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补肾法、疏肝法对排卵障碍模型大鼠卵巢细胞因子影响的比较研究

补肾法、疏肝法对排卵障碍模型大鼠卵巢细胞因子影响的比较研究

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作者：路帅河北医科大学

学位级别：硕士

目的:探讨补肾调经方、逍遥丸治疗排卵障碍性疾病的作用机理,通过雷公藤、雄激素致排卵障碍模型大鼠卵巢细胞因子的变化研究排卵障碍的发生与细胞因子的关系,比较补肾调经方与逍遥丸对细胞因子在卵巢中表达的影响,为补肾调经方与逍遥丸... 详细信息

目的:探讨补肾调经方、逍遥丸治疗排卵障碍性疾病的作用机理,通过雷公藤、雄激素致排卵障碍模型大鼠卵巢细胞因子的变化研究排卵障碍的发生与细胞因子的关系,比较补肾调经方与逍遥丸对细胞因子在卵巢中表达的影响,为补肾调经方与逍遥丸中药促使卵泡发育及排卵的临床应用提供实验依据,从而促进中医妇科治疗学的发展。方法:选用3月龄健康雌性Wistar大鼠204只,体重180～250g。随机取170只大鼠改进郑家润,梁文波等方法。雷公藤多甙片35mg/kg/d(给药剂量为临床成人用量的20倍),灌胃法给药,连续57天。造模组连续阴道上皮细胞涂片两个性周期(一个性周期4～5天),动情周期转为不规则,主要为周期不完整及周期延长,提示雷公藤致排卵障碍大鼠模型造模成功。其余34只灌胃给蒸馏水作为正常对照组。选用同批出生9日龄健康雌性SD大鼠204只,体重约15g。随机取170只大鼠参照俞瑾等方法,于颈背部皮下一次性注射丙酸睾丸酮1.25mg/只(0.05ml/只)造模。第22日龄断奶,自由进食,同样条件饲养。第70日龄阴道开口,造模组大鼠连续阴道上皮细胞涂片两个性周期,阴道上皮细胞持续角化,提示雄激素致排卵障碍大鼠模型造模成功。其余34只于颈背部皮下一次性注射中性茶油0.05ml/只作为正常对照组。将雷公藤、雄激素致排卵障碍成模大鼠分别随机分为模型组和治疗组,治疗组包括:补肾调经方高剂量组、补肾调经方低剂量组、逍遥丸高剂量组、逍遥丸低剂量组,每组34只;治疗组分别灌服补肾调经方与逍遥丸,模型组和正常组灌服蒸馏水,每日1次。灌胃给药5周,并阴道细胞涂片两个性周期。最后一次给药后禁食8小时,各组分别选择动情前期与动情后期断头处死,无菌操作剖腹取出左侧卵巢组织,吸去血迹,称重后置于4%多聚甲醛溶液中固定,常规石蜡包埋,5μm厚连续切片,进行免疫组织化学染色,观察卵巢形态学变化和组织白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、转化生长因子-β1(TGF-β1)、转化生长因子-β1受体(TGF-βr1)的蛋白表达。速取右侧卵巢组织置于DEPC水处理的冻存管中放于液氮冻存,采用实时荧光定量PCr法检测IL-1β、TNF-α、TGF-β1、TGF-βr1 mrNA的表达量。结果:1补肾调经方对两种排卵障碍模型大鼠卵巢细胞因子的影响1.1卵巢组织中IL-1β、TNF-α、TGF-β1、TGF-βr1的蛋白表达两种排卵障碍模型大鼠中,在动情前、后期,与正常组比较,模型组卵巢颗粒细胞及卵母细胞中IL-1β表达均增强(均P1);卵母细胞及间质、黄体中巨噬样细胞TNF-α表达均增强(均P1);颗粒细胞及间质细胞中TGF-β1和TGF-βr1表达均增强(均P1)。雷公藤致排卵障碍模型大鼠灌服补肾调经方后,与模型组比较,补肾高、低剂量组在动情前后期,大鼠卵巢颗粒细胞及卵母细胞中IL-1β表达均降低(均P1),并接近正常(均P>0.05);卵巢卵母细胞及间质、黄体中巨噬样细胞TNF-α的表达均降低(均P1),在动情前期,补肾高、低剂量组均尚未达到正常(均P1),在动情后期,补肾低剂量组接近正常(P>0.05);卵巢颗粒细胞及间质细胞TGF-β1表达均降低(均P1),但均尚未达到正常(均P1);卵巢颗粒细胞及间质细胞TGF-βr1表达均降低(均P 1),并接近正常(均P>0.05)。雄激素致排卵障碍模型大鼠灌服补肾调经方后,与模型组比较,补肾高、低剂量组大鼠卵巢颗粒细胞及卵母细胞IL-1β表达均降低(均P1),并接近正常(均P>0.05);卵巢卵母细胞及间质、黄体中巨噬样细胞TNF-α表达均降低(均P1),并接近正常(均P>0.05);卵巢颗粒细胞及间质细胞TGF-β1、TGF-βr1表达降低(均P1),并接近正常(均P>0.05)。1.2卵巢组织中IL-1β、TNF-α、TGF-β1、TGF-βr1 mrNA的表达量两种排卵障碍模型大鼠中,在动情前、后期,与正常组比较,模型组卵巢组织中IL-1β、TNF-α、TGF-β1、TGF-βr1mrNA的表达量均升高(均P1)。雷公藤致排卵障碍模型大鼠灌服补肾调经方后,与模型组比较,补肾高、低剂量组大鼠卵巢组织中IL-1β、TNF-α、TGF-β1、TGF-βr1 mrNA表达量均降低(均P1),其中,在动情前后期,补肾高、低剂量组卵巢组织中IL-1β、TGF-βr1mrNA的表达量、动情后期补肾低剂量组卵巢组织中TNF-α、TGF-β1的表达量接近正常(均P>0.05)。雄激素致排卵

关键词：补肾调经方逍遥丸无排卵大鼠模型转化生长因子-β1 转化生长因子-βr1 肿瘤坏死因子-α 白细胞介素-1β

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