检索结果-南通市图书馆

肌肉细胞内质网-质膜互作与CRAC信号通路

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中国科学：生命科学 2022年第1期52卷 17-27页

作者：孙傲敏陈一兰荆吉王友军北京师范大学生命科学学院遗传与发育生物所抗性基因资源与分子发育北京市重点实验室北京100875 中国科学院肿瘤与基础医学研究所杭州310000 北京师范大学生命科学学院细胞所细胞增殖及调控生物学教育部重点实验室北京100875

细胞通过内质网(endoplasmic reticulum, ER)-质膜(plasma membrane, PM)之间的膜接触点(简称为ER-PM连接区)进行脂类传递和钙信号转导.该连接区占据神经元胞体处质膜表面积的12%,且是肌肉细胞兴奋-收缩偶联所必须的.当前对神经元中该... 详细信息

细胞通过内质网(endoplasmic reticulum, ER)-质膜(plasma membrane, PM)之间的膜接触点(简称为ER-PM连接区)进行脂类传递和钙信号转导.该连接区占据神经元胞体处质膜表面积的12%,且是肌肉细胞兴奋-收缩偶联所必须的.当前对神经元中该区的动态特征及生物学功能还所知甚少,对兴奋性细胞中该区中的蛋白质图谱也了解得比较有限.而作为连接区内介导ER-PM互作的蛋白质机器,钙池释放钙通道钙释放激活钙(calcium releaseactivated calcium, CRAC)通道在兴奋性细胞中的调控、生理和病理作用也有待进一步阐明.近年来,超分辨成像,光遗传学技术及蛋白邻近标记技术的出现,为回答这些问题提供了有力的工具.本文因而总结了ER-PM连接区的动态观测与蛋白质组学鉴定,及肌肉细胞的CRAC通路等研究方向上的最新进展,并对后续相关研究进行了初步的展望.

关键词：内质网质膜膜接触点钙释放激活钙通道邻近标记光遗传学

癫痫持续状态后海马神经元质膜损伤与内体-自噬体-溶酶体系统的变化

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

癫痫持续状态后海马神经元质膜损伤与内体-自噬体-溶酶体系统的变...

作者：吴霜吉林大学

学位级别：硕士

癫痫发作通过氧化应激、线粒体损伤等一系列复杂的机制导致迟发性神经元死亡。癫痫持续状态（SE）早期内体-自噬体-溶酶体系作为神经元内的自我防御系统被激活,变性神经元内膜性细胞器增多。随着损伤的加重,内体、自噬体和溶酶体发生破... 详细信息

癫痫发作通过氧化应激、线粒体损伤等一系列复杂的机制导致迟发性神经元死亡。癫痫持续状态（SE）早期内体-自噬体-溶酶体系作为神经元内的自我防御系统被激活,变性神经元内膜性细胞器增多。随着损伤的加重,内体、自噬体和溶酶体发生破裂,进一步促进神经元死亡。内体-自噬体-溶酶体系统破裂后,膜内的磷脂和胆固醇释放,导致细胞质的膜性成分发生改变。目前对SE后损伤神经元内体-自噬体-溶酶体系统变化的研究较少,尤其是对神经元死亡期间早期内体、自噬体和溶酶体时间和空间的变化,以及损伤神经元内磷脂和胆固醇的变化。本实验通过右侧脑室注射红藻氨酸诱导小鼠癫痫发作,诱发迟发性神经元死亡,从形态上研究迟发性神经元死亡过程中内体-自噬体-溶酶体系统、磷脂和胆固醇的时间和空间变化,阐明迟发性神经元死亡与质膜变化的关系,为治疗癫痫诱导的迟发性神经元死亡提供新的研究方向。研究方法:1.通过Fluoro-Jade B和碘化丙啶（PI）组织染色检测SE后海马CA3区神经元死亡;2.通过TUNEL染色检测SE后海马CA3区神经元DNA断裂的细胞核;3.通过Neu N、Iba1和GFAP免疫荧光染色检测SE后海马CA3区神经元、小胶质细胞和星形胶质细胞的变化;4.通过Rab5、LC3A/B和LAMP1免疫荧光染色检测SE后海马CA3区神经元内早期内体、自噬体和溶酶体的时间和空间变化;5.通过Nile red和filipin III染色检测海马CA3区神经元内磷脂和胆固醇的变化。研究结果:1.Fluoro-Jade B和PI组织染色结果显示,与对照组相比,SE后第1天小鼠海马CA3区开始出现Fluoro-Jade B阳性细胞,SE后第3天海马CA3区FluoroJade B阳性细胞数量达最大值,随后逐渐降低。与对照组相比,SE后第1天小鼠海马CA3区神经元细胞质PI染色开始减弱,SE后第2天到7天海马CA3区神经元细胞质PI染色逐渐降低甚至消失;而PI阳性细胞核数量逐渐增加,SE后第7天海马CA3区出现大量PI阳性细胞核。2.Neu N、Iba 1和GFAP免疫荧光染色结果显示,与对照组相比,SE后第1天到第7天海马CA3区神经元的Neu N免疫阳性逐渐降低,到SE后第7天,海马CA3区神经元的Neu N免疫阳性几乎完全消失。与对照组相比,SE后第1天海马CA3区的Iba 1阳性细胞和GFAP阳性细胞开始增多,在SE后第2天到7天,Iba 1和GFAP阳性细胞数量逐渐增加。3.TUNEL染色结果显示,与对照组相比,SE后第1天海马CA3区出现大量TUNEL阳性信号;SE后第2天,海马CA3区的TUNEL阳性信号开始减弱;SE后第7天,海马CA3区的TUNEL阳性信号进一步减弱。4.早期内体Rab5染色结果显示,对照组海马CA3区神经元细胞质内存在少量的Rab5阳性颗粒;SE后第1天,海马CA3区神经元内的Rab5阳性颗粒数量开始增加;SE后第2天,海马CA3区神经元内的Rab5阳性呈弥散性分布;SE后第3天,海马CA3区神经元内的Rab5阳性弥散程度进一步增加;在SE后第5天和第7天Rab5阳性呈斑块状分布。5.自噬体LC3A/B染色结果显示,对照组海马CA3区神经元细胞质内存在少量的LC3A/B阳性颗粒;SE后第1天,海马CA3区神经元内的LC3A/B阳性颗粒开始增加;SE后第2天,海马CA3区神经元内的LC3A/B阳性呈弥散性分布;SE后第3天、5天和7天,海马CA3区神经元内的LC3A/B阳性呈斑块状分布。6.溶酶体LAMP1染色结果显示,对照组海马CA3区神经元细胞质内的LAMP1阳性颗粒分布均匀。SE后第1天,海马CA3区神经元内的LAMP1阳性开始呈弥散性分布。SE后第2天,海马CA3区神经元内的LAMP1阳性进一步呈弥散性分布。SE后第3天,海马CA3区神经元内的LAMP1阳性下降。7.Nile red和filipin III染色结果显示,对照组海马CA3区神经元细胞质的染色浅。与对照组相比,SE后第1天海马CA3区神经元内的Nile red和filipin III染色增强。这些阳性神经元在SE后的7天内可被持续观察到。结论:1.SE诱导神经元死亡过程中早期内体标志物Rab5阳性面积先增加后降低,内体-溶酶体系统在SE早期被激活。2.迟发性神经元死亡与脂质变化密切相关,死亡神经元内的磷脂和胆固醇成分增加。3.PI组织染色可以检测SE后早期海马CA3区神经元死亡。综上所述,SE诱导海马CA3区神经元死亡过程中内体-自噬体-溶酶体系统在SE后早期被激活,细胞内的膜性成分增加,磷脂和胆固醇水平增加。这些现象的探讨有助于阐明SE诱导迟发性神经元死亡的机制,为治疗癫痫提供新的线索。

关键词：癫痫持续状态质膜内膜系统磷脂胆固醇

内质网-质膜接触点部位Kv2.1、VAPA和TMEM24蛋白相互作用研究

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

内质网-质膜接触点部位Kv2.1、VAPA和TMEM24蛋白相互作用研究

作者：魏冰华中科技大学

学位级别：硕士

研究背景:Kv2.1类属电压门控钾通道,是目前所知的唯一位于细胞膜上的内质网-质膜接触点(ER-PM junction)链接蛋白。生理条件下,Kv2.1呈自由分散型和微米簇两种定位特征,前者通过电压依赖的K电流调节细胞的基础电生理活动,后者与胞浆内... 详细信息

研究背景:Kv2.1类属电压门控钾通道,是目前所知的唯一位于细胞膜上的内质网-质膜接触点(ER-PM junction)链接蛋白。生理条件下,Kv2.1呈自由分散型和微米簇两种定位特征,前者通过电压依赖的K电流调节细胞的基础电生理活动,后者与胞浆内质网上的蛋白形成稳定的膜接触位点并失去了电导功能。VAPA作为一种支架蛋白,通过自身的特殊位点与Kv2.1通道的非典型FFAT基序结合,共同构成ER-PM接触点的一部分。TMEM24/C2CD2L是新发现的位于ER-PM接触点的蛋白质,含有706个氨基酸,其主要功能是转运脂质,自身受Ca调控参与胰岛素的波动性分泌。Kv2.1、VAPs及TMEM24均存在于ER-PM接触点,三者在ER-PM接触点动态分布且均受磷酸化/去磷酸化的调节。因此猜测Kv2.1通道、TMEM24蛋白、VAPA蛋白之间可能存在互作并共同参与ER-PM接触位点的形成以及胰岛素分泌的调控。本研究意在阐明Kv2.1通道、VAPA蛋白以及TMEM24蛋白之间的相互作用及机制,对胰岛素的分泌以及二型糖尿病的预后和治疗提供新思路。研究目的:探究电压门控钾离子通道Kv2.1、囊泡相关膜蛋白VAPA和内分泌蛋白TMEM24之间的相互作用,并进一步研究其作用机理,为胰岛素的分泌机制提供新视角。研究方法:1.质粒构建:利用分子克隆的方法使用限制性核酸内切酶、DNA连接酶及其他修饰酶的作用,分别对目的基因和载体DNA进行切割修饰,将二者组合为新质粒;2.细胞转染:将Kv2.1通道、VAPA蛋白、TMEM24蛋白通过脂质体lipo2000转染进入细胞查看它们的表达情况;3.Western blot实验:检测Kv2.1通道、VAPA蛋白、TMEM24蛋白的表达水平;4.免疫共沉淀(Co IP):在蛋白分子水平检测Kv2.1通道、VAPA蛋白、TMEM24蛋白的相互作用,进行定性分析;5.共聚焦显微镜拍摄及FRET现象检测:在生理条件下对活细胞内的两种蛋白质分子之间的距离进行检测,用于验证蛋白质之间的直接相互作用。研究结果:1.Kv2.1通道与TMEM24蛋白在ER-PM接触位点存在直接相互作用;2.TMEM24蛋白的CTR结构域是其与Kv2.1通道相互链接的主要结合位点;3.Kv2.1通道与VAPA蛋白、TMEM24与VAPA蛋白,均在ER-PM接触点存在相互作用;4.TMEM24蛋白抑制了Kv2.1和VAPA介导的ER-PM接触点的形成;5.TMEM24的CTR片段是其抑制Kv2.1/VAPA介导ER-PM接触点形成的关键结构,而Esyt1蛋白无上述影响;6.TG诱导细胞内共转的TMEM24、Kv2.1和VAPA蛋白在ER-PM接触点部位形成高度共定位的簇状结构。研究结论:位于质膜上的Kv2.1通道蛋白与内质网跨膜蛋白TMEM24具有直接相互作用,TMEM24的CTR结构域是重要的链接位点。Kv2.1通道与VAPA蛋白以及TMEM24蛋白与VAPA蛋白也存在相互作用,Kv2.1、VAPA、TMEM24三者之间可能存在竞争互作从而参与调控ER-PM的接触位点的形成,胞内钙离子可以影响这种竞争关系。

关键词：内质网质膜 Kv2.1通道 VAPA蛋白 TMEM24蛋白

质膜和细胞核双重靶向嵌合肽用于光敏剂递送和增强光动力学疗法

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

质膜和细胞核双重靶向嵌合肽用于光敏剂递送和增强光动力学疗法

作者：袁萍广州医科大学

学位级别：硕士

光动力疗法(PDT)是一种通过光敏药物和激光激活来治疗肿瘤疾病的新方法。采取特定波长的激光光照肿瘤部位可以激活光敏药物,使该药物可以选择性地聚集在肿瘤组织中并引发光化学反应以破坏肿瘤。光敏剂(PS),分子氧和激光是PDT的三个组成... 详细信息

光动力疗法(PDT)是一种通过光敏药物和激光激活来治疗肿瘤疾病的新方法。采取特定波长的激光光照肿瘤部位可以激活光敏药物,使该药物可以选择性地聚集在肿瘤组织中并引发光化学反应以破坏肿瘤。光敏剂(PS),分子氧和激光是PDT的三个组成部分。在PDT处理中,首先将光敏剂注入患者体内或在皮肤表面覆盖一定时间,以确保PS被内化到组织中,然后预先准备了适当波长的激发光来照射靶组织以形成活性氧(ROS),活性氧具有通过凋亡介导的细胞损伤、血管破坏和免疫应答激活来破坏癌细胞的能力。与传统疗法相比,PDT有其自身的优势,(a)双重选择性(b)无耐药性(c)非侵入性治疗(d)精准治疗、副作用低。但是,PDT也存在固有缺陷,只要部位存在光敏剂,激光照射到那个部位就会产生毒性。同时,药物毒副作用大的一个很大原因就是药物不仅在需要的目标中释放出来,而且还在其它器官组织中释放,对非靶向组织造成大的毒副作用。因此,直接靶向到癌细胞内甚至是亚细胞器内进行PDT,对提升PDT疗效和降低毒副作用显得尤为重要。细胞膜是防止细胞外物质自由进入细胞的堡垒,可确保细胞内环境的相对稳定性,并使各种生化反应能够有序地进行。细胞核是真核细胞的所有细胞结构中的重镇,它是细胞里遗传和代谢的调控中心。与其它文献报道的单靶点(如线粒体、溶酶体等)相比,细胞膜和细胞核双靶点能在破坏细胞防御,促进药物内吞的情况下,更精准地作用于控制遗传的细胞核上,阻止细胞复制分裂,从而控制癌症的发展。受此启发,我们猜测,设计一种用于亚细胞器质膜和细胞核双靶向的自递送嵌合肽纳米棒可直达PDT作用靶点,以达到精准PDT的效果并大大减少其毒副作用。研究目的在此次工作中,我们拟构建了用于质膜和细胞核双靶光敏剂递送的自递送嵌合肽纳米棒(表示为pnPNP),以实现协同的原位光动力学治疗,并可进一步观察其在精准肿瘤治疗中的应用。为了突出pnPNP的双靶向PDT的优势,设计了具有单核靶向的pnNP用于对照组。研究方法1.pnPNP和pnNP的表征:用Nano-ZS ZEN360表征了粒径和Zeta电位。通过TEM观察形态。紫外可见吸收率是利用紫外可见分光光度计测量。2.pnPNP和pnNP的ROS产生能力:分别使用SOSG和DCFH-DA作为指示剂,通过荧光光谱仪和CLSM测量ROS的产生。3.细胞摄取和光触发的溶酶体逃逸:采用CLSM研究细胞摄取和光触发的溶酶体逃逸。4.pnPNP的质膜锚定和核靶向能力:采用CLSM方法研究pnPNP和pnNP对He La、CT26和4T1细胞的质膜锚定和核靶向能力。5.体外细胞毒性测量:通过MTT、流式细胞术和CLSM测量pnPNP和pnNP的细胞毒性。6.体内抗癌研究:当肿瘤体积达到大概100 mm时,选择4T1荷瘤小鼠来评估pnPNP的抗肿瘤作用。将小鼠随机分为五组(每组五只小鼠),包括PBS、pnPNP、pnNP、加激光照射的pnPNP、加激光照射的pnNP。将pnPNP和pnNP采取静脉注射方式注射到荷瘤小鼠中。在给药后20小时,对小鼠进行激光照射5分钟。每隔一天监测一次肿瘤体积和体重。15天后,采集肿瘤组织用于照相和称重。研究结果1、动态光散射(DLS)测量结果说明pnPNP和pnNP的纳米粒子分散均匀,尺寸分布狭窄。TEM图像表明,纳米棒长宽比为3-4,具有正电荷,这有利核渗透。从UV光谱中可看出pnPNP和pnNP大概在400 nm有尖峰,且500-700nm处有显著的Pp IX特征吸收峰。2、SOSG显示在没有光照射的情况下,在pnPNP和pnNP组中几乎没有荧光变化;在光照射下,在pnPNP组而不是在pnNP组中发现了更快的荧光增强;在CLSM的细胞内ROS检测中也发现了相似的结果,激光照射后在pnPNP组中检测到最强的绿色荧光。3、随着培养时间的增加,4T1细胞对pnPNP和pnNP的吸收均增强。但是,用pnPNP处理的4T1细胞的荧光强度比用pnNP处理的细胞的荧光强度高约10倍。Lyso-Tracker Green被发现与pnPNP和pnNP很好地匹配,这指示了纳米棒的内吞作用途径为溶酶体,在激光照射后,溶酶体绿色荧光信号在4T1细胞中消失了,这归因于pnPNP和pnNP对溶酶体结构的有效光动力破坏。4、pnPNP的红色荧光无论是在4T1、He La或CT26中均与细胞膜染料Di O的绿色荧光重叠,证明了pnPNP的出色的质膜靶向能力。在不存在或存在光照射的情况下,都能观察到pnPNP和pnNP的核靶向能力。5、体外细胞毒性显示,pnPNP和pnNP对4T1和He La细胞均表现出较低暗毒性和浓度依赖性的光毒性,且与pnNP相比,观察到pnPNP的光毒性明显更高。6、体内抗肿瘤研究显示,与PBS一样,用不加光照的pnPNP或pnNP注射几乎不能抑制肿瘤的生长。一旦暴露在光下,pnPNP和pnNP都对肿瘤的生长有明显的抑制作用,且pnPNP明显优于pnN

关键词：嵌合肽质膜细胞核双靶向光动力学治疗

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

植物质膜蛋白质组的逆境应答研究进展

植物学报 2017年第2期52卷 128-147页

作者：邱丽丽赵琪张玉红戴绍军东北林业大学森林植物生态学教育部重点实验室哈尔滨150040 东北林业大学盐碱地生物资源环境研究中心东北油田盐碱植被恢复与重建教育部重点实验室哈尔滨150040

质膜作为原生质体与外界环境的屏障,除了维持正常的细胞内稳态和营养状况,还参与感知和应答各种环境胁迫。近年来,植物质膜蛋白质组学研究为深入分析植物应答不同生物和非生物胁迫的分子机制提供了重要信息,已经报道了模式植物拟南芥(Ar... 详细信息

质膜作为原生质体与外界环境的屏障,除了维持正常的细胞内稳态和营养状况,还参与感知和应答各种环境胁迫。近年来,植物质膜蛋白质组学研究为深入分析植物应答不同生物和非生物胁迫的分子机制提供了重要信息,已经报道了模式植物拟南芥(Arabidopsis thaliana)和水稻(Oryza sativa)等10种植物质膜应对生物胁迫(白叶枯病菌(Xanthomonas oryzae pv.oryzae)感染)与非生物胁迫(冷、盐、水淹、渗透、高p H值、Fe缺乏及过量、氮素、脱落酸、壳聚糖和壳寡糖)过程的蛋白质丰度模式变化。通过整合分析植物质膜响应逆境的蛋白质组学研究结果,揭示了质膜在植物应答逆境胁迫过程中的重要作用。植物通过调节转运蛋白、通道蛋白及膜泡运输相关蛋白的丰度变化促进细胞内外的信号传递、物质交换与运输;同时利用膜相关的G蛋白、Ca^(2+)信号、磷酸肌醇信号途径及BR信号途径等多种信号通路,通过蛋白质可逆磷酸化作用感知和传递胁迫信号,调节植物抵御胁迫。研究结果为从蛋白质水平认识质膜逆境应答分子调控机制提供了新线索。

关键词：环境胁迫植物质膜蛋白质组学调节机制

NaCl胁迫对构树质膜脂肪酸组成和膜流动性的影响

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

东北林业大学学报 2020年第8期48卷 22-26,49页

作者：张强黄婧周鹏张敏南京林业大学南京210037 江苏省林业科学研究院

以构树(Broussonetia papyrifera)组培生根苗为试材,研究了50、100和150 mmol/L NaCl胁迫对质膜总固醇、质膜微囊脂肪酸组成及膜流动性的影响。结果表明:50和100 mmol/L NaCl处理导致叶片中质膜总固醇摩尔质量浓度升高,150 mmol/L NaCl... 详细信息

以构树(Broussonetia papyrifera)组培生根苗为试材,研究了50、100和150 mmol/L NaCl胁迫对质膜总固醇、质膜微囊脂肪酸组成及膜流动性的影响。结果表明:50和100 mmol/L NaCl处理导致叶片中质膜总固醇摩尔质量浓度升高,150 mmol/L NaCl处理后固醇摩尔质量浓度与对照组无差异,而根中质膜总固醇摩尔质量浓度变化不显著。构树幼苗根部质膜以饱和脂肪酸为主,其中棕榈酸(C16:0)摩尔分数最高,占52.75%;其次为硬脂酸(C18:0)、山萮酸(C22:0)等。不饱和脂肪酸有棕榈油酸(C16:1)、反油酸(C18:1n9t)、油酸(C18:1n9c)、花生四烯酸(C20:4n6)等。与根中不同,叶片质膜中的脂肪酸以不饱和脂肪酸居多,如棕榈油酸(C16:1)、反油酸(C18:1n9t)、油酸(C18:1n9c)和花生四烯酸(C20:4n6),饱和脂肪酸仅有棕榈酸(C16:0)和硬脂酸(C18:0)两种。NaCl处理后,根部和叶片脂肪酸各组分配比发生了明显变化。根中饱和脂肪酸摩尔分数增加,不饱和脂肪酸摩尔分数降低。而叶中反油酸(C18:1n9t)和硬脂酸(C18:0)摩尔分数显著升高。与根中相似,叶片质膜脂肪酸不饱和指数(IUFA)在NaCl胁迫后降低,同时根部和叶片质膜流动性均随之下降。总之,高浓度NaCl(150 mmol/L)处理引起构树质膜脂肪酸组成变化,表现为脂肪酸饱和度增加和质膜流动性下降。质膜膜脂对盐胁迫环境的响应研究,可为质膜参与植物耐盐性研究提供新的思路。

关键词：构树 NaCl胁迫质膜固醇摩尔质量浓度脂肪酸组成膜流动性

灵武长枣果实质膜和液泡膜H^+-ATPase和H^+-PPase活性与果实糖分积累

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

广西植物 2015年第5期35卷 641-647页

作者：章英才曹金霞景红霞宁夏大学生命科学学院银川750021

以不同发育时期灵武长枣(Ziziphus jujuba cv.Lingwuchangzao)的果实为材料,通过测定与分析果肉组织中细胞质膜、液泡膜H+-ATPase和H+-PPase活性、果实糖分含量变化,研究了灵武长枣果实质膜、液泡膜H+-ATPase和H+-PPase活性与糖积累特... 详细信息

以不同发育时期灵武长枣(Ziziphus jujuba cv.Lingwuchangzao)的果实为材料,通过测定与分析果肉组织中细胞质膜、液泡膜H+-ATPase和H+-PPase活性、果实糖分含量变化,研究了灵武长枣果实质膜、液泡膜H+-ATPase和H+-PPase活性与糖积累特性的关系。结果表明:(1)果实第二次快速生长期之前主要积累葡萄糖和果糖,之后果实迅速积累蔗糖,葡萄糖和果糖含量则逐渐下降,成熟期果实主要积累蔗糖。(2)在果实发育的缓慢生长期S1,质膜H+-ATPase活性最低;第一次快速生长期,质膜H+-ATPase活性最高;缓慢生长期S2,其活性降低;第二次快速生长期,质膜H+-ATPase活性升至次高;完熟期,质膜H+-ATPase活性下降幅度较大。(3)在果实发育过程中,液泡膜H+-ATPase和H+-PPase活性的变化趋势相似。缓慢生长期S1,液泡膜H+-ATPase和H+-PPase活性较低;从缓慢生长期S1至第一次快速生长期缓慢下降至最低;从第一次快速生长期开始,液泡膜H+-ATPase和H+-PPase活性呈现为逐渐增高的变化趋势;除第二次快速生长期以外,液泡膜H+-PPase活性始终高于H+-ATPase。由此推测,质膜H+-ATPase和液泡膜H+-ATPase、H+-PPase对灵武长枣果实糖分的跨膜次级转运起到重要的调控作用。

关键词：灵武长枣质膜液泡膜糖积累

白藜芦醇对山羊冷冻精子质膜、DNA完整性和温度耐受性的影响

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中国畜牧兽医 2020年第1期47卷 124-130页

作者：吕春荣 Allai Larbi 李俊喜洪琼花权国波云南省畜牧兽医科学院昆明650224 禄丰县动物疫病预防控制中心禄丰651200

试验旨在研究白藜芦醇对山羊冷冻精子质膜、DNA完整性和温度耐受性的影响。采用假阴道法采集8只云上黑山羊精液,用含不同浓度(0、0.1、1、10和20μmol//L)白藜芦醇的Optidyl稀释液稀释后进行细管分装,对照组不添加白藜芦醇。在5℃平衡4 ... 详细信息

试验旨在研究白藜芦醇对山羊冷冻精子质膜、DNA完整性和温度耐受性的影响。采用假阴道法采集8只云上黑山羊精液,用含不同浓度(0、0.1、1、10和20μmol//L)白藜芦醇的Optidyl稀释液稀释后进行细管分装,对照组不添加白藜芦醇。在5℃平衡4 h后,将细管于液氮蒸气中预冻10 min,最后在液氮中保存30 d。37℃水浴解冻后,采用低渗耐受性试验检测质膜完整性和温度耐受性,精子染色质扩散法检测DNA碎片率等指标。结果显示,10μmol/L白藜芦醇冷冻组精子弯尾率显著高于其他各处理组(P0.05);10μmol/L白藜芦醇冷冻组精子DNA碎片率极显著高于鲜精组(P0.05)。透射电镜结果表明,10μmol/L白藜芦醇组精子质膜完整率显著高于不添加白藜芦醇对照组(P质膜状态、DNA完整率和温度耐受性,其最佳作用浓度为10μmol/L,但白藜芦醇是否能改善山羊冻精的人工授精效果还有待进一步研究。

关键词：山羊精液白藜芦醇冷冻质膜 DNA 温度耐受性

基于功能膜微域和质膜改造高效合成N-乙酰氨基葡萄糖

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

基于功能膜微域和质膜改造高效合成N-乙酰氨基葡萄糖

作者：张成江南大学

学位级别：硕士

空间组织代谢工程将代谢途径酶锚定在蛋白等支架上,构建人工底物通道,减少反应中间物传递壁垒,从而显著提高反应效率,是一种重要的代谢工程研究方法。前期研究发现,功能膜微域(FMMs)可以作为途径酶空间组装的平台,将与GlcNAc合成相关的... 详细信息

空间组织代谢工程将代谢途径酶锚定在蛋白等支架上,构建人工底物通道,减少反应中间物传递壁垒,从而显著提高反应效率,是一种重要的代谢工程研究方法。前期研究发现,功能膜微域(FMMs)可以作为途径酶空间组装的平台,将与GlcNAc合成相关的途径酶锚定于FMMs,可以显著提高GlcNAc产量。但是由于酶活性低,生物基产品的合成往往需要大量过表达途径酶,而菌株自身的FMMs数量或大小有限,难以实现过表达酶的空间组装。因此,本论文以重组枯草芽孢杆菌BSGN6为出发菌株,通过代谢工程增加了FMMs的数量或大小,最终获得了一株高产GlcNAc的菌株;并在此基础上通过代谢工程改造细胞质膜,降低了FMMs过度改造对菌株产生的负面影响。主要结果如下:(1)在BSGN6菌株中过表达FloT及其SPFH结构域,通过生长曲线的检测和扫描电镜的观察,发现过表达FloT能够影响菌株的生长,因此选择SPFH结构域来锚定途径酶;摇瓶实验发现,与BSGN6-C1(游离表达GNA1和yqaB)相比,BSGN6-S1(GNA1和yqaB通过SPFH定位于FMMs)的GlcNAc产量提高了61.7%,但是通过pHT01质粒过表达SPFH-GNA1未能进一步提高GlcNAc产量;荧光显微镜发现通过pHT01质粒过表达FloT-EGFP时,EGFP难以精准定位于FMMs。(2)在BSGN6菌株中过表达Yis P进行FMMs改造,发现重组菌株BSGN6-Y1和BSGN6-Y2的角鲨烯含量得到提高;接着过表达FloT的SPFH结构域进行FMMs的进一步改造,通过膜有序度的定性和定量分析,发现重组菌株BSGN6-Y1S和BSGN6-Y2S的膜有序度增加,表明FMMs的数量或大小得到明显增加。(3)通过生长曲线的检测和扫描电镜的观察分析FMMs改造对重组菌株BSGN6-Y1S和BSGN6-Y2S生长的影响,发现FMMs改造提高了菌株的适应性,但是FMMs过度改造会影响菌株形态;然后通过LC-MS来分析FMMs改造对中间代谢产物的影响,发现重组菌株BSGN6-Y1SAY和BSGN6-Y2SAY的中间代谢产物含量下降;接着通过荧光显微镜观察FMMs改造菌株中EGFP的分布,发现FMMs改造能使过表达的途径酶精准定位于FMMs;最终通过摇瓶发酵和3 L罐发酵,发现FMMs改造能够提高GlcNAc产量,BSGN6-Y1SAY摇瓶产量为8.30±0.57 g·L,是对照菌株的2.92倍,BSGN6-Y1SAY在3 L罐中的产量为18.57±0.79 g·L,是对照菌株的2.94倍。(4)在菌株BSGN6-Y1S中过表达PlsX、PlsY和PlsC完成质膜的改造;然后通过生长曲线的检测和扫描电镜的观察,发现质膜改造能够减弱FMMs过度改造对菌株生长产生的不良影响;接着分析了质膜改造对中间代谢产物含量的影响,发现质膜改造能进一步降低中间代谢产物含量;最后分析了质膜改造对GlcNAc产量的影响,发现质膜改造能进一步提高GlcNAc产量,BSGN6-Y1MYPA摇瓶产量为5.18±0.16 g·L,是对照菌株的1.42倍。

关键词：空间组装功能膜微域质膜 GlcNAc