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9种中药提取物细胞毒性及其与人结肠腺癌细胞系单层细胞旁通透性的相关性研究

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中国药理学通报 2011年第10期27卷 1418-1421页

作者：蔡润兰代勇王敏高源徐世军齐云中国医学科学院北京协和医学院药用植物研究所北京100193 成都中医药大学四川成都610075

目的了解9种中药提取物对Caco-2细胞毒性与对其细胞单层细胞-细胞间通透性的相关性。方法用MTT法测定9种中药提取物24 h及48 h的细胞毒,并计算IC50值。采用TranswellTM培养板构建Caco-2细胞单层,细胞电阻仪测定受试物对其TEER值的影响,... 详细信息

目的了解9种中药提取物对Caco-2细胞毒性与对其细胞单层细胞-细胞间通透性的相关性。方法用MTT法测定9种中药提取物24 h及48 h的细胞毒,并计算IC50值。采用TranswellTM培养板构建Caco-2细胞单层,细胞电阻仪测定受试物对其TEER值的影响,找到影响细胞单层紧密连接的临界剂量,以此剂量与细胞毒参数行相关分析。结果 24、48 h细胞毒参数(IC50)与临界剂量(最大无毒剂量、最小有毒剂量)相关系数均>0.84,相关性检验P值均<0.01。最大无毒剂量与IC50的比值列阵显示,《小品方》甘草饮最小,三七醇提物最大。结论 9种中药提取物对Caco-2细胞毒与该细胞单层细胞旁通透性高度相关,采用细胞毒参数来预估中药提取物在Caco-2单层细胞模型供侧起始最大浓度具可行性。

关键词：体外细胞毒细胞旁通透性 Caco-2细胞 MTT活性测定跨上皮电阻相关性

25羟维生素D_3对正常气道上皮细胞通透性的影响及可能机制

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南方医科大学学报 2011年第7期31卷 1187-1189页

作者：周晓婷赵海金蔡绍曦南方医科大学南方医院呼吸科广东广州510515

目的探讨25羟维生素D3对人正常气道上皮细胞通透性及ZO-1表达的影响。方法选取正常人支气管上皮细胞系16HBE为研究对象,MTT法分别检测不同浓度25羟维生素D3对细胞活力的影响;实验分组为:对照组,不同浓度25羟维生素D3处理组。各处理因素... 详细信息

目的探讨25羟维生素D3对人正常气道上皮细胞通透性及ZO-1表达的影响。方法选取正常人支气管上皮细胞系16HBE为研究对象,MTT法分别检测不同浓度25羟维生素D3对细胞活力的影响;实验分组为:对照组,不同浓度25羟维生素D3处理组。各处理因素作用细胞总时间为24h。跨上皮电阻测量仪测量标准化单细胞层跨上皮电阻(TER),比较各组TER差别。进一步用实时定量PCR观测各处理组紧密连接蛋白ZO-1mRNA表达的变化。结果与对照组相比,25羟维生素D3处理组TER(P0.05)。结论 25羟维生素D3可以使气道上皮通透性减低,但这种效应并非通过上调气道上皮ZO-1表达实现的。

关键词：气道上皮细胞 25羟维生素D3 胞浆ZO-1 跨上皮电阻通透性

PAF对肠上皮细胞紧密连接的影响及ITF的保护作用

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世界华人消化杂志 2008年第4期16卷 372-378页

作者：许玲芬董亚珞孙梅马力毛志芹中国医科大学附属第二医院(盛京医院)儿科辽宁省沈阳市110004 中国医科大学附属第一医院临床流行病教研室辽宁省沈阳市110001 中国医科大学附属第二医院(盛京医院)感染科实验室辽宁省沈阳市110004

目的:探讨血小板活化因子(PAF)是否会引起肠黏膜屏障的破坏以及这种破坏机制是否与紧密连接相关,并观察肠三叶因子(ITF)的保护作用.方法:培养人结肠腺癌细胞株Caco-2,分别设正常对照组:不加刺激物及干预因素;实验组:加入PAF,终浓度分别... 详细信息

目的:探讨血小板活化因子(PAF)是否会引起肠黏膜屏障的破坏以及这种破坏机制是否与紧密连接相关,并观察肠三叶因子(ITF)的保护作用.方法:培养人结肠腺癌细胞株Caco-2,分别设正常对照组:不加刺激物及干预因素;实验组:加入PAF,终浓度分别为50 ng/L、100 ng/L和200 ng/L;ITF预防组:先加入ITF0.3 g/L,30 min后加入PAF 100 ng/L;ITF治疗组:先加入PAF 100 ng/L,30 min后加入ITF0.3 g/L,24 h后进行实验.MTT比色法检测细胞活力;测定跨上皮电阻TER和荧光黄的透过量反映肠上皮细胞单层通透性;RT-PCR法检测紧密连接蛋白ZO-1和Occludin mRNA表达的变化;免疫荧光染色观察紧密连接蛋白ZO-1和Occludin的形态学.结果:PAF未影响到细胞的增殖和细胞活力.各浓度PAF作用24 h后,细胞单层通透性增加,跨上皮电阻(TER)下降,荧光黄透过增加.ITF治疗组及预防组TER下降值较模型组明显降低(122.2±14.7,100.3±10.9 vs 210.3±26.4,P<0.05),荧光黄透过量减少(10226.1±556.2,9711.2±364.9 vs 11601.2±693.5,P<0.05),预防组作用更明显.PAF作用后,ZO-1和Occludin mRNA表达均有下降,以100 ng/L组改变最为明显,ITF预防组较之表达增加(1.28±0.06 vs 1.07±0.05,1.13±0.07 vs 0.81±0.06,P<0.05),ITF治疗组改变不明显.免疫荧光染色发现ZO-1和Occludin主要分布在细胞内近胞膜处.PAF作用后,ZO-1及Occludin形态学改变,预防性给予ITF后,可明显减轻这种改变.结论:PAF可引起肠黏膜屏障破坏,其机制可能和紧密连接蛋白的破坏相关;ITF可以通过改变紧密连接蛋白的表达而部分恢复肠黏膜正常通透性,起到保护作用.

关键词：紧密连接血小板活化因子肠三叶因子跨上皮电阻 ZO-1 Occludin MTT法逆转录聚合酶链式反应

鼠李糖乳酪杆菌KF7发酵乳上清对脂多糖诱导的Caco-2细胞单层屏障损伤的保护作用及其机制研究

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食品与发酵工业 2024年第24期50卷 191-200页

作者：董奇奇张怡琳游春苹上海海洋大学食品学院上海201306 乳业生物技术国家重点实验室上海乳业生物工程技术研究中心光明乳业股份有限公司乳业研究院上海200436

该研究利用脂多糖诱导Caco-2细胞单层屏障模型损伤,在体外探究鼠李糖乳酪杆菌KF7发酵乳上清液对肠道屏障的保护作用。通过Cell Counting Kit-8(CCK-8)法检测KF7发酵乳上清液对细胞活力的影响;使用电阻仪和异硫氰酸荧光素-右旋糖苷检测... 详细信息

该研究利用脂多糖诱导Caco-2细胞单层屏障模型损伤,在体外探究鼠李糖乳酪杆菌KF7发酵乳上清液对肠道屏障的保护作用。通过Cell Counting Kit-8(CCK-8)法检测KF7发酵乳上清液对细胞活力的影响;使用电阻仪和异硫氰酸荧光素-右旋糖苷检测肠上皮屏障结构的完整性和通透性;利用荧光探针以及比色法检测细胞内活性氧和丙二醛(malondialdehyde,MDA)的含量;采用qRT-PCR分析紧密连接蛋白、促炎细胞因子、抗炎细胞因子以及氧化应激标志物和炎症反应相关通路的基因表达情况。结果发现,1%~5%的鼠李糖乳酪杆菌KF7发酵乳上清液对Caco-2细胞活力无损伤,且能够保护Caco-2细胞单层屏障,降低脂多糖诱导的炎症反应(下调TNF-α、IL-1β、IL-6的基因表达,上调IL-10的基因表达)和氧化应激(降低MDA含量),上调细胞间紧密连接蛋白相关基因(Claudin-1和Occludin)的表达,改善细胞单层跨上皮电阻并降低细胞单层的通透性,从而恢复Caco-2细胞单层屏障完整性。在机制方面,鼠李糖乳酪杆菌KF7发酵乳上清液可能通过促进Nrf2/NQO1信号通路拮抗氧化应激,通过抑制TLR/MyD88/NF-κB信号通路及下游肌球蛋白轻链激酶的基因表达来降低炎症反应和肠上皮细胞间通透性。该研究结果可为鼠李糖乳酪杆菌KF7发酵乳制品作为一种有前途的保护肠道健康的功能性益生菌膳食补充剂提供一定的理论基础。

关键词：鼠李糖乳酪杆菌KF7 Caco-2细胞跨上皮电阻肠上皮屏障氧化应激炎症反应

Peyer’s结淋巴细胞对上皮屏障功能的影响

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中国免疫学杂志 2003年第11期19卷 744-746,756页

作者：陈洁高杰英曾丽玲徐鹏辉钟耀华陈小章军事医学科学院微生物流行病研究所免疫室北京100071 香港中文大学上皮细胞生物学研究中心

目的 :体外建立稳定的上皮细胞与Peyer’s结淋巴细胞 (PPL)共培养体系 ,进一步研究该体系中的上皮细胞生理学特性。方法 :采用短路电流检测单层上皮细胞跨上皮电阻 (TER)的变化、半定量RT PCR方法检测上皮细胞间的紧密连接相关蛋白ZO 1... 详细信息

目的 :体外建立稳定的上皮细胞与Peyer’s结淋巴细胞 (PPL)共培养体系 ,进一步研究该体系中的上皮细胞生理学特性。方法 :采用短路电流检测单层上皮细胞跨上皮电阻 (TER)的变化、半定量RT PCR方法检测上皮细胞间的紧密连接相关蛋白ZO 1和ZO 2mRNA的表达。结果 :①Caco 2细胞单层与PPL共培养的第 2天 ,无论是混合共培养还是上下共培养组的TER均与对照有统计学差异 (P 上皮屏障功能。

关键词：共培养 Peyer's结淋巴细胞 Caco-2 跨上皮电阻

白细胞介素-22对缺氧条件下肠上皮屏障的保护作用及其机制

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中华实验外科杂志 2013年第3期30卷 476-479页

作者：杨学超杨松巍杨光孙力华杨桦第三军医大学新桥医院普通外科重庆400037

目的观察白细胞介素-22（IL-22）对缺氧肠上皮T84细胞屏障功能的影响，探讨其分子机制。方法对T84细胞进行2％02缺氧6h（Hx组）及100μg／L重组IL-22（Hx＋rlL-22）处理，分别检测跨上皮电阻（TER），IL-22受体A1（IL-22RAl）及紧密连... 详细信息

目的观察白细胞介素-22（IL-22）对缺氧肠上皮T84细胞屏障功能的影响，探讨其分子机制。方法对T84细胞进行2％02缺氧6h（Hx组）及100μg／L重组IL-22（Hx＋rlL-22）处理，分别检测跨上皮电阻（TER），IL-22受体A1（IL-22RAl）及紧密连接蛋白：ZO-1、Occludin、Claudin-1及Claudin-4的mRNA与蛋白表达。结果缺氧引起IL-22RAl的mRNA及蛋白表达较常氧分别下降30．0％及63．0％，并引起TER降低54．7％，经rlL-22预处理使得TER较Hx升高43．8％。缺氧处理使ZO．1、Occludin、Claudin．1及Claudin-4表达明显降低，而rlL-22预处理则可缓解该现象（mRNA及蛋白表达较Hx组分别升高：44．3％、36．4％、77．6％、61．2％及109．3％、77，6％、153．3％、79．6％，P〈0．01）。结论IL-22与其受体作用后可以维持肠屏障功能，稳定渗透性，调控紧密连接蛋白的表达。

关键词：白细胞介素-22 肠上皮屏障跨上皮电阻紧密连接蛋白

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肠上皮内淋巴细胞对肠上皮屏障功能的影响

军事医学科学院院刊 2005年第4期29卷 301-304页

作者：徐鹏辉高杰英陈德蕙陈洁曾丽玲何乐思陈小章军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071 香港中文大学上皮细胞生物学研究中心

目的:研究在痢疾志贺菌F2a-12脂多糖刺激下,大鼠小肠上皮内淋巴细胞(IEL)对人结肠癌上皮细胞系Caco-2屏障功能的影响。方法:新鲜分离的大鼠小肠IEL与Caco-2共培养,并用F2a-12LPS刺激共培养细胞。通过检测短路电流、紧密连接相关蛋白表... 详细信息

目的:研究在痢疾志贺菌F2a-12脂多糖刺激下,大鼠小肠上皮内淋巴细胞(IEL)对人结肠癌上皮细胞系Caco-2屏障功能的影响。方法:新鲜分离的大鼠小肠IEL与Caco-2共培养,并用F2a-12LPS刺激共培养细胞。通过检测短路电流、紧密连接相关蛋白表达及透射电镜来反映上皮屏障功能的变化。结果:共培养后跨上皮电阻增加,但在LPS刺激后显著降低;紧密连接相关蛋白ZO-2mRNA表达在共培养后增加,LPS刺激后共培养细胞ZO-1mRNA表达显著下降;透射电镜下可见共培养后细胞间紧密连接显著增强,但在LPS刺激后共培养细胞间的连接几乎消失。首次在电镜下发现上皮细胞与IEL间有连接样结构的存在,为其相互作用提供了形态学的证据。结论:IEL对上皮屏障功能具双向调节作用,在生理状态下增强,但在感染信号存在时降低。

关键词：肠黏膜上皮细胞上皮内淋巴细胞共培养跨上皮电阻紧密连接屏障功能

沉默信息调节因子1对缺氧条件下肠上皮屏障功能的保护作用及机制

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中华胃肠外科杂志 2014年第6期17卷 602-606页

作者：马远航许超王文生孙礼刚杨松巍逯顶松刘勇杨桦第三军医大学新桥医院普通外科重庆400037

目的观察沉默信息调节因子1（SIRT1）对肠缺氧上皮Caco-2细胞屏障功能的影响并探讨其分子机制。方法对Caco-2细胞分别进行1％O2浓度缺氧6h（缺氧组）和常规处理（常规组）及加浓度为40μmol／L Resveratrol（SIRT1激动剂）预处理6h后再... 详细信息

目的观察沉默信息调节因子1（SIRT1）对肠缺氧上皮Caco-2细胞屏障功能的影响并探讨其分子机制。方法对Caco-2细胞分别进行1％O2浓度缺氧6h（缺氧组）和常规处理（常规组）及加浓度为40μmol／L Resveratrol（SIRT1激动剂）预处理6h后再缺氧6h（观察组），分别检测3组肠上皮细胞跨上皮电阻（TER），PCR及Western blot分别检测3组SIRT1及紧密连接蛋白ZO—1、Occludin和Claudin-1的mRNA与蛋白表达。结果缺氧组SIRT1mRNA及其蛋白的相对表达量均明显低于常规组（分别为0．40±0．02比0．70＋0．07，P=0．001；0．37±0．03比0．76±0．03，P=0．001），也明显低于观察组（0．50±0．02，P=0．026；0．54±0．02，P=0．011）。缺氧组3种紧密连接蛋白mRNA表达均低于常规组（P〈0．05），也低于观察组（P〈0．05），观察组的ZO-1及Claudin-1表达与常规组比较，差异无统计学意义（P〉0．05）。3种紧密连接蛋白的表达水平常规组最高，观察组次之，缺氧组最低，两两比较，差异均具有统计学意义（均P〈0．05）。常规组、缺氧组和观察组的TER分别为（142±7）Ohm／cm^2、（94±3）Ohm／cm^2和（119±7）Ohm／cm^2；两两比较，差异均具有统计学意义（均P〈0．05）。结论缺氧条件下SIRT1水平降低，而SIRT1的激活可通过增加肠道紧密连接蛋白ZO-1、Occludin和Claudin-1mRNA与蛋白的表达，从而减轻缺氧对肠上皮屏障功能的损伤。

关键词：肠上皮屏障功能缺氧沉默信息调节因子1 跨上皮电阻紧密连接蛋白

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小鼠气管–支气管上皮细胞的气–液界面培养

中国呼吸与危重监护杂志 2019年第4期18卷 362-368页

作者：陈思肖华张伟孔晨陈长明 Venkataramana Sidhaye 李强白冲海军军医大学附属第一医院长海医院呼吸与危重症医学科上海200433 解放军陆军第948医院急诊科新疆乌苏833000 约翰霍普金斯大学医学院呼吸与危重症医学科美国马里兰州巴尔的摩21205 上海同济大学附属东方医院呼吸与危重症医学科上海200120

目的建立一种小鼠气管–支气管上皮细胞气–液界面(ALI)培养及纤毛摆动频率测量的方法,最大程度还原气道上皮的生理功能。方法利用1 mg/mLⅪⅤ型链蛋白酶冷消化的方法获取BALB/c小鼠气管–支气管上皮细胞,筛选出最佳消化时长以保证所得... 详细信息

目的建立一种小鼠气管–支气管上皮细胞气–液界面(ALI)培养及纤毛摆动频率测量的方法,最大程度还原气道上皮的生理功能。方法利用1 mg/mLⅪⅤ型链蛋白酶冷消化的方法获取BALB/c小鼠气管–支气管上皮细胞,筛选出最佳消化时长以保证所得细胞的数量及活力。差速贴壁法去除成纤维细胞后,接种于Ⅰ型鼠尾胶原预包被的Transwell小室,用不同培养基进行增殖期和ALI分化期培养。结果采用链蛋白酶冷消化12 h、14 h和16 h所得细胞数目分别为(1.78±0.33)×10^5、(1.93±0.26)×10^5和(2.01±0.28)×10^5,经台盼蓝染色活细胞率分别为(96.86±0.25)%、(94.73±1.63)%和(86.87±5.95)%。1周左右细胞铺满小室,继续ALI培养2~3周后光学显微镜下可见纤毛节律性摆动,电镜及免疫荧光均证实纤毛结构。培养所得细胞纤毛摆动频率与小鼠气管在体纤毛摆动频率与一致。结论本实验建立的气管–支气管上皮细胞分离、ALI培养及纤毛摆动频率测量体系简便、稳定、高效、可靠,为探索气道疾病的致病和治疗机制创造了基础,亦可为其他物种气道上皮和(或)其他器官上皮的培养提供参考依据。

关键词：气道表面液体层假复层纤毛柱状上皮气-液界面气管-支气管上皮细胞原代培养跨上皮电阻纤毛摆动频率