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尿激酶原激活是其催化纤溶酶原激活的限速步骤(英文)

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南京大学学报（自然科学版） 2005年第5期41卷 489-495页

作者：陈于红张菁刘建宁南京大学分子医学研究所

尿激酶原催化纤溶酶原的激活包括3个反应:(1)尿激酶原内在酶活性催化纤溶酶原转化为纤溶酶;(2)纤溶酶激活尿激酶原变成尿激酶;(3)尿激酶激活纤溶酶原,所以一直以来人们对尿激酶原激活纤溶酶原的过程知之甚少.研究发现EACA可以抑制尿激... 详细信息

尿激酶原催化纤溶酶原的激活包括3个反应:(1)尿激酶原内在酶活性催化纤溶酶原转化为纤溶酶;(2)纤溶酶激活尿激酶原变成尿激酶;(3)尿激酶激活纤溶酶原,所以一直以来人们对尿激酶原激活纤溶酶原的过程知之甚少.研究发现EACA可以抑制尿激酶原催化的纤溶酶原激活.通过EACA对上述3个反应的影响进行逐个分析,观察到在EACA浓度为2 .0 mmol/L时,尿激酶原内在酶活性催化纤溶酶原激活的反应速度提高了4 .5倍,尿激酶激活纤溶酶原的反应速度提高了6倍.相反地,纤溶酶激活尿激酶原变成尿激酶的反应被抑制了50 %,此反应决定了EACA对尿激酶原催化纤溶酶原激活反应的抑制作用.该结果提示尿激酶原催化纤溶酶原激活反应的限速步骤是纤溶酶激活尿激酶原变成尿激酶,缘于纤溶酶和尿激酶原的赖氨酸结合位点的相互作用.

关键词：尿激酶原尿激酶纤溶酶原激活赖氨酸结合位点 EACA

重组金黄色葡萄球菌次黄嘌呤单核苷酸脱氢酶与脂蛋白(a)的相互作用

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微生物学通报 2011年第9期38卷 1405-1411页

作者：许颖纪智星韩润林内蒙古农业大学兽医学院内蒙古呼和浩特010018 内蒙古农业大学血浆脂蛋白免疫学研究中心内蒙古呼和浩特010018

次黄嘌呤单核苷酸脱氢酶(IMPDH)是金黄色葡萄球菌(***)表面的纤溶酶原(Plg)受体之一,它可以通过赖氨酸结合位点(LBS)与Plg相结合。脂蛋白(a)[Lp(a)]中的载脂蛋白(a)[Apo(a)]与Plg有很高的同源性,即两者的Kringle结构域都含有LBS,其中Apo... 详细信息

次黄嘌呤单核苷酸脱氢酶(IMPDH)是金黄色葡萄球菌(***)表面的纤溶酶原(Plg)受体之一,它可以通过赖氨酸结合位点(LBS)与Plg相结合。脂蛋白(a)[Lp(a)]中的载脂蛋白(a)[Apo(a)]与Plg有很高的同源性,即两者的Kringle结构域都含有LBS,其中Apo(a)的KIV10含有强的LBS。因此本实验提出了Lp(a)应该能够与***表面的Plg受体相结合,进而可能竞争性抑制***与Plg结合的假说。本研究克隆了***的IMPDH基因,酶切后将其连接到表达载体pASK-IBA37中,并在大肠杆菌BL21中表达了该重组蛋白(rIMPDH)。通过酶联免疫吸附试验(ELISA)、亲和色谱层析及Western blot对rIMPDH与Lp(a)的相互作用机制进行了研究。结果表明rIMPDH可以通过LBS与Lp(a)和rKIV10发生特异性结合,而且一定浓度的赖氨酸类似物6-氨基己酸(EACA)可以抑制这种结合,然而本研究并未发现Lp(a)和rKIV10对rIMPDH与Plg的相互作用有明显的抑制。

关键词：次黄嘌呤单核苷酸脱氢酶金黄色葡萄球菌纤溶酶原赖氨酸结合位点脂蛋白(a)

重组apo(a) Kringle Ⅳ-10的纯化及生物活性

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郑州大学学报（医学版） 2002年第5期37卷 636-639页

作者：彭芳芳洪嘉玲喻红汪炳华殷以礼李小明武汉大学医学院生物化学教研室武汉430071

目的 :通过研究重组apo(a)KringleⅣ 1 0 (KⅣ 1 0 )的赖氨酸结合能力对纤溶酶原与内皮细胞结合的影响 ,探讨apo(a)在抑制纤溶过程中的作用 ,为Lp(a)致动脉粥样硬化机制研究提供依据。方法 :将含apo (a)野生型KⅣ 1 0 (wt KⅣ 1 0 /... 详细信息

目的 :通过研究重组apo(a)KringleⅣ 1 0 (KⅣ 1 0 )的赖氨酸结合能力对纤溶酶原与内皮细胞结合的影响 ,探讨apo(a)在抑制纤溶过程中的作用 ,为Lp(a)致动脉粥样硬化机制研究提供依据。方法 :将含apo (a)野生型KⅣ 1 0 (wt KⅣ 1 0 /Trp72 )和突变型KⅣ 1 0 (mut KⅣ 1 0 /Arg72 )基因片段的重组质粒 ,分别转化至E .coliDH5α菌株中并表达含这 2个重组片段的融合蛋白 ,通过Glutathione Agarosebeads亲和层析进行分离和提纯 ,经L Lys Sepharose 4B亲和层析检测其赖氨酸结合能力。再以异硫氰酸荧光素标记的纤溶酶原为配基 ,观察这 2种基因表达片段对纤溶酶原与人脐静脉内皮细胞结合的影响。结果 :实验结果显示 :在E .coliDH5α菌株中表达的GST wt KⅣ 1 0 /Trp72 能有效抑制纤溶酶原与人脐静脉内皮细胞的结合 ;而GST mut KⅣ 1 0 /Arg72 在任一浓度范围内均无这种抑制作用。结论 :apo (a)KⅣ 1 0对纤溶的抑制作用与其赖氨酸结合能力密切相关 ;而KⅣ 1 0的赖氨酸的结合能力与其赖氨酸结合位点中的Trp72

关键词：纯化生物活性内皮细胞纤溶酶原 apo(a)KringleⅣ-10 赖氨酸结合位点

重组A群链球菌三磷酸甘油醛脱氢酶与脂蛋白(a)的相互作用

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内蒙古农业大学学报（自然科学版） 2011年第3期32卷 27-31页

作者：代霄燕许丽萍白文成韩润林内蒙古农业大学兽医学院呼和浩特010019 血浆脂蛋白免疫学研究中心兽用疫苗国家工程实验室工艺技术研究室呼和浩特010018

三磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)是A群链球菌(group A Streptococcus,GAS)表面的纤溶酶原(Plg)受体之一,其C末端的赖氨酸残基可以与Plg的赖氨酸结合位点(LBS)相结合。脂蛋白(a)[Lp(a)]中的载脂蛋白(a)[Apo(a)]与Plg有很高的同源性。因此本实... 详细信息

三磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)是A群链球菌(group A Streptococcus,GAS)表面的纤溶酶原(Plg)受体之一,其C末端的赖氨酸残基可以与Plg的赖氨酸结合位点(LBS)相结合。脂蛋白(a)[Lp(a)]中的载脂蛋白(a)[Apo(a)]与Plg有很高的同源性。因此本实验室提出了Lp(a)可能与GAS表面的Plg受体相结合,进而可能竞争性抑制GAS与Plg结合的假说。本研究克隆了GAS的GAPDH及其C末端敲除赖氨酸残基的突变体基因,酶切后将其连接到表达载体pASK-IBA37中,并在大肠杆菌BL-21中表达了这两个重组蛋白(rGAPDH和rGAPDHΔ345)。通过酶联免疫吸附试验(ELISA)对rGAPDH和rGAPDHΔ345与Lp(a)的相互作用机制进行了研究。结果表明rGAPDHΔ345与Lp(a)的结合值比rGAPDH显著降低,说明rGAPDH及rGAPDHΔ345与Lp(a)通过LBS发生特异性结合,而且一定浓度的赖氨酸类似物6-氨基己酸(EACA)可以抑制这种结合,Lp(a)对rGAPDH与Plg的相互作用也有明显的抑制。

关键词：三磷酸甘油醛脱氢酶 A群链球菌纤溶酶原脂蛋白(a) 赖氨酸结合位点

重组A群链球菌三磷酸甘油醛脱氢酶与脂蛋白（a）的相互作用

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重组A群链球菌三磷酸甘油醛脱氢酶与脂蛋白（a）的相互作用

作者：代霄燕内蒙古农业大学

学位级别：硕士

三磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)是A群链球菌(group A Streptococcus, GAS)表面的纤溶酶原(Plg)受体之一,其C末端的赖氨酸残基可以与Plg的赖氨酸结合位点(LBS)相结合。脂蛋白(a)[Lp(a)]中的载脂蛋白(a)[Apo(a)]与Plg有很高的同源性,也含有LBS... 详细信息

三磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)是A群链球菌(group A Streptococcus, GAS)表面的纤溶酶原(Plg)受体之一,其C末端的赖氨酸残基可以与Plg的赖氨酸结合位点(LBS)相结合。脂蛋白(a)[Lp(a)]中的载脂蛋白(a)[Apo(a)]与Plg有很高的同源性,也含有LBS,因此本实验室提出了Lp(a)可能与GAS表面的Plg受体相结合,进而可能竞争性抑制GAS与Plg结合的假说。而且本实验室已经证明了GAS表面的烯醇化酶能够与Lp(a)发生特异性结合。为了更进一步探索Lp(a)是否与其它的GAS表面Plg受体结合,本研究克隆了GAS的GAPDH及其C末端敲除赖氨酸残基的突变体GAPDHΔ345基因,酶切后将其连接到表达载体pASK-IBA37中,并在大肠杆菌BL-21中表达了这两个重组蛋白(rGAPDH和rGAPDHΔ345)。通过酶联免疫吸附试验(ELISA)对rGAPDH和rGAPDHΔ345与Lp(a)的相互作用机制进行了研究。结果表明rGAPDHΔ345与Lp(a)的结合值比rGAPDH显著降低,而且一定浓度的赖氨酸类似物6-氨基己酸(EACA)可以抑制这种结合,说明rGAPDH及rGAPDHΔ345与Lp(a)通过LBS发生特异性结合。另外,Lp(a)对rGAPDH与Plg的相互作用也有明显的抑制。

关键词：三磷酸甘油醛脱氢酶 A群链球菌纤溶酶原脂蛋白(a) 赖氨酸结合位点

重组不可分型流感嗜血杆菌E蛋白与脂蛋白(a)的相互作用

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重组不可分型流感嗜血杆菌E蛋白与脂蛋白(a)的相互作用

作者：王瑜内蒙古农业大学

学位级别：硕士

E蛋白(Protein E,PE)是不可分型流感嗜血杆菌(Nontypeable Haemophilus influenza,NTHi)表面的一种纤溶酶原(Plasminogen,Plg)受体,其C末端含有两个赖氨酸残基。NTHi可通过其表面的PE与Plg结合,从而利用机体的纤溶系统深层入侵宿主。基... 详细信息

E蛋白(Protein E,PE)是不可分型流感嗜血杆菌(Nontypeable Haemophilus influenza,NTHi)表面的一种纤溶酶原(Plasminogen,Plg)受体,其C末端含有两个赖氨酸残基。NTHi可通过其表面的PE与Plg结合,从而利用机体的纤溶系统深层入侵宿主。基于脂蛋白(a)[Lipoprotein(a),Lp(a)]中载脂蛋白(a)[Apolipoprotein(a),Apo(a)]与Plg高度的同源性,本研究拟证明Lp(a)是否会与重组表达的PE(r PE)结合。首先原核表达并纯化了重组蛋白r PE及敲除C末端两个赖氨酸残基的r PEΔKK,再利用KBr密度梯度离心结合Q Sepharose?Fast Flow阴离子交换层析的方法分离人血浆Lp(a),最后通过酶联免疫吸附试验(Enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)、Pull down和Western blot等方法对r PE、r PEΔKK与Lp(a)的相互作用进行初步研究。结果表明:r PE与Lp(a)结合,但不与LDL结合,且r PEΔKK与Lp(a)的结合能力明显低于r PE;赖氨酸类似物6-氨基已酸(EACA)能有效抑制r PE与Lp(a)的结合;Lp(a)对r PE与Plg的结合具有微弱的抑制作用。实验结果说明r PE能够与Lp(a)结合,其中r PE的C末端赖氨酸残基和Apo(a)的赖氨酸结合位点(Lysine binding sites,LBS)是r PE与Lp(a)结合的主要位点。本研究首次证明了r PE能够与Lp(a)结合,为进一步研究Lp(a)的生理作用提供线索。

关键词：不可分型流感嗜血杆菌 PE蛋白脂蛋白(a) 纤溶酶原赖氨酸结合位点

无乳链球菌重组GapC蛋白与脂蛋白（a）的相互作用

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无乳链球菌重组GapC蛋白与脂蛋白（a）的相互作用

作者：张亚坤内蒙古农业大学

学位级别：硕士

GapC蛋白是无乳链球菌(Sterptococcus agalactiae)表面的纤溶酶原(Plasminogen,Plg)受体之一,该蛋白可通过其C末端的赖氨酸残基与Plg的赖氨酸结合位点(Lysine binding site,LBS)结合。由于Plg与脂蛋白(a)[Lipoprotein(a),Lp(a)]结构中的载脂蛋白(a)[Apo(a)]具有高度同源性,故本文旨在研究GapC蛋白与Lp(a)的相互作用。利用大肠杆菌原核表达系统重组表达了无乳链球菌的gapC基因及缺失编码末位赖氨酸三碱基的突变体基因gapC△K,经TALON SuperflowTM填料过柱纯化后,得到对应重组蛋白rGapC和rGapC△K,通过酶联免疫吸附试验(ELISA)、亲和色谱层析(Pull down)及蛋白质印迹法(Western Blot)研究rGapC与Lp(a)的相互作用。实验结果发现,rGapC能与Lp(a)结合,且结合值明显高于rGapC△K;rGapC和rGapC△K均不与对照低密度脂蛋白Low density lipoprotein(LDL)结合;rGapC能与Plg结合,且结合值高于rGapC△K;赖氨酸类似物6-氨基乙酸(EACA)可以抑制rGapC与Lp(a)的结合;Lp(a)能抑制rGapC和Plg结合,但抑制作用不显著。结果表明,rGapC能与Lp(a)的结合,且是通过rGap C的C末端的赖氨酸残基与Lp(a)的Apo(a)中LBS结合的,本研究首次探究了rGapC与Lp(a)的结合作用及主要结合位点,为进一步研究Lp(a)的生理作用和与微生物的关系提供参考依据。

关键词：无乳链球菌 GapC蛋白脂蛋白(a) 纤溶酶原赖氨酸结合位点

重组金黄色葡萄球菌次黄嘌呤单核苷酸脱氢酶与脂蛋白（a）的相互作用

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重组金黄色葡萄球菌次黄嘌呤单核苷酸脱氢酶与脂蛋白（a）的相互...

作者：许颖内蒙古农业大学

学位级别：硕士

金黄色葡萄球菌（S. aureus）表面的纤溶酶原受体能够与宿主纤溶酶原（Plg）结合,此外,与病菌结合的Plg可以在宿主或病菌的Plg激活剂的作用下转变为纤溶酶（Pm）,从而协助S. aureus穿越宿主组织屏障,达到深层入侵的目的。次黄嘌呤... 详细信息

金黄色葡萄球菌（S. aureus）表面的纤溶酶原受体能够与宿主纤溶酶原（Plg）结合,此外,与病菌结合的Plg可以在宿主或病菌的Plg激活剂的作用下转变为纤溶酶（Pm）,从而协助S. aureus穿越宿主组织屏障,达到深层入侵的目的。次黄嘌呤单核苷酸脱氢酶（IMPDH）是S. aureus表面的纤溶酶原（Plg）受体之一,它可以与Plg的赖氨酸结合位点（LBS）相结合。脂蛋白（a）中的载脂蛋白（a）[Apo（a）]与Plg有很高的同源性,且两者的Kringle结构域都含有LBS,其中Apo（a）的KIV10含有高亲和力的LBS。因此本实验提出了Lp（a）可以与S. aureus表面的Plg受体相结合,进而可能竞争性抑制S. aureus与Plg结合的假说,目前已经证明了Lp（a）可以与S. aureus表面的Plg受体之一α-烯醇化酶（α-enolase）相结合。本研究对S. aureus表面的另外一种Plg受体IMPDH与Lp（a）的相互作用进行了研究,首先克隆了S. aureus CMCC26003的IMPDH基因,酶切后将其连接到表达载体pASK-IBA37中,并在大肠杆菌BL?21中表达了该重组蛋白（rIMPDH）。通过酶联免疫吸附试验（ELISA）、亲和色谱层析及Western blot对rIMPDH与Lp（a）的相互作用机制进行了研究。结果表明rIMPDH可以与Lp（a）和重组KIV10（rKIV10）的LBS发生特异性结合,而且一定浓度的赖氨酸类似物6-氨基己酸（EACA）可以抑制这种结合,表明Apo（a）中的LBS参与了相互作用,然而本研究并未发现Lp（a）或rKIV10对rIMPDH与Plg的相互作用有明显的抑制。

关键词：金黄色葡萄球菌纤溶酶原次黄嘌呤单核苷酸脱氢酶赖氨酸结合位点脂蛋白(a)

重组铜绿假单胞菌二氢硫辛酰胺脱氢酶与脂蛋白(a)的相互作用

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重组铜绿假单胞菌二氢硫辛酰胺脱氢酶与脂蛋白(a)的相互作用

作者：王洋内蒙古农业大学

学位级别：硕士

二氢硫辛酰胺脱氢酶(Dihydrolipoamide dehydrogenase, Lpd)是铜绿假单胞菌(Pseudomnas aeruginosa)表面的一种纤溶酶原(Plasminogen, Plg)受体,Lpd肽链中含有的赖氨酸残基(1ysine)可以与P1g的赖氨酸结合位点(1ysine binding site, LBS)发生特异性结合。而脂蛋白(a)[Lipoprotein(a), Lp(a)]中的载脂蛋白(a)[Apo(a)]与Plg有极高的同源性,它也含有LBS。因此我们实验室提出Lp(a)可以通过与铜绿假单胞菌表面的Plg受体Lpd特异性结合,进而竞争性抑制P1g与Lpd结合的假说。为了验证提出的假说,本研究通过基因敲除和点突变等技术克隆表达并纯化了rLpd及其突变体rLpdK476A、rLpdK477A以及rLpdΔKKR。通过酶联免疫吸附试验、Western blot以及亲和色谱层析实验对Lp(a)与Lpd的相互作用及其作用机制进行研究。研究结果表明rLpd可以与Lp(a)结合却不与LDL结合,说明Lp(a)是通过Apo( a)与Lpd发生相互作用的。1mmol/L的6-氨基己酸(EACA)对rLpd与Lp(a)的结合起到了显著的抑制作用,进一步证明了Apo(a)中的LBS是这种特异性结合的主要位点。另外,rLpdAKKR与Lp(a)的结合值与rLpd相比有极显著的降低,这表明Lpd肽链第476、477两个赖氨酸残基是它与Lp(a)结合的主要位点,Lp(a)能够显著地竞争性抑制rLpd与Plg的结合,说明rLpd与Lp(a)和P1g的结合机制相似。

关键词：二氢硫辛酰胺脱氢酶铜绿假单胞菌脂蛋白(a) 纤溶酶原赖氨酸结合位点