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质膜完整性在中华绒螯蟹（Eriocheir Sinensis）精子质量评价研究中的应用

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质膜完整性在中华绒螯蟹（Eriocheir Sinensis）精子质量评价研究...

作者：马强华东师范大学

学位级别：硕士

一、两种获得中华绒螯蟹(Eriocheir sinensis)游离精子方法的比较研究在pH 7. 4的条件下,采用不同的温度、酶浓度和作用时间进行了正交实验研究了胰蛋白酶消化中华绒螯蟹精荚获得游离精子的最佳反应条件。以每克精荚获得的精子数量为判... 详细信息

一、两种获得中华绒螯蟹(Eriocheir sinensis)游离精子方法的比较研究在pH 7. 4的条件下,采用不同的温度、酶浓度和作用时间进行了正交实验研究了胰蛋白酶消化中华绒螯蟹精荚获得游离精子的最佳反应条件。以每克精荚获得的精子数量为判据,发现酶作用时间是主要的影响因子,其次是温度和酶浓度。酶消化的最适反应条件是:温度为37℃,酶浓度为0. 20%,作用时间为5 min。酶消化法与机械匀浆法的比较研究发现,酶消化法从每克精荚中获得的精子量为7. 41×108个,显著高于匀浆法;且精子的死亡率为4. 75%,显著低于匀浆法。此外,用人工诱导顶体反应法进一步检测酶消化法以及机械匀浆法所获得精子的顶体反应能力,发现酶消化法获得精予的顶体反应率为62. 3%,而匀浆法为64. 5%,两者无显著性差异。因此,酶消化获得游离精予的方法明显优于机械匀浆法。二、两种检测中华绒螯蟹(Eriocheir sinensis)精子活力方法的研究本文采用台盼兰和伊红染色法对中华绒螯蟹精子活力进行了评价研究。结果表明两种染色法中死、活精子分别呈现出明显不同的染色特征:活精子无色透明,顶体中央凸起呈圆锥状,光学显微镜下可见到核杯发出的辐射臂,细胞边界清晰可辨;而死亡精子项体着色且中央有一染色较深圆斑,核杯染色不明显,细胞体积变大,辐射臂消失,边界不明显。而两种染色法最适染液浓度和时间是0. 25%的伊红和0. 5%的台盼兰染色15min。然后对两种染色方法的相关性进行了分析。将新鲜精子和处理致死精子以不同的体积混合,配成含有死精子比例为10%-90%的9个浓度梯度,将其视为该样本死精子含量的理论值;用两种染色法检测这些精子样品的死亡率。结果显示:台盼兰法和伊红法测得的结果与理论值显著正相关(P性。三、荧光分光光度计分析中华绒螯蟹精子质膜的完整性

关键词：中华绒螯蟹精子获得胰蛋白酶消化法机械匀浆法台盼兰伊红质膜完整性流式细胞仪精子活力

SYBR-14/PI双染法流式细胞术检测精子质膜完整性的研究

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中华男科学杂志 2010年第7期16卷 589-593页

作者：周鑫夏欣一曹奇康宁范晓博邵永李瑛黄宇烽南京师范大学生命科学学院江苏南京210046 南京军区南京总医院解放军临床检验医学研究所江苏南京210002 江苏省计划生育科学技术研究所江苏南京210036

目的:探讨应用荧光染料SYBR-14/碘化丙啶(SYBR-14/PI)双色标记法进行流式细胞术检测精子质膜完整性的可行性及其临床意义。方法:收集208例男性精液标本,按WHO精液分析标准分为正常组(n=31)与异常组(n=177)。通过计算机辅助精液分析系统... 详细信息

目的:探讨应用荧光染料SYBR-14/碘化丙啶(SYBR-14/PI)双色标记法进行流式细胞术检测精子质膜完整性的可行性及其临床意义。方法:收集208例男性精液标本,按WHO精液分析标准分为正常组(n=31)与异常组(n=177)。通过计算机辅助精液分析系统进行精液常规分析。精液标本洗涤处理后经SYBR-14/PI双染后上流式细胞仪(FCM)分析,用发绿色荧光精子百分率(SYBR-14+/PI-%)表示质膜完整精子(PMI)的比例。结果:正常组与异常组SYBR-14+/PI-与SYBR-14-/PI+精子百分率均存在统计学差异(P均质膜完整性具有可行性,可用于评估男性生育力。

关键词： SYBR-14/PI双染法精子质膜完整性流式细胞术

流式细胞术检测精索静脉曲张患者精子质膜完整性的研究

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中华男科学杂志 2011年第11期17卷 984-988页

作者：安丽梅马洁桦李卫巍夏欣一黄宇烽王文兵江苏大学生命科学研究院江苏镇江212013 南京军区南京总医院解放军临床检验医学研究所江苏南京210002

目的:应用荧光染料SYBR-14/PI双色标记法进行流式细胞术检测精索静脉曲张患者精子质膜的完整性并探讨其临床意义。方法:随机收集120例男性精液标本,其中90例左侧精索静脉曲张患者分为3组:VC1组(精索静脉曲张Ⅰ度,n=30)、VC2组(精索静脉... 详细信息

目的:应用荧光染料SYBR-14/PI双色标记法进行流式细胞术检测精索静脉曲张患者精子质膜的完整性并探讨其临床意义。方法:随机收集120例男性精液标本,其中90例左侧精索静脉曲张患者分为3组:VC1组(精索静脉曲张Ⅰ度,n=30)、VC2组(精索静脉曲张Ⅱ度,n=30)和VC3组(精索静脉曲张Ⅲ度,n=30),正常生育男性为正常对照组(n=30)。通过计算机辅助精液分析系统进行精液常规分析。精液标本经PBS洗涤处理后用荧光染料SYBR-14/碘化丙锭(PI)双染后上流式细胞仪分析,用发绿色荧光精子百分率(SYBR-14+/PI-%)表示质膜完整精子(PMI)的比例,检测精子质膜完整性,并预见精子的受精能力。结果:精索静脉曲张各组患者与正常对照组之间SYBR-14+/PI-%、SYBR-14-/PI+%均存在统计学差异(P质膜完整性指标(SYBR-14+/PI-%)的百分率分别是:[(54.85±3.78)%]、[(45.37±4.12)%]、[(35.14±4.91)%],均显著低于正常对照组[(70.79±6.71)%],其活力顺序为VC3性分析表明:SYBR-14+/PI-%与精子活动率呈显著正相关(r=0.965,P性差异(P>0.05)。结论:应用流式细胞术SYBR-14/PI双染法能快速、准确地检测精子质膜完整性,精索静脉曲张引起精子质膜完整性下降,可能是导致男性不育的重要原因之一。

关键词：精索静脉曲张精子 SYBR-14/PI双染法质膜完整性流式细胞术

溶脲脲原体感染对男性不育患者精子质膜完整性的影响

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中华男科学杂志 2011年第12期17卷 1069-1072页

作者：夏欣一安丽梅李卫巍李科邵永商学军姚兵崔英霞黄宇烽南京军区南京总医院男科江苏南京210002

目的:应用荧光染料SYBR-14/碘化丙锭(PI)双标法流式细胞术检测溶脲脲原体(Uu)感染对男性不育患者精子质膜完整性的影响。方法:收集63例男性精液标本,分为Uu感染组(n=32)和正常对照组(n=31)。通过计算机辅助精液分析系统进行精液常规分析... 详细信息

目的:应用荧光染料SYBR-14/碘化丙锭(PI)双标法流式细胞术检测溶脲脲原体(Uu)感染对男性不育患者精子质膜完整性的影响。方法:收集63例男性精液标本,分为Uu感染组(n=32)和正常对照组(n=31)。通过计算机辅助精液分析系统进行精液常规分析,培养法进行Uu检测。精液标本经PBS洗涤处理后用荧光染料SYBR-14/PI双染后上流式细胞仪分析,用发绿色荧光精子百分率(SYBR-14+/PI-%)表示质膜完整精子的比例,检测精子质膜完整性。结果:Uu感染组精子质膜完整性[(45.14±10.69)%versus(72.68±9.91)%]和(a+b)级精子百分率[(23.29±8.81)%versus(46.32±9.54)%]均显著低于正常对照组(P性(P>0.05)。结论:Uu感染引起精子质膜完整性下降,可能是导致男性不育的重要原因之一。

关键词：溶脲脲原体 SYBR-14/PI双染法精子质膜完整性流式细胞术

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流式细胞术检测吸烟对精子质膜完整性的影响

中华男科学杂志 2012年第12期18卷 1093-1096页

作者：李卫巍李娜吴秋月夏欣一崔英霞黄宇烽姚勤江苏大学生命科学研究院江苏镇江212013 南京军区南京总医院解放军临床检验医学研究所江苏南京210002

目的:应用荧光染料SYBR-14/PI双色标记法进行流式细胞术检测不育患者精子质膜完整性,分析吸烟对精子质膜完整性的影响并探讨其临床意义。方法:收集202例男性精液标本,其中132例为本院就诊男性不育患者,分为大烟量组(n=68)与小烟量组(n=6... 详细信息

目的:应用荧光染料SYBR-14/PI双色标记法进行流式细胞术检测不育患者精子质膜完整性,分析吸烟对精子质膜完整性的影响并探讨其临床意义。方法:收集202例男性精液标本,其中132例为本院就诊男性不育患者,分为大烟量组(n=68)与小烟量组(n=64),正常生育男性为正常对照组(n=70)。通过计算机辅助精液分析系统进行精液常规分析。精液标本经PBS洗涤处理后用荧光染料SYBR-14/碘化丙锭(PI)双染后上流式细胞仪分析,用SYBR-14+/PI-(绿)表示质膜完整精子(PMI);SYBR-14-/PI+(红)表示质膜破损而坏死的精子;SYBR-14+/PI+(绿,红)表示正处于由活到死过度状态的精子。检测精子质膜完整性,并对精子质膜完整性与部分精液参数做相关性分析。结果:大烟量组与小烟量组质膜破损的坏死精子(SYBR-14-/PI+%)、过渡态的精子(SYBR-14+/PI-%)与正常对照组存在显著差异(P质膜完整性。吸烟会导致精子质膜完整性下降,引起精子活力下降,可能是导致男性不育的重要原因之一。

关键词：吸烟精子质膜完整性流式细胞术

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低温保存对绵羊精子质膜完整性的影响

黑龙江畜牧兽医 2012年第3期 48-50页

作者：徐振军刘黎明刘冰赵冰张红霞黄亚斐赤峰学院生命科学学院内蒙古赤峰024000

为了探讨低温保存对绵羊精子质膜完整性的影响,研究采用低渗肿胀-伊红拒染(HOS-EY)法检测低温保存前后绵羊精子头膜和尾膜的完整性。试验设计了5个HOS-EY低渗染液浓度梯度组合(110,130,150,170,190 mOsm),按精子尾部肿胀与否和头部着色... 详细信息

为了探讨低温保存对绵羊精子质膜完整性的影响,研究采用低渗肿胀-伊红拒染(HOS-EY)法检测低温保存前后绵羊精子头膜和尾膜的完整性。试验设计了5个HOS-EY低渗染液浓度梯度组合(110,130,150,170,190 mOsm),按精子尾部肿胀与否和头部着色与否分为4种类型进行统计。结果表明:低温保存后,绵羊精子头膜、尾膜均完整的Ⅳ型精子发生率和头膜、尾膜均损伤的Ⅰ型精子发生率与鲜精相比分别极显著减少和增多(P质膜完整性有极显著影响;在低温保存过程中头膜损伤-尾膜完整的Ⅱ型精子发生率极显著增多(P完整-尾膜损伤的Ⅲ型精子发生率显著减少(P<0.05),说明精子头膜或尾膜的损伤是独立发生的,且头膜比尾膜更易损伤。5种低渗液中,150 mOsm染液检测效果最好。

关键词：低温保存绵羊精子质膜完整性

NF-κB信号通路对脑外伤引起的神经细胞质膜完整性破坏及神经功能损害的影响

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NF-κB信号通路对脑外伤引起的神经细胞质膜完整性破坏及神经功能...

作者：刘冉苏州大学

学位级别：硕士

目的:研究NF-κB信号通路对TBI后神经细胞质膜完整性破坏及神经功能损害的影响,并对其调节机制进行初步探讨。方法:采用改良的自由落体损伤装置建立小鼠定量脑外伤（traumatic brain injury, TBI）模型,实验组脑室注射SN50（NF-κB的特... 详细信息

目的:研究NF-κB信号通路对TBI后神经细胞质膜完整性破坏及神经功能损害的影响,并对其调节机制进行初步探讨。方法:采用改良的自由落体损伤装置建立小鼠定量脑外伤（traumatic brain injury, TBI）模型,实验组脑室注射SN50（NF-κB的特异性抑制剂）或等体积等渗盐水,并按伤后时间不同分为伤后1h,6h,12h,24h,48h组,各组分别于处死前1h用腹腔注射法将碘化丙啶（propidium iodide, PI）注入各组小鼠体内,采用体视学显微镜计数各组损伤及其周边区（皮质与海马）阳性细胞数,研究NF-κB信号通路对TBI引起的神经细胞质膜完整性破坏的影响;用组织缺损体积（lesion volume, LV）评估TBI后脑组织损害的情况,研究NF-κB信号通路对TBI后脑组织损害的影响;采用行为学试验（Motor Test和Morris水迷宫试验）评估TBI后各组动物的运动和学习记忆的情况,研究NF-κB信号通路对TBI后神经功能损害的影响。运用Western blot法和免疫组织化学法观察TBI后各实验组脑组织中凋亡相关蛋白caspase-3,TNF-α,tBid,自噬/溶酶体途径相关蛋白Cathepsin B,炎症相关因子TNF-α,caspase-1和神经再生标志Nestin的表达情况。期望为阐明NF-κB信号通路对TBI后神经细胞质膜完整性破坏及神经功能损害的调节机制提供理论依据。结果: PI计数,形态学、蛋白质学和行为学检测结果显示,与相对应各时段等渗盐水组比较,用SN50阻滞NF-κB信号通路后,损伤区PI阳性细胞数减少,缺损体积减小,运动和学习记忆功能有所改善;凋亡相关蛋白（TNF-α、caspase-3、tBid）、自噬/溶酶体途径相关蛋白（Cathepsin B）及炎症反应相关蛋白（TNF-α、caspase-1）的表达量降低,免疫组织化学染色阳性细胞数减少,且以24h8h最为显著（P质膜完整性破坏,TBI后24h8h细胞质膜完整性破坏数量达高峰,表现为PI阳性细胞显著增多;阻滞NF-κB信号通路可以减轻TBI造成的神经细胞质膜完整性破坏。2.阻滞NF-κB信号通路可以减小TBI后脑组织的缺损体积。3. TBI可引起运动和学习记忆功能损害,阻滞NF-κB信号通路可以明显改善TBI后运动和学习记忆功能。4. TBI后TNF-α上调,凋亡执行因子caspase-3被激活;通过对细胞凋亡信号通路的调节可能是NF-κB信号通路调控TBI引起的神经细胞质膜完整性及神经功能损害的机制之一。5. TBI后Cathepsin B、tBid的表达逐渐增加;NF-κB信号通路可能对TBI后自噬/溶酶体途径进行调节,对自噬/溶酶体途径的调节可能是NF-κB信号通路调控TBI诱导的继发性脑损伤引起的神经细胞质膜完整性及神经功能损害的又一机制。6. TBI后上调受损区域TNF-α和Caspase-1的表达;调节炎症反应也是NF-κB信号通路调控TBI诱导的继发性脑损伤引起的质膜完整性和神经功能损害的途径。7. TBI后Nestin的表达逐渐增加;阻滞NF-κB活性可使Nestin的表达显著增加,NF-κB信号通路可能通过调节神经再生功能来影响TBI引起的神经功能损害。

关键词：外伤性脑损伤 NF-κB 自噬/溶酶体途径质膜完整性神经功能损害

E64d对脑外伤后神经细胞质膜完整性和神经功能的影响及相关机制

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E64d对脑外伤后神经细胞质膜完整性和神经功能的影响及相关机制

作者：杨瑞苏州大学

学位级别：硕士

目的:研究E64d通过凋亡-自噬途径对TBI后神经细胞质膜完整性及神经功能的作用,并对其调节机制进行初步探讨。方法:采用改良的自由落体损伤装置建立小鼠定量脑外伤（traumatic brain injury, TBI）模型,实验组侧脑室注射E64d（cath... 详细信息

目的:研究E64d通过凋亡-自噬途径对TBI后神经细胞质膜完整性及神经功能的作用,并对其调节机制进行初步探讨。方法:采用改良的自由落体损伤装置建立小鼠定量脑外伤（traumatic brain injury, TBI）模型,实验组侧脑室注射E64d（cathepsinB和μ-calpain的特异性抑制剂,0.5μg/1μl）或等体积1%DMSO,并按伤后时间不同分为伤后1h,6h,12h,24h,和48h组,各组分别于处死前1h用腹腔注射法将碘化丙啶（propidium iodide, PI）注入各组小鼠体内,采用体视学显微镜计数各组损伤及其周边区（皮质与海马）阳性细胞数,研究组织蛋白酶对TBI引起的神经细胞质膜完整性破坏的影响;用组织缺损体积（lesion volume, LV）评估TBI后脑组织损害的情况,研究组织蛋白酶对TBI后脑组织损害的影响;采用行为学试验（Motor Test和Morris水迷宫试验）评估TBI后各组动物的运动和学习记忆的情况,研究组织蛋白酶对TBI后神经功能损害的影响。运用Western blot法和免疫组织荧光法观察TBI后各实验组脑组织中凋亡相关蛋白caspase-3,bcl-2,tBid,bax,自噬/溶酶体途径相关蛋白cathepsinB,LC3,P62的表达情况,进一步研究溶酶体酶对凋亡和自噬通路的影响以及两种通路的相互关系,期望为E64d对TBI后神经细胞质膜完整性及神经功能保护的调节机制提供理论依据。结果:PI计数,形态学、蛋白质学和行为学检测结果显示,与相对应各时段DMSO对照组比较,用E64d阻滞cathepsinB和μ-calpain后,损伤区PI阳性细胞数减少,缺损体积减小,运动和学习记忆功能有所改善;凋亡相关蛋白（caspase-3、tBid、bax）、自噬/溶酶体途径相关蛋白（cathepsinB、P62）的表达量降低,且以24h~48h最为显著（P＜0.05）;抗凋亡蛋白bcl-2和自噬相关蛋白LC3Ⅱ表达量显著增加（P＜0.05）。结论1:TBI可以造成神经细胞质膜完整性破坏,TBI后24h~48h质膜完整性遭破坏的细胞数量达高峰,表现为PI阳性细胞显著增多;E64d可以减轻TBI造成的神经细胞质膜完整性破坏程度;2. E64d可以减小TBI后脑组织的缺损体积;3. TBI可引起运动和学习记忆功能损害,E64d可以明显改善TBI后运动和学习记忆功能;4.自噬/溶酶体途径、凋亡途径均参与脑外伤的病理过程;5.E64d抑制cathepsinB和μ-calpain后凋亡和自噬途径均受到了影响,凋亡受到明显抑制,而自噬却明显增多;6. E64d引起TBI后自噬过程增多而非自噬性细胞死亡增多,E64d通过抑制凋亡和促进自噬过程对神经细胞质膜完整及神经功能起保护作用。

关键词：外伤性脑损伤自噬凋亡 E64d 质膜完整性神经功能

水牛精子分离和冷冻过程对精子运动特性和质膜完整性的影响

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水牛精子分离和冷冻过程对精子运动特性和质膜完整性的影响