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转化生长因子β1及基质金属蛋白酶抑制剂1、2siRNA真核表达载体的构建与鉴定

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中华肝脏病杂志 2011年第4期19卷 291-296页

作者：钱克莉徐宁郎清戚敬虎孙银春肖朗刘杞石小枫重庆医科大学附属第二医院感染科重庆医科大学病毒性肝炎研究所教育部感染性疾病分子生物学重点实验室400010 陕西省榆林市第二医院重症医学科

目的用RNA干扰技术,分别以转化生长因子（TGF）β 1、基质金属蛋白酶抑制剂（TIMP）-1和TIMP-2为靶基因,设计并构建针对TGF β 1、TIMP-1和TIMP-2基因的小干扰RNA（siRNA）真核表达载体,并在体外检测其对大鼠肝星状细胞株（HSC-T6）的T... 详细信息

目的用RNA干扰技术,分别以转化生长因子（TGF）β 1、基质金属蛋白酶抑制剂（TIMP）-1和TIMP-2为靶基因,设计并构建针对TGF β 1、TIMP-1和TIMP-2基因的小干扰RNA（siRNA）真核表达载体,并在体外检测其对大鼠肝星状细胞株（HSC-T6）的TGF β 1、TIMP-1和TIMP-2基因表达的抑制情况.方法设计合成TGF β 1、TIMP-1和TIMP-2的siRNA并与含绿色荧光蛋白的pGenesil-1载体连接,构建siRNA真核表达载体,并测序鉴定.体外转染HSC-T6细胞,观察转染效率,并用荧光定量PCR以及Western blot分析对目的基因的抑制效率.组间比较用方差分析,两两比较用q检验.结果成功构建了针对TGF β 1、TIMP-1和TIMP-2基因的siRNA真核表达载体.体外成功转染HSC-T6细胞,转染后的细胞TGF β 1、TIMP-1及TIMP-2 mRNA表达分别下调63.4%±8.0%,64.5%±9.0%,55.0%±17.0%（F值分别为17.55、128.42、210.36,P值均＜0.01）,TGF β 1、TIMP-1及TIMP-2蛋白表达分别下降57.8%±3.0%,55.1%±5.0%,49.3%±1.0%（F值分别为130.75、159.09、35.72,P值均＜0.01）.结论成功构建了针对TGF β 1、TIMP-1和TIMP-2基因的siRNA真核表达载体;将重组载体成功转染入体外培养的HSC-T6细胞,并显著抑制了目的基因的表达;为进一步研究其在体抑制表达提供了实验工具.

关键词：肝硬化转化生长因子β 肝星状细胞

转化生长因子β1及其受体基因过量表达与进展期胃癌分化及临床预后的关系

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中华医学杂志 2006年第46期86卷 3249-3254页

作者：郭瑞芳臧师竹张亮李文梅胡伏莲吕有勇内蒙古自治区医院消化内科呼和浩特010017 北京大学临床肿瘤学院北京市肿瘤防治研究所生物芯片北京国家工程研究中心北京大学第一临床医院消化内科

目的明确转化生长因子β1(TGF-β1)及其受体基因和下游Smad基因家族成员在肠型胃癌中的表达变化与临床病理学特征及其预后的关系。方法在建立胃癌差异基因表达谱的基础上,确定胃癌及癌旁形态学正常组织中TGF-β1的mRNA表达水平存在明显... 详细信息

目的明确转化生长因子β1(TGF-β1)及其受体基因和下游Smad基因家族成员在肠型胃癌中的表达变化与临床病理学特征及其预后的关系。方法在建立胃癌差异基因表达谱的基础上,确定胃癌及癌旁形态学正常组织中TGF-β1的mRNA表达水平存在明显差异,进一步利用组织微阵列和免疫组化染色分别检测了胃癌及癌旁形态学正常组织中TGF-β1蛋白表达水平。结果TGF-β1蛋白主要以细胞质着色为主,在90例胃癌组织中32例(36%)阳性表达,58例(64%)为阴性表达。进一步对不同分化程度的胃癌组织中TGF-β1蛋白的表达进行分析,结果表明在39例高中分化组织中23例(59%)呈阳性表达,而51例低分化胃癌中9例(18%)为阳性表达,差异有统计学意义(P<0·01)。进一步分析了TGF-βR-Ⅰ蛋白的表达,在74例胃癌组织中42例(57%)阳性表达,32例(43%)染色阴性。在38例高中分化组织中26例(68%)呈阳性表达,在36例低分化胃癌中16例(44%)阳性表达,差异有统计学意义(P<0·05)。对有随访资料的肠型胃癌的TGF-β1及TGF-βR-Ⅰ蛋白的表达情况与临床病理学特征进行分析。应用Kaplan-Meier法分析蛋白阳性和阴性表达组病例的生存时间,确定TGF-β1蛋白阳性表达组病例生存和预后明显好于TGF-β1阴性表达组病例(P=0·0058)。而TGF-βR-Ⅰ蛋白表达与生存和预后无明显关系(P=0·8453)。结论TGF-β1表达水平与胃癌的分化程度有关,表达阳性组病例的预后明显好于表达阴性组的病例,提示TGF-β1表达对中晚期胃癌的再分型和分类具有重要的临床意义。

关键词：胃肿瘤转化生长因子β 基因,结构预后

转化生长因子β亚型在口腔鳞癌中的表达和意义

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华西口腔医学杂志 2001年第6期19卷 377-379页

作者：金晓明李金荣李祖兵李雅馨武汉大学口腔医学院 430079 青岛市口腔医院

目的 :探讨TGF_β与口腔鳞癌发生和发展的关系。方法 :采用SABC免疫组化法检测了 4 0例口腔鳞癌术后标本和 2 0例正常口腔粘膜中TGF_β的表达。结果 :口腔鳞癌和正常口腔粘膜中均表达TGF_β1、TGF_β2 、TGF_β3 ,但程度不同。TGF_β1... 详细信息

目的 :探讨TGF_β与口腔鳞癌发生和发展的关系。方法 :采用SABC免疫组化法检测了 4 0例口腔鳞癌术后标本和 2 0例正常口腔粘膜中TGF_β的表达。结果 :口腔鳞癌和正常口腔粘膜中均表达TGF_β1、TGF_β2 、TGF_β3 ,但程度不同。TGF_β1、TGF_β2 在口腔鳞癌中呈过表达。口腔鳞癌临床分期、有无颈淋巴结转移及病理分级与TGF_β1、TGF_β2 过表达有关 ,与TGF_β3 的表达无关。结论 :TGF_β1和TGF_β2 可能参与了口腔鳞癌的发生发展及颈淋巴结转移过程。

关键词：转化生长因子β 口腔肿瘤肿瘤转移鳞癌 Ⅱ型

转化生长因子β信号通路对小鼠肝大部分切除术后干细胞介导的肝再生的影响

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上海交通大学学报（医学版） 2019年第3期39卷 258-263页

作者：陈梓昕金鑫万里李德卫重庆医科大学附属第一医院实验研究中心重庆400016 重庆医科大学附属第一医院肝胆外科重庆400016

目的·探讨抑制转化生长因子β(transforming growth factor β,TGF-β)通路对小鼠肝大部分切除术(partial hepatectomy,PH)后干细胞介导的肝再生过程的影响。方法·取18只C57BL/6雄性小鼠,建立小鼠肝大部分切除模型,监测术前(PH0)、术... 详细信息

目的·探讨抑制转化生长因子β(transforming growth factor β,TGF-β)通路对小鼠肝大部分切除术(partial hepatectomy,PH)后干细胞介导的肝再生过程的影响。方法·取18只C57BL/6雄性小鼠,建立小鼠肝大部分切除模型,监测术前(PH0)、术后第1日(PH1)、第3日(PH3)、第7日(PH7)的肝组织中TGF-β通路的信号分子,以及干细胞标志物甲胎蛋白(α-fetoprotein,AFP)和富含亮氨酸重复单位的G蛋白偶联受体5(leucine-rich repeat-containing G-protein coupled receptor 5,LGR5)的m RNA和蛋白表达情况。再取32只小鼠,分为抑制剂组[PH+SB-431542,10 mg/(kg·d)]和对照组(PH+生理盐水),并于术后第1日(PH1)和第3日(PH3)留取肝脏标本,使用荧光定量PCR、Western blotting以及免疫荧光染色检测TGF-β通路和干细胞标志物AFP、LGR5的变化情况。结果·肝大部分切除术后小鼠肝脏TGF-β1的m RNA和蛋白、磷酸化SMAD2(p-SMAD2)蛋白,以及Afp的mRNA和阳性细胞数量、Lgr5的m RNA水平均随时间推移逐渐上调,至PH3达到高峰(均P<0.05),到PH7时则恢复至术前水平。与对照组相比,抑制剂组小鼠PH3时的上述指标均被显著抑制(均P<0.05)。结论·TGF-β通路可能对小鼠肝大部分切除术后干细胞介导的肝再生起着一定的调控作用。

关键词：肝大部分切除术转化生长因子β 干细胞肝再生甲胎蛋白

转化生长因子β_1诱导鼠牙槽骨缺损修复的实验研究

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中华口腔医学杂志 2000年第4期35卷 292-293,I024页

作者：赵淑贤王强程政景娟王敏西安医科大学口腔医学院口腔内科 710004

目的　观察转化生长因子 β1(transforminggrowthfactor β1,TGF β1)对鼠牙槽骨缺损修复的诱导作用。方法　将 2 0只实验小白鼠随机分为实验组和对照组 ,在两组动物 1| 1牙间牙槽骨人工制备 2mm× 2 5mm骨缺损区 ,实验组骨缺损区填入... 详细信息

目的　观察转化生长因子 β1(transforminggrowthfactor β1,TGF β1)对鼠牙槽骨缺损修复的诱导作用。方法　将 2 0只实验小白鼠随机分为实验组和对照组 ,在两组动物 1| 1牙间牙槽骨人工制备 2mm× 2 5mm骨缺损区 ,实验组骨缺损区填入浸有TGF β1溶液的明胶海绵块 ,对照组只填入明胶海绵块。术后 1、2周及 1、3个月分别处死动物 ,进行组织学观察。结果　①实验组 :术后 1周 ,骨缺损区周围有炎性细胞浸润 ,可见牙槽骨变性坏死 ;术后 2周 ,炎性渗出明显吸收 ,成纤维细胞、毛细血管生长活跃 ,可见骨样组织和少量骨组织 ;术后 1～ 3个月 ,新生骨组织范围扩大 ,钙化程度加强。②对照组 :术后 1周 ,骨缺损区周围有大量炎性细胞浸润 ;术后 2周 ,炎性渗出吸收 ,成纤维细胞、毛细血管生长活跃 ;术后 1个月 ,骨缺损区周围有成骨细胞 ;术后 3个月 ,骨缺损边缘有少量新骨沉积。结论　TGF

关键词：转化生长因子β 动物实验牙槽骨缺损修复

转化生长因子β对人牙周膜成纤维细胞的生物学作用

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中华口腔医学杂志 2001年第1期36卷 2-26,T002页

作者：司晓辉刘正上海第二医科大学口腔医学院口腔内科 200011

目的　研究转化生长因子 β(transforminggrowthfactor β ,TGF β)对人牙周膜成纤维细胞(humanperiodontalligamentfibroblasts,HPDLFs)的生物学作用。方法　原代培养HPDLFs,并观察TGF β对HPDLFs的增殖、碱性磷酸酶 (alkalinephosphatase ,ALP)活性、骨钙素 (osteocalcin ,OC)合成及矿化结节形成的作用。结果　 0 0 0 5 0～ 0 10 0 0mg/LTGF β可明显刺激HPDLFs的增殖 ,0 0 0 5 0mg/LTGF β可显著提高HPDLFs的ALP活性 ,0 0 0 0 5～ 0 10 0 0mg/LTGF β对HPDLFs合成OC和矿化结节的形成无明显影响。结论　TGF β对HPDLFs的作用呈剂量依赖性。TGF β能够刺激HPDLFs表达某些成骨细胞表型 ,但不能促进成骨表型的成熟。

关键词：转化生长因子β 成纤维细胞碱性磷酸酶骨钙素

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转化生长因子β与早产儿慢性肺疾病

中华儿科杂志 2003年第4期41卷 313-315页

作者：富建华薛辛东中国医科大学附属第二医院儿科沈阳110004

早产儿慢性肺疾病（chronic lung disease, CLD )是早产儿吸人高浓度氧、机械通气治疗后最常见的合并症。近年来，其发病率有逐渐上升趋势。因发病机制仍不清楚，目前尚无理想的预防及治疗方法，严重影响早产儿的生活质量尽管越来越多... 详细信息

早产儿慢性肺疾病（chronic lung disease, CLD )是早产儿吸人高浓度氧、机械通气治疗后最常见的合并症。近年来，其发病率有逐渐上升趋势。因发病机制仍不清楚，目前尚无理想的预防及治疗方法，严重影响早产儿的生活质量尽管越来越多的证据表明，CLD的病理改变与多种细胞因子的综合作用密切相关，但转化生长因子0 (transforming growthfactor beta , TGF-β在其发生、发展中的作用备受关注

关键词：转化生长因子β 早产儿慢性肺疾病生物学特征

转化生长因子β及其受体在小鼠精子发生过程中的表达

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解剖学报 2006年第2期37卷 226-231页

作者：侯武刚张远强赵洁赵勇第四军医大学组织学与胚胎学教研室西安710032

目的观察转化生长因子β(TGFβs)及其受体(TGF-βR)在小鼠睾丸中的表达,证实TGFβs及其受体在小鼠精子发生过程中的定位和作用机理。方法免疫组织化学染色结合显微图像定量分析和免疫荧光双重染色。结果免疫组织化学显示:TGFβ1和TGFβ... 详细信息

目的观察转化生长因子β(TGFβs)及其受体(TGF-βR)在小鼠睾丸中的表达,证实TGFβs及其受体在小鼠精子发生过程中的定位和作用机理。方法免疫组织化学染色结合显微图像定量分析和免疫荧光双重染色。结果免疫组织化学显示:TGFβ1和TGFβ2主要表达于生精小管内Ⅵ-Ⅷ期圆形精子细胞以及长形精子细胞和变态精子细胞的胞质,位于睾丸间质中的Leydig细胞胞质呈弱表达;TGFβ3仅表达于Leydig细胞,各级生精细胞未见表达。晚期精母细胞(Ⅷ期)至第Ⅹ期长形精子细胞均表达TGFβ-RⅠ;TGFβ-RⅡ仅表达于第Ⅺ期后的变态精子细胞期;而TGF-βRⅢ则主要表达于Ⅶ-Ⅷ期圆形精子细胞和变态精子细胞胞质。免疫荧光双重染色显示:TGFβ1和TGFβ2与TGF-βRⅢ在生精上皮最早共表达于晚期圆形精子细胞顶体极。结论TGFβs及其受体在小鼠精子发生过程中的表达具有细胞和周期特异性,提示其在精子发生中具有重要意义。

关键词：转化生长因子β 转化生长因子β受体生精周期免疫组织化学染色睾丸小鼠

转化生长因子β对椎间盘细胞Ⅱ型胶原基因表达的调节作用

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中华外科杂志 2000年第9期38卷 703-706,I039页

作者：陈岩胡有谷吕振华青岛大学医学院附属医院骨科 266003

目的　探讨转化生长因子 β (TGF β)对椎间盘细胞Ⅱ型胶原基因表达的调节作用。　方法　应用原位杂交技术检测TGF β1对人胚椎间盘原代培养及传代培养的纤维环细胞、髓核细胞中Ⅱ型胶原mRNA的调节作用 ,其中TGF β1浓度分别为 0ng/ml、... 详细信息

目的　探讨转化生长因子 β (TGF β)对椎间盘细胞Ⅱ型胶原基因表达的调节作用。　方法　应用原位杂交技术检测TGF β1对人胚椎间盘原代培养及传代培养的纤维环细胞、髓核细胞中Ⅱ型胶原mRNA的调节作用 ,其中TGF β1浓度分别为 0ng/ml、1ng/ml和l0ng/ml;采用VIDAS软件计算杂交涂片中细胞的平均光密度值 ,进行胶原mRNA相对定量。　结果　 (1)原代培养的椎间盘纤维环细胞 ,TGF β1浓度 1ng/ml组及 10ng/ml组其光密度值分别为 0ng/ml组的 74 6 %和 6 0 2 % ;原代培养的髓核细胞 ,TGF β1浓度 1ng/ml组及 10ng/ml组其光密度值分别是 0ng/ml组的 6 9 6 %和5 5 5 %。 (2 )传代培养的纤维环细胞 ,TGF β1浓度 1ng/ml组及 10ng/ml组其光密度值分别为 0ng/ml组的 15 1%和 16 6 % ;传代培养的髓核细胞 ,TGF β1浓度 1ng/ml组及 10ng/ml组其光密度值分别是 0ng/ml组的 145 %和 198%。　结论　TGF β对椎间盘细胞Ⅱ型胶原基因表达的调节作用取决于纤维环及髓核中类软骨细胞及脊索细胞的分化状态。对于原代培养分化较为完全的细胞 ,TGF β可以抑制Ⅱ型胶原基因表达 ;对于传代培养的、正在经历去分化的类软骨细胞及脊索细胞 ,TGF β可以刺激Ⅱ型胶原基因表达 ,提示TGF

关键词：转化生长因子β 椎间盘退变 Ⅱ型胶原 mRNA