检索结果-南通市图书馆

作者：黄晓淋福建医科大学

学位级别：硕士

目的随着科学技术的发展，越来越多的粘结相关材料被广泛应用于医学科学研究，并为临床科学研究作出许多重要贡献。然而，现有材料不仅在量或质方面无法满足日新月异的科学需求，且生物相容性差。因此，寻找一种行之有效、可大量生... 详细信息

目的随着科学技术的发展，越来越多的粘结相关材料被广泛应用于医学科学研究，并为临床科学研究作出许多重要贡献。然而，现有材料不仅在量或质方面无法满足日新月异的科学需求，且生物相容性差。因此，寻找一种行之有效、可大量生产、生物相容性好的粘结材料是目前亟需解决的问题。本研究根据贻贝能够超强粘附在各种物体表面的特性，选用贻贝足丝蛋白（Mussel Foot Protein, Mefp）及其粘附关键因子L-3,4-二羟基苯丙氨酸（L-Dioxyphenylalanine, L-DOPA）进行牙龈上皮细胞的粘附实验，同时对比几种牙龈上皮细胞原代培养的方法，通过观察细胞形态、绘制细胞生长曲线、测量细胞粘附量以及后续钙离子浓度的测定评价Mefp和L-DOPA对牙龈上皮细胞的粘结作用，旨在寻找一种利于牙龈上皮细胞原代及传代培养的方法，为临床进行牙龈上皮细胞的研究提供理论与技术支持。方法 1.分别采用单纯Dispaes酶消化、单纯玻片覆盖组织块法以及Dispase酶消化联合玻片覆盖组织块法培养Beagle犬牙龈上皮细胞，通过观察细胞形态以及细胞生长时间，对比寻找最适细胞培养方法。 2.培养皿表面分别经Mefp、L-DOPA、多聚赖氨酸（Poly-L-Lysine,PLL）、蒸馏水处理后接种一定量细胞，通过二眯基苯基吲哚（4,6-Diamidino-2-Phenylindole,DAPI）染色计数计算细胞粘附量;酶标仪测量光密度值（Optical Density, OD），绘制细胞生长曲线;扫描电子显微镜（Scanning Electron Microscopy, SEM）观察细胞形态;细胞内钙离子浓度测定分析细胞增殖能力。并与空白组的作用进行对比。结果 1.单纯Dispase酶消化培养的牙龈上皮细胞贴壁少，培养成功率为0.0%。单纯玻片覆盖组织块法培养细胞贴壁多，但成纤维细胞污染严重，培养成功率仅为30.5%。Dispase酶消化联合玻片覆盖组织块法培养，短时间内可获得大量牙龈上皮细胞，且不存在成纤维细胞污染，成功率可达91.6%。卡方检验表明，各组细胞培养成功率有统计学意义（P＜0.05）。 2. Mefp处理组与空白组相比，镜下DAPI染色细胞多，细胞呈扁圆形，棘明显可见，48h细胞OD值高（P＜0.05），呈典型S型生长，细胞内钙离子浓度也较空白组高（P＜0.05）;但与PLL处理组相比并无显著差异（P＞0.05）。L-DOPA处理组与空白组相比，镜下DAPI染色细胞多，细胞呈扁圆形，伪足明显，48h细胞OD值高（P＜0.05），呈典型S型生长，细胞内钙离子浓度也较高（P＜0.05）;而与Mefp处理组及PLL处理组相比，DAPI染色细胞及细胞内钙离子浓度亦显著增多（P＜0.05）。结论 1. Dispase酶消化联合玻片覆盖组织块法进行牙龈上皮细胞培养，可短时间获得大量牙龈上皮细胞，此法简单、有效。 2. Mefp及L-DOPA可显著提高牙龈上皮细胞的粘附，其作用同PLL相似。

关键词：牙龈上皮细胞细胞粘附贻贝足丝蛋白 L-3,4-二羟基苯丙氨酸多聚赖氨酸

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新型贻贝足丝蛋白生物粘合剂的初步研究

新型贻贝足丝蛋白生物粘合剂的初步研究

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作者：黄娟浙江理工大学

学位级别：硕士

海洋贻贝足丝蛋白(Mussel foot proteins,Mfp)具备高强度、高韧性、高防水性和极强的基体黏附性能,同时具有很好的生物相容性和可降解性,是一类极具优势和潜力的生物粘合剂。研究表明Mfp3的粘性与其特殊的酪氨酸翻译后修饰产物二羟基苯... 详细信息

海洋贻贝足丝蛋白(Mussel foot proteins,Mfp)具备高强度、高韧性、高防水性和极强的基体黏附性能,同时具有很好的生物相容性和可降解性,是一类极具优势和潜力的生物粘合剂。研究表明Mfp3的粘性与其特殊的酪氨酸翻译后修饰产物二羟基苯丙氨酸(DOPA,俗称多巴)相关。体外酶催化重组表达Mfp3以生产粘性蛋白的方法由于Mfp3自身水溶性差、酶选择性不高等原因普遍存在催化效率低、修饰位点无选择性的缺点,致使所得产物无法与天然贻贝足丝蛋白等效。此外,无脊椎动物细胞的培养一直是世界性的难题,导致贻贝足腺细胞体外培养体系难以建立。遗传编码非天然氨基酸技术(Genetic encoding unnatural amino acid,GEUAA)利用正交氨酰tRNA合成酶可以在体内将修饰后的非天然氨基酸定点地引入到蛋白的特异位点,原理上可实现Mfp3的高效和定位DOPA修饰。本研究利用GEUAA技术,拟通过氨酰tRNA合成酶突变库构建、筛选的方式获取DOPA类似物L-Mimosine特异性的正交氨酰tRNA合成酶,在翻译的过程中实现Mfp3定点L-Mimosine修饰。为此,我们构建了>10库容的大肠杆菌吡咯酪氨酸氨酰tRNA合成酶突变库HJ1;然后使用HJ1库对非天然氨基酸HepoK及DOPA类似物L-Mimosine进行了大量筛选,已获得一个对HepoK特异的正交氨酰tRNA合成酶,使HJ1库的有效性得以验证。与此同时,在Mfp3蛋白的N端引入了SUMO标签以增加重组Mfp3的水溶性,所得SUMO-Mfp3融合蛋白经体外酶催化可获>0.037 MPa的粘附力。论文研究结果为新型贻贝足丝蛋白生物粘合剂的研制提供了坚实的基础。

关键词：贻贝足丝蛋白多巴 SUMO标签遗传编码非天然氨基酸技术正交氨酰tRNA合成酶

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钛表面贻贝蛋白包被在经皮种植体表面处理中的应用

钛表面贻贝蛋白包被在经皮种植体表面处理中的应用

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第十六次全国环氧树脂应用技术学术交流会暨学会西北地区分会第五次学术交流会暨西安粘接技术协会学术交流会

作者：王忠山秦海燕唐立辉董岩卢帅杜静赵铱民第四军医大学口腔医学院解放军第454医院口腔科

目的:观察人真皮成纤维细胞在两种贻贝足丝蛋白提取物Usun-afix和BD CELL-TAKTM试剂包被的钛表面的粘附和增殖状况,研究是否能够用于经皮种植体表面处理。方法:人皮肤成纤维细胞原代培养,选取P4代细胞接种到3种(n=5)培养基底上:(1)不做... 详细信息

目的:观察人真皮成纤维细胞在两种贻贝足丝蛋白提取物Usun-afix和BD CELL-TAKTM试剂包被的钛表面的粘附和增殖状况,研究是否能够用于经皮种植体表面处理。方法:人皮肤成纤维细胞原代培养,选取P4代细胞接种到3种(n=5)培养基底上:(1)不做处理的光滑钛表面(对照组);(2)Usun-afix包被的钛表面;(3)BD CELL-TAK包被的钛表面。MTT法检测1、3、5天细胞在三种钛表面的增殖数量;利用Hoechst染色,荧光显微镜下计数法检测1h时间点细胞粘附情况;利用DiI-AcLDL,荧光染色结合MTT法检测15min、30min、1h、2h、4h时间点细胞的黏附状况。结果:细胞活性实验:第1、3、5天成纤维细胞在3种表面活性均较好,3组之间无明显统计学差异(p>0.05);细胞黏附作用:Hoechst染色荧光显微镜下计数显示在1h时间点,第2组、3组与第1组相比均有明显统计学差异(p贻贝足丝蛋白提取物Usun-afix和BD CELL-TAK试剂包被的钛表面,有利于促进成纤维细胞在钛种植体表面粘附,尽快形成稳定的生物学封闭,在种植体植入早期尽量减轻上皮下行和细菌侵袭,进而提高经皮种植体植入的成功率,而蛋白本身对成纤维细胞的增殖能力没有明显的影响。

关键词：贻贝足丝蛋白成纤维细胞种植体经皮部 MTT法 Hoechst染色 DiI-AcLDL荧光染色

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含儿茶酚基团的湿态组织粘附水凝胶

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化学进展 2023年第4期35卷 560-576页

作者：陈一明李慧颖倪鹏方燕刘海清翁云翔福建师范大学化学与材料学院福州350007

湿态粘附作用对于生命的孕育和发展具有重要意义。水凝胶是一类兼具固液特性的智能材料,组织粘附水凝胶因多功能性和生物相容性而被广泛应用于伤口闭合和修复、细胞工程、组织工程等领域。然而,湿态组织表面的水合层阻碍了组织粘附水凝... 详细信息

湿态粘附作用对于生命的孕育和发展具有重要意义。水凝胶是一类兼具固液特性的智能材料,组织粘附水凝胶因多功能性和生物相容性而被广泛应用于伤口闭合和修复、细胞工程、组织工程等领域。然而,湿态组织表面的水合层阻碍了组织粘附水凝胶与组织表面形成界面粘附键。面对这一挑战,受海洋贻贝足丝蛋白中DOPA的儿茶酚基团是水下粘附的关键结构的启发,含儿茶酚基团的湿态组织粘附水凝胶的研究引起了广泛关注。本综述介绍了贻贝足丝蛋白(Mfps)的结构及湿态粘附机理,并将儿茶酚衍生物分为天然Mfps或利用基因工程合成的Mfps、含儿茶酚基团的小分子化合物、儿茶酚基团改性的天然高分子以及含儿茶酚基团的合成功能高分子;随后,概述近十年含儿茶酚基团的湿态组织粘附水凝胶在组织创口修复材料、生物涂层材料、靶向型药物输送材料、生物电子设备材料的研究进展;文末,展望了此类水凝胶材料未来发展面临的机遇和挑战。

关键词：贻贝足丝蛋白粘附机理儿茶酚衍生物湿态组织粘附水凝胶

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双组分快速固化生物软组织黏合剂的研制

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生物医学工程学杂志 2018年第6期35卷 921-927页

作者：黄娟李浩榕王谦浙江理工大学生命科学学院杭州310018 中国科学院理化技术研究所杭州研究院杭州310018

贻贝足丝蛋白(MFp)是一类能够在水下迅速固化,并能黏附在不同基材表面的特殊蛋白质,作为蛋白类生物黏合剂具有广泛的应用前景。本文在大肠杆菌中高效可溶性地表达了贻贝足丝融合蛋白Sumo-Fp3(SFp3),并通过蘑菇酪氨酸酶在柱催化,将其中... 详细信息

贻贝足丝蛋白(MFp)是一类能够在水下迅速固化,并能黏附在不同基材表面的特殊蛋白质,作为蛋白类生物黏合剂具有广泛的应用前景。本文在大肠杆菌中高效可溶性地表达了贻贝足丝融合蛋白Sumo-Fp3(SFp3),并通过蘑菇酪氨酸酶在柱催化,将其中约5%的酪氨酸残基转化为DOPA。在含DOPA的SFp3(DSFp3)中加入分子量为1 500 kD的透明质酸后,形成的双组分生物胶水在牛皮表面的黏附力超过氰基丙烯酸盐组织粘合剂Dermabond?的两倍,并在5 min内达到最大黏附强度的52%。通过生物膜层干涉技术和扫描电子显微镜,观测到透明质酸与DSFp3存在静电层层组装行为,并形成紧密片层结构。本研究为蛋白质类生物胶水黏附强度低、固化慢提供了一种解决方法和理论基础。

关键词：贻贝足丝蛋白透明质酸黏附蛋白层层组装快速固化

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基于DOPA的超分子多肽材料的制备与研究

基于DOPA的超分子多肽材料的制备与研究

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作者：王天阔南京大学

学位级别：硕士

海洋生物贻贝可以在海水中自由的黏附于各种礁石,船舶等物体表面而不会脱落,这主要是依靠它的足丝的强大的黏附能力。研究表明,贻贝足丝之所以能有如此强大的黏附能力,与其足丝蛋白中所含有的一个重要的氨基酸有关,即L-Dopa(左旋多巴)... 详细信息

海洋生物贻贝可以在海水中自由的黏附于各种礁石,船舶等物体表面而不会脱落,这主要是依靠它的足丝的强大的黏附能力。研究表明,贻贝足丝之所以能有如此强大的黏附能力,与其足丝蛋白中所含有的一个重要的氨基酸有关,即L-Dopa(左旋多巴)。基于这一结论,关于多巴黏附机制的探究以及多巴相关的高分子材料和黏附剂的发展与应用便迅速成为了生物仿生材料领域一个非常热门的研究方向。人们希望通过对于多巴的探索,揭示贻贝足丝蛋白黏附能力的具体作用机制,并能够帮助设计生产出新型的仿生材料和具有高度环境适应性的生物黏附剂。论文主要分为了四章,在第一章中,我们主要介绍了本文所论述的问题的背景知识,包括多肽自组装机制和多肽自组装水凝胶的发展,贻贝足丝蛋白以及L-Dopa的相关知识,并将二者结合,介绍了目前多巴在多肽自组装材料体系中的一些应用与发展现状,以及未来的研究前景。最后简要介绍了一下整个实验中所用到的基于原子力显微镜的单分子力谱技术。在第二章中,我们具体研究了多巴与正电荷协同性吸附的作用机理。在贻贝足丝蛋白中,除了多巴之外,还含有很多带有正电荷的赖氨酸,多巴与赖氨酸的正电荷之间存在着协同性吸附的效果,但是这种效果的具体作用原理仍需进一步研究和探索。我们首先是合成了两种二肽,分别是赖氨酸氨基侧链受保护的赖氨酸-多巴和多巴-赖氨酸,对照组则是通过化学手段脱去保护基的赖氨酸-多巴和多巴-赖氨酸。然后将它们修饰到针尖上,利用单分子力谱技术测试这些二肽分子和云母以及二氧化钛基板之间相互作用强度的大小。实验结果表明,赖氨酸侧链氨基所带的正电荷确实可以和多巴产生协同性吸附的效果,并且这种协同性吸附效果和分子内的受力分布有关。我们的研究结果解释了贻贝足丝蛋白中的多巴和赖氨酸所带正电荷的协同性吸附,为制作新型人工超分子材料提供了一些新的启示。第三章则介绍了含多巴的超分子多肽水凝胶黏附能力的研究与应用。我们知道多巴是贻贝足丝蛋白能够行使黏附功能的一个重要组成部分。现今的科学研究中也有越来越多的科学工作者开始利用多巴来制备新型人工黏附剂,本章所讨论的内容就是基于此设计了一种含多巴的超分子多肽水凝胶,并利用单分子力谱技术测试了其黏附性能以及和细胞之间的相互作用强度,实验结果表明,含多巴的超分子水凝胶具有非常优异的黏附性能并且对细胞也有很好的黏附效果。随后我们就此结果进行了细胞黏附与释放的应用实验,结果表明含多巴的超分子水凝胶可以很好的吸附细胞,甚至优于一些生物黏附剂,并且只需改变环境pH即可释放细胞,整个过程也不会对细胞的活性产生影响。本章的研究结果展示了含多巴的超分子水凝胶优异的黏附能力以及它在细胞运载方面的巨大应用前景,同时为研制新型细胞运载材料提供了启示。最后,我们对以上所有工作做了一个总结并探讨了这个领域的未来发展前景。

关键词：贻贝足丝蛋白多巴原子力显微镜单分子力谱技术协同性吸附水凝胶细胞黏附

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