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趋化素样因子1对人血管平滑肌细胞增殖及凋亡的影响

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中华医学杂志 2012年第29期92卷 2069-2074页

作者：张韬熊江沈晨阳贾森皓刘杰郭伟解放军总医院血管外科北京100853 北京大学人民医院血管外科

目的观察趋化素样因子1（CKLF1）对人血管平滑肌细胞（VSMC）增殖及凋亡的影响，初步探讨其对凋亡抑制基因（Bcl-2）、促凋亡基因（Bax）和半胱氨酸蛋白酶（Caspase-3）表达水平的调控。方法腺病毒介导CKLF1基因修饰VSMC，CCK8法测定其... 详细信息

目的观察趋化素样因子1（CKLF1）对人血管平滑肌细胞（VSMC）增殖及凋亡的影响，初步探讨其对凋亡抑制基因（Bcl-2）、促凋亡基因（Bax）和半胱氨酸蛋白酶（Caspase-3）表达水平的调控。方法腺病毒介导CKLF1基因修饰VSMC，CCK8法测定其对细胞增殖的影响；流式细胞仪观察细胞周期变化和凋亡情况；实时定量PCR和Western印迹法分别检测细胞内Bcl-2、Bax的mRNA和Caspase-3蛋白的表达情况。结果观察期内CKLF1基因修饰的VSMC生长增殖被明显促进，24、48和72h细胞周期s期的比例分别为15．8％±3．4％、25．5％±9．8％和37．2％±3．3％，较对照组细胞内DNA合成活跃（P〈0．05）；血清饥饿刺激后CKLFI组各时相细胞凋亡率较对照组明显减少（5．5％±1．3％、7．6％±0．7％和11．4％±5．5％，P〈0．05）。作用时间各时相内CKLF1可持续降低BaxmRNA（0．96±0．14、0．61±0．15和0．37±0．05）及Caspase-3蛋白（1．94±0．30、1．09±0．17和0．73±0．09）的表达，并上调Bcl-2mRNA（1．59±0．18、2．05±0．51和2．96±0．27）的表达。结论CKLF1可诱导人血管平滑肌细胞增殖和抗凋亡，其潜在机制可能与CKLF1上调Bcl-2水平，继而降低Bax和Caspase-3表达有关。

关键词：趋化素样因子1 血管平滑肌细胞凋亡

趋化素样因子1对血管平滑肌细胞核因子-κB的影响

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中华实验外科杂志 2011年第4期28卷 503-505,I0002页

作者：张韬沈晨阳李清乐周冰莹张小明北京大学人民医院血管外科 100044 北京大学药学院分子与细胞药理学系

目的应用重组腺病毒载体介导的趋化素样因子1（CKLFl）基因转染大鼠血管平滑肌细胞（SMC），观察CKLFI对SMC内核因子（NF）一KB活性的影响。方法用腺病毒介导的CKLFl以不同时间梯度转染刺激SMC，采用免疫细胞化学、荧光定量聚合酶链反应... 详细信息

目的应用重组腺病毒载体介导的趋化素样因子1（CKLFl）基因转染大鼠血管平滑肌细胞（SMC），观察CKLFI对SMC内核因子（NF）一KB活性的影响。方法用腺病毒介导的CKLFl以不同时间梯度转染刺激SMC，采用免疫细胞化学、荧光定量聚合酶链反应（PCR）和Westernblot等方法分析细胞内CKLF1和NF—KB激活表达：结果静息状态下SMC中NF—KB有基础表达量，经CKLF1刺激后2～14d，其活性迅速增加，免疫细胞化学染色细胞质和核呈棕色，CKLF1荧光定量PCR和Westernblot结果分别为1．050±0．0681、3．3090±0．1523、2．854±0．1219、1．705±0．0944、1．435±0．0858和1．186±0．061、2．264±0．185、2．397±0．149、1．617±0．101、1．381±0．033，与对照组比较差异均有统计学意义（P〈0．05）。NF—KB的Westernblot结果为1．184±0．111、2．046±0．221、1．747±0．068、1．4984-0．051、1．412±0．087，与对照组比较5～14d差异有统计学意义（P〈0．05）。两组刺激后5～8d为表达高峰期，且NF—KB活性与CKLFI表达量间明显相关。结论CKLF1可导致NF—KB表达增加并随刺激时间梯度改变，提示NF—KB信号通路可能参与了CKLF1对SMC的增殖和迁移作用。

关键词：趋化素样因子1 核因子-KB 血管平滑肌细胞

趋化素样因子1对人动脉平滑肌细胞的增殖促进作用

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中国老年学杂志 2011年第4期31卷 597-598页

作者：宣成睿塔拉沈晨阳内蒙古医学院病理生理教研室内蒙古呼和浩特010059 内蒙古医院泌尿外科北京大学人民医院血管外科

目的观察人趋化素样因子1(CKLF1)对人外周动脉血管平滑肌细胞(ASMCs)的作用。方法用CKLF1真核细胞表达载体瞬时转染293T细胞,72 h后收集上清培养液,采用ELISA方法检测培养上清中CKLF1;用该上清培养人ASMCs细胞后,MTT法检测该上清对细胞... 详细信息

目的观察人趋化素样因子1(CKLF1)对人外周动脉血管平滑肌细胞(ASMCs)的作用。方法用CKLF1真核细胞表达载体瞬时转染293T细胞,72 h后收集上清培养液,采用ELISA方法检测培养上清中CKLF1;用该上清培养人ASMCs细胞后,MTT法检测该上清对细胞增殖的影响。结果 MTT结果显示,10倍稀释的转染上清刺激ASMCs 72 h后,实验组OD490=0.480±0.024,与对照组OD490=0.424±0.011相比,差异有统计学意义(P样硬化血管内膜增厚的过程。

关键词：趋化素样因子1 血管平滑肌细胞细胞增殖

趋化素样因子1(CKLF1)对关节软骨细胞增殖及代谢的影响

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北京大学学报（医学版） 2003年第4期35卷 399-401页

作者：程爱新韩文玲马大龙娄思权北京大学第三医院骨科北京100083 北京大学人类疾病基因研究中心北京100083

目的 :研究趋化素样因子 1(CKLF1)对兔关节软骨细胞增殖及代谢的调节作用。方法 :采用体外细胞培养技术及同位素参入法 ,检测CKLF1真核表达载体转染 2 93T细胞所得条件培养基对软骨细胞DNA、胶原及蛋白多糖合成能力的影响。结果 :在含 5... 详细信息

目的 :研究趋化素样因子 1(CKLF1)对兔关节软骨细胞增殖及代谢的调节作用。方法 :采用体外细胞培养技术及同位素参入法 ,检测CKLF1真核表达载体转染 2 93T细胞所得条件培养基对软骨细胞DNA、胶原及蛋白多糖合成能力的影响。结果 :在含 5 % (体积分数 )胎牛血清 (FCS)的DMEM培养条件下 ,转染后 2 93T细胞表达的CKLF1可抑制兔关节软骨细胞DNA、胶原及蛋白多糖的合成 ,并可促进诱导性一氧化氮合酶 (iNOS)的转录。结论 :CKLF1可能通过提高iNOS的表达抑制关节软骨细胞增殖、胶原及蛋白多糖的合成。

关键词：趋化素样因子1 CKLF1 关节软骨细胞增殖代谢细胞培养

趋化素样因子1过表达促进强直性脊柱炎髋关节韧带成纤维细胞增殖和向成骨细胞转化的实验研究

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中华风湿病学杂志 2017年第9期21卷 614-621,I0002页

作者：李虎李儒军曹宸喜柯岩林剑浩陶可北京大学人民医院骨关节科关节炎诊疗中心 100044

目的探索趋化素样因子1（CKLF1）对AS髋关节韧带成纤维细胞增殖和向成骨细胞转化的影响。方法正常和AS髋关节韧带组织分别取自我科6例股骨颈骨折和4例重度AS拟行髋关节置换的患者。组织经常规消化得单细胞，并行倒置相差显微镜观察和抗... 详细信息

目的探索趋化素样因子1（CKLF1）对AS髋关节韧带成纤维细胞增殖和向成骨细胞转化的影响。方法正常和AS髋关节韧带组织分别取自我科6例股骨颈骨折和4例重度AS拟行髋关节置换的患者。组织经常规消化得单细胞，并行倒置相差显微镜观察和抗波形蛋白（vimentin）免疫荧光染色（IFC）检测。对上述髋关节韧带组织及成纤维细胞分别行原位（in situ）和体外（in vitro）培养，重组腺相关病毒（rAAV）-lacZ、rAAV-hCKLF1转染21 d后收集标本。细胞增殖、致炎性细胞因子分泌、成骨关键靶基因、CKLF1及CCR4表达等分别采用ELISA、IFC和荧光定量反转录（RT）-PCR检测。各组间数据用单因素方差分析（LSD法），2组间比较采用t检验。结果第2代正常和AS细胞抗vimentin IFC检测均为阳性，表明分离培养的细胞为成纤维细胞。rAAV-hCKLF1转染21 d后，苏木精-伊红（HE）染色并计数单位面积下的细胞数、水溶性四氮唑法（WST-1）检测细胞增殖能力和Hoechst 33258检测细胞DNA含量均显示，CKLF1转染促进细胞增殖[与无病毒转染组、lacZ组相比，差异具有统计学意义（F=6.98，64.32，115.91；P〈0.05或P〈0.01）]；正常和AS髋关节韧带组织及成纤维细胞分泌的致炎性细胞因子（IL-6和TNF-α），均明显升高[与无病毒转染组、lacZ组相比，差异具有统计学意义（F=34.57，8.89；P〈0.05或P〈0.01）]；此外，与无病毒转染组、lacZ组及正常成纤维细胞的各组相比，CKLF1尚能促进AS成纤维细胞表达特异性骨细胞外基质蛋白[骨桥蛋白（OPN）和骨钙蛋白（OCN）]；荧光定量RT-PCR也得到了与上述检测结果相近的发现。结论过表达CKLF1促进成纤维细胞增殖和致炎性细胞因子分泌，增强成骨相关靶基因的转录，推测CKLF1可能在AS关节病理性骨化过程中发挥重要作用。

关键词：脊柱炎强直性骨化异位性成纤维细胞转染趋化素样因子1

趋化素样因子1在大鼠腹主动脉瘤病情发展中的作用

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中国老年学杂志 2016年第6期36卷 1287-1288页

作者：庄晖郭平凡詹腾辉福建医科大学附属第一医院血管外科福建福州350005

目的探讨氢气抑制趋化素样因子1(Cklf1)在大鼠腹主动脉瘤病情发展中的作用。方法取雄性SD大鼠20只,随机分为腹主动脉瘤组和腹主动脉瘤干预组(腹腔注射氢气饱和生理盐水),建立腹主动脉瘤模型。术后28 d开腹取材,观察腹主动脉扩张情况,采... 详细信息

目的探讨氢气抑制趋化素样因子1(Cklf1)在大鼠腹主动脉瘤病情发展中的作用。方法取雄性SD大鼠20只,随机分为腹主动脉瘤组和腹主动脉瘤干预组(腹腔注射氢气饱和生理盐水),建立腹主动脉瘤模型。术后28 d开腹取材,观察腹主动脉扩张情况,采用苏木素-伊红(HE)染色和弹力纤维染色检测炎症浸润和腹主动脉中膜弹力纤维破坏情况,免疫组化法检测Cklf1(r Cklf1)、金属蛋白酶(MMP2)蛋白表达情况,RT-PCR检测r Cklf1、MMP2基因表达情况。结果腹主动脉瘤组大鼠腹主动脉扩张率明显高于腹主动脉瘤干预组(P<0.01)。腹主动脉瘤组大鼠瘤壁r Cklf1 mRNA、MMP2 mRNA表达量均明显高于腹主动脉瘤干预组(P<0.01);r Cklf1、MMP2主要在腹主动脉瘤壁中层病变严重区域表达上调;与腹主动脉瘤组相比,干预组r Cklf1、MMP2阳性表达明显减弱,炎症浸润、弹力纤维破坏程度明显减轻。结论氢气可通过抑制r Cklf1表达,抑制炎性细胞向腹主动脉受损区域聚集,降低MMP2表达合成,减缓中膜弹力纤维降解,干预腹主动脉瘤进展。

关键词：腹主动脉瘤趋化素样因子1

趋化素样因子1在大鼠主动脉损伤模型中的表达

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中华普通外科杂志 2009年第12期24卷 1015-1018页

作者：李清乐张小明沈晨阳解基严北京大学人民医院血管外科 100044 北京大学人民医院心脏外科 100044

目的探讨趋化素样因子1在动脉内膜增生病变中的作用。方法雄性SD大鼠85只，随机分组，损伤模型分为8组，每组10只，球囊损伤法建立腹主动脉球曩损伤模型，分别在术后12h，1、3d，1、2、4、6、8周取材。对照组5只，接受假手术。测量内膜... 详细信息

目的探讨趋化素样因子1在动脉内膜增生病变中的作用。方法雄性SD大鼠85只，随机分组，损伤模型分为8组，每组10只，球囊损伤法建立腹主动脉球曩损伤模型，分别在术后12h，1、3d，1、2、4、6、8周取材。对照组5只，接受假手术。测量内膜面积／中膜面积评估术后内膜增生程度；免疫组织化学法检测CKLF1蛋白水平的表达，IPP6．0测定阳性染色平均光密度作为评价指标；RT—PCR检测趋化素样因子1（CKLFI）在mRNA水平的表达，以B—aetin表达作为内参，CKLF1／β—actin比值作为CKLF1相对表达量。结果术后1周可见明显新生内膜形成，至术后4周内膜面积／中膜面积升高最明显，此后呈消退趋势，但仍明显高于术后1周及对照；免疫组化检测显示CKLF1在新生内膜表达强度高于中膜（P=0．016），新生内膜中CKLF1表达在术后1周较高；RT—PCR检测发现CKLF1表达在术后3d出现高峰，逐渐减退，但仍高于基础水平（P〈0．05）；内膜增生程度与CKLF1相对表达量呈正相关（R=0．70），但无统计学意义（P=0．188）。结论动脉损伤后趋化素样因子1表达上调，新生内膜中表达强度明显高于中膜组织，推测趋化素样因子1对内膜增生的发展可能起一定作用。

关键词：创伤和损伤主动脉趋化素样因子1 大鼠模型动物

抑制趋化素样因子1对变应性鼻炎白细胞介素-9表达和嗜酸性粒细胞的影响

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西部医学 2022年第8期34卷 1133-1139页

作者：张峻峥时文杰谢伟伟李海亮樊宏中南大学湘雅医学院附属海口医院耳鼻咽喉科海南海口570208

目的探究抑制趋化素样因子1(CKLF1)对变应性鼻炎(AR)大鼠内白细胞介素-9(IL-9)与嗜酸性粒细胞的影响。方法40只SPF级SD大鼠随机分为对照组、模型组、CKLF1抗体组(AR+CKLF1-C19组)、丙酸氟替卡松组(AR+FP组),每组10只。除对照组外,其余... 详细信息

目的探究抑制趋化素样因子1(CKLF1)对变应性鼻炎(AR)大鼠内白细胞介素-9(IL-9)与嗜酸性粒细胞的影响。方法40只SPF级SD大鼠随机分为对照组、模型组、CKLF1抗体组(AR+CKLF1-C19组)、丙酸氟替卡松组(AR+FP组),每组10只。除对照组外,其余各组大鼠均用卵清蛋白(OVA)和氢氧化铝[Al(OH)_(3)]致敏法诱导AR,AR+CKLF1-C19组AR激发前连续10 d分别在双侧鼻腔滴5μL CKLF1-C19肽干预,AR+FP组AR激发前连续10 d分别在双侧鼻腔滴5μL丙酸氟替卡松喷雾剂干预,对照组和模型组均同时在双侧鼻腔滴5μL生理盐水。末次鼻腔激发后,各组大鼠均进行表观行为学指标评分;ELISA法检测血清IL-9、免疫球蛋白E(IgE)、干扰素-γ(IFN-γ)水平;HE染色观察鼻黏膜组织嗜酸性粒细胞表达;瑞氏染色检测鼻腔内嗜酸性粒细胞数目;免疫组织化学染色检测鼻黏膜组织IL-9表达;实时荧光定量PCR和Western blot检测鼻黏膜组织嗜酸性粒细胞主要碱性蛋白(MBP)、嗜酸性粒细胞阳离子蛋白(ECP)、嗜酸性粒细胞过氧化物酶(EPO)在mRNA和蛋白水平上的表达。结果与对照组比较,模型组大鼠出现打喷嚏、流涕以及频繁抓鼻的现象,血清中IL-9、IgE水平升高,IFN-γ水平下降,鼻黏膜有水肿、黏膜层增厚以及黏膜上皮脱落的症状,嗜酸性粒细胞数目增加,鼻黏膜组织内IL-9阳性表达升高,MBP、ECP、EPO在mRNA和蛋白水平上的表达均上调(P<0.05);与模型组比较,AR+CKLF1-C19组和AR+FP组大鼠打喷嚏、流涕、抓鼻等行为减少,血清中IL-9、IgE水平下降,IFN-γ水平升高,鼻黏膜水肿及炎症细胞浸润减轻,嗜酸性粒细胞数目减少,鼻黏膜组织内IL-9阳性表达下降,同时,MBP、ECP、EPO在mRNA和蛋白水平上的表达也均下调(P<0.05)。结论抑制CKLF1能够明显降低变应性鼻炎大鼠嗜酸性粒细胞的浸润,抑制IL-9表达,从而对变应性鼻炎起到一定的治疗作用。

关键词：变应性鼻炎趋化素样因子1 嗜酸性粒细胞白细胞介素-9

人重组趋化素样因子1在果蝇S2细胞中的表达和功能研究

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中华微生物学和免疫学杂志 2008年第6期28卷 481-485页

作者：张颖妹李婷娄雅欣韩文玲马大龙北京大学人类疾病基因研究中心北京大学医学部免疫学系100083

目的在果蝇S2细胞中表达人趋化素样因子1（chemokine-like factor1，CKLF1），并对其分泌形式进行功能研究。方法构建pMT／V5-His—CKLF1表达质粒，转染S2细胞，筛选并鉴定阳性细胞克隆，用兔抗人CKLF1多肽抗体对其培养上清进行Western ... 详细信息

目的在果蝇S2细胞中表达人趋化素样因子1（chemokine-like factor1，CKLF1），并对其分泌形式进行功能研究。方法构建pMT／V5-His—CKLF1表达质粒，转染S2细胞，筛选并鉴定阳性细胞克隆，用兔抗人CKLF1多肽抗体对其培养上清进行Western blot检测，并分析其趋化活性和促C2C12细胞增殖活性。结果RT—PCR证明CKLF1在S2细胞中高效转录；通过Western blot在细胞培养上清中可检测到表达的重组CKLF1蛋白；其对人外周血中性粒细胞和淋巴细胞有较弱的趋化活性，对C2C12细胞具有增殖促进作用。结论在果蝇S2细胞中成功表达了人重组CKLF1，并证实其存在分泌形式且具有趋化活性和促C2C12细胞增殖活性。

关键词：趋化素样因子1 趋化因子 C2C12细胞