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宁夏医科大学学报 2023年第5期45卷 475-481页

作者：徐彧徐海瑾李家瑞孔斌李卉陆宏宋辉宁夏医科大学基础医学院医学遗传学与细胞生物学系银川750004 宁夏医科大学基础医学院生物化学与分子生物学系银川750004 宁夏医科大学基础医学院人体解剖与组织胚胎学系银川750004

目的探讨骨髓间充质干细胞(BMMSCs)外泌体的提取方法。方法提取大鼠原代BMMSCs,分别采用超速差速离心法和ExoQuick-TC^(TM)法提取外泌体,随后采用透射电子显微镜(TEM)观察形态特征,BCA测定蛋白浓度,Western blot检测典型标志蛋白质,... 详细信息

目的探讨骨髓间充质干细胞(BMMSCs)外泌体的提取方法。方法提取大鼠原代BMMSCs,分别采用超速差速离心法和ExoQuick-TC^(TM)法提取外泌体,随后采用透射电子显微镜(TEM)观察形态特征,BCA测定蛋白浓度,Western blot检测典型标志蛋白质,纳米颗粒跟踪分析仪(NTA)分析其粒径。结果通过TEM和NTA分析表明,两种提取方法均可得到具有双层膜、茶托样结构的囊泡,直径为30~150 nm。超速差速离心法提取的外泌体颗粒浓度[(399.00±55.56)×10^(8)particles·mL^(-1)vs.(7.94±0.50)×10^(8)particles·mL^(-1)]及电镜下数量[(13.53±2.55)个vs.(1.60±0.20)个]均较ExoQuick-TCTM法增加(P均超速差速离心法提取的外泌体蛋白浓度[(12.43±0.98)mg·mL^(-1)]较ExoQuick-TCTM法[(4.30±0.48)mg·mL^(-1)]增高(P超速差速离心法提取的外泌体标志性蛋白CD63和CD81的表达呈阳性,而ExoQuick-TC^(TM)法提取的外泌体呈阴性。结论超速差速离心法是一种更为可靠有效的BMMSCs外泌体提取方法。

关键词：大鼠骨髓间充质干细胞外泌体超速差速离心法 ExoQuick-TC^(TM)法

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