HBs抗体水平 ,并用免疫组化 (SP法 )及病理HE染色观察小鼠肝组织HBsAg表达量的改变及肝组织炎症活动度。结果 :V HBs联合CpGODN组 6只免疫鼠中有 2只血清抗 HBs抗体阳性 ,其平均效价为 (5 6 2 1± 15 16 )mU ml,血清HBsAg浓度在免疫后第 8周时有 2只转阴 ,而单用V HBs组及V 10 12对照组小鼠血清抗 HBs抗体均阴性、HBsAg含量无明显降低。V HBs +CpGODN组肝组织HBsAg的表达量低于V HBs组及对照组 ,并可见大量炎细胞浸润 ,炎症组织活动度积分明显高于V HBs组及对照组。结论 :CpGODN联合V HBs可增强其免疫应答及抗病毒效应。

关键词：乙肝病毒基因免疫免疫刺激DNA序列转基因鼠