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食品中单增李斯特菌的分离鉴定及PCR快速检测方法的研究

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食品中单增李斯特菌的分离鉴定及PCR快速检测方法的研究

作者：王昊宇大连工业大学

学位级别：硕士

单增李斯特菌(L. monocytogenes)是一种在自然界广泛分布的食源性致病菌,绝大多数食品(肉类、禽类、海产品、蔬菜)都可能成为此菌污染对象。人类食用受污染的食物后,易得李斯特菌病,主要表现为脑膜炎、骨髓炎、败血病等,病死率高达20%-3... 详细信息

单增李斯特菌(L. monocytogenes)是一种在自然界广泛分布的食源性致病菌,绝大多数食品(肉类、禽类、海产品、蔬菜)都可能成为此菌污染对象。人类食用受污染的食物后,易得李斯特菌病,主要表现为脑膜炎、骨髓炎、败血病等,病死率高达20%-30%,远远超过其它常见的食源性致病菌。近年来,有关单增李斯特菌的食物中毒事件频频发生,引起人们普遍关注。单增李斯特菌的传统检测方法操作繁琐、检测时间较长且灵敏度较低,不能满足食品中致病菌快速、灵敏的检测需要。因此需要建立快速、灵敏的单增李斯特菌的检验方法。本研究基于单增李斯特菌MyA基因和李斯特菌属的16sRNA基因分别合成两对引物,对影响PCR的主要因素进行优化,建立可同时检测两个特异基因的PCR方法,即双重PCR方法及荧光PCR方法。将两种PCR检测方法分别与选择增菌法结合,应用在食品样品的检测中。此双重PCR方法特异性良好,对纯菌液的检测灵敏度为3.2×102CFU/mL,模拟污染的海螺检测限为4CFU/g。应用该双重PCR方法对市场随机抽取的126份新鲜海螺样品进行检测,检测结果经GB 4789.30-2010验证。验证结果表明,出现双条带的海螺样品为阳性样品,无条带出现或仅出现单一条带的海螺样品为阴性样品。126份海螺样品中共检出阳性样品16份,检出率为12.7%。此荧光PCR方法的反应液经凝胶电泳验证,结果显示,扩增出的两条不同大小、不同Tm值的目的核酸片段,分别对应两条荧光PCR溶解曲线上的两个独立波峰。基于单增李斯特菌hlyA基因建立标准曲线,相关系数为0.996,最低检出限约为89CFU/mL。应用荧光PCR检测蚬子样品中疑似纯菌株,所得阳性结果经GB 4789.30-2010验证,验证结果表明,荧光PCR实际检测阳性结果与GB 4789.30-2010检测结果完全一致。综上所述,本研究建立的两种PCR快速检测方法可快速检测食品样品中的阳性样品与阴性样品,准确率高,可作为食品样品中单增李斯特菌的初步鉴定方法。

关键词：单增李斯特菌双重PCR 荧光PCR 溶解曲线贝类样品

三种信号标记—适配体修饰电化学传感器及其对贝类重金属的检测研究

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三种信号标记—适配体修饰电化学传感器及其对贝类重金属的检测研...

作者：陈芷羽江苏大学

学位级别：硕士

贝类作为一种经济的海水养殖产品,是我国水产品产业的重要组成部分。然而近年来,贝类中重金属离子污染事件严重影响了贝类产业的健康发展。面对贝类中重金属,开发稳定可靠、灵敏快速的分析方法对于保障水产品健康安全具有十分紧迫的现... 详细信息

贝类作为一种经济的海水养殖产品,是我国水产品产业的重要组成部分。然而近年来,贝类中重金属离子污染事件严重影响了贝类产业的健康发展。面对贝类中重金属,开发稳定可靠、灵敏快速的分析方法对于保障水产品健康安全具有十分紧迫的现实意义。电化学传感器以成本低廉、灵敏准确、响应快速的优点,在贝类中重金属检测领域展现出广阔的应用前景。本研究借助纳米材料修饰电极表面,提高传感性能,并引入信号标记和适配体,实现对真实贝类样品中砷、汞、镉的特异性检测。研究的具体内容及结果分为三个部分:(1)增强信号标记GO-MB纳米复合物修饰的适配体传感器用于贝类总砷(As)的检测研究设计了一种GO-MB纳米复合物增强信号标记,结合适配体修饰的自制丝网印刷电极(SPE),用于贝类中总砷的测定。将金纳米粒子(AuNPs)电沉积在传感表面,通过Au-S键自组装砷适配体(Ars-3)。Ars-3特异性识别As(Ⅲ)后产生构象变化,使π-π堆积受到抑制,可吸附的增强信号标记物GO-MB随之减少,引发电流信号衰减。使用差分脉冲伏安法(DPV)对增强信号标记GO-MB的优势及传感机制进行了验证。在优化条件下,该传感器线性检测范围为4×10～10mg L,检出限(LOD)低至2×10 mg L。随后将传感器用于真实贝类样品总砷的测定,检测结果与ICP-MS标准方法具有良好的一致性。(2)RGO-AuNPs和Exo-辅助的外部探针信号开型DNA传感器用于贝类Hg的检测研究以电沉积法修饰的RGO-AuNPs纳米材料电极作为传感平台,借助T-Hg-T双链结构激活核酸外切酶(Exo-Ⅲ),引起外部信标探针溶液响应电流变化,构建了稳定性高、特异性强的电化学DNA传感器。采用形态学、光谱学等方法对传感机制进行了表征。对适配体浓度、汞反应时间和酶切时间等影响传感响应的关键参数进行了优化,传感器在3.5×10～5.6×10 mg L范围内对Hg浓度表现出良好的线性关系,实验得到的检出限(LOD)为1.2×10 mg L。随后,将所述信号开型电化学DNA传感器用于天然样品和加标回收实验测试,响应结果准确可靠。(3)基于半互补适体对的信号开-关型电化学比率传感器用于贝类Cd的检测研究开发了一种结合半互补适体对和比Ⅲ率策略的信号开-关型电化学生物传感器用于Cd的检测。以I/I比率响应值作为输出信号,建立比率读数与Cd浓度的关系。通过形态学、光谱学和电化学方法对电极修饰和传感过程进行了验证。在抗干扰和稳定性实验中,证明了I/I比率信号比单一信号读数更加稳定准确。该比率传感器在2×10～8×10 mg L范围内对Cd浓度的对数表现出良好的线性关系,检出限为7×10 mg L。随后,将该传感器用于贻贝样品中Cd的测定,响应结果与ICP-MS无明显差异,显示出良好的实用性。

关键词：重金属离子适配体电化学传感器贝类样品信号标记纳米材料

基于QuEChERs-GC/ECD快速检测贝类中有机氯农药及多氯联苯残留

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水产养殖 2018年第1期39卷 29-35页

作者：柴继业唐子刚史西志孙爱丽宁波大学海洋学院浙江宁波315211 浙江海洋高效健康养殖协同创新中心浙江宁波315211

建立基于QuEChERS前处理方法和气相色谱-电子捕获检测器同时测定贝类样品中17种持久性有机污染物残留的方法。样品经QuEChERS法进行预处理,选用已腈为提取剂,N-丙基乙二胺(PSA):C18(4∶6,m/m)净化,外标法定量。17种持久性有机污染物在1.... 详细信息

建立基于QuEChERS前处理方法和气相色谱-电子捕获检测器同时测定贝类样品中17种持久性有机污染物残留的方法。样品经QuEChERS法进行预处理,选用已腈为提取剂,N-丙基乙二胺(PSA):C18(4∶6,m/m)净化,外标法定量。17种持久性有机污染物在1.0~50.0μg/kg范围内质量浓度与峰面积呈现良好的线性关系,相关系数均大于0.9957。17种持久性有机污染物的方法检出限(信噪比为3)和定量限(信噪比为10)分别为0.01~0.25μg/kg和0.25~1.0μg/kg。添加浓度为10.0、15.0、25.0μg/kg时,17种持久性有机污染物的平均回收率为84.1%~119.2%,相对标准偏差为3.9%~12.6%。本方法具有快速简便、定量准确,可应用于贝类样品中17种持久性有机污染物的快速检测。

关键词： QuEChERS 气相色谱-电子捕获检测器贝类样品

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七、渔业生态环境

南方水产科学 2000年第1期2卷 43-47页

000176 红大麻哈鱼的热限制和海洋洄游:全球变暖的长期后果=Thermal limits and ocean migrations of sockeye salmon(On-corhynchus,nerka):long-term consequencesof global warming〔刊。

关键词：浮游植物表面沉积物大麻哈鱼赤潮异弯藻海洋环境贝类样品气象因素增氧机有机物养殖

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深圳市海域贝类腹泻性毒素的污染状况分析

中国卫生检验杂志 2010年第3期20卷 624-625页

作者：黄海燕黄爱君刘建军周丽袁建辉庄志雄广东省深圳市疾病预防控制中心广东深圳518020

目的：了解深圳市海域贝类腹泻性毒素的污染状况。方法：于2007年8月～2008年7月间,逐月采集深圳市大亚湾、大鹏湾海域的贝类,分别采用酶联免疫测定法和小鼠生物法对其腹泻性贝类毒素含量进行分析。结果：两种方法一致性较好,其中酶联... 详细信息

目的：了解深圳市海域贝类腹泻性毒素的污染状况。方法：于2007年8月～2008年7月间,逐月采集深圳市大亚湾、大鹏湾海域的贝类,分别采用酶联免疫测定法和小鼠生物法对其腹泻性贝类毒素含量进行分析。结果：两种方法一致性较好,其中酶联免疫测定法灵敏度较高,所调查的168份样品共有25份超出限量标准;腹泻性毒素存在一定的分布特征,夏秋季含量高,消化腺的含量高于贝肉,但两海域分布差异不明显。结论：深圳市大亚湾、大鹏湾海域的贝类存在一定程度的腹泻毒素污染,应加强对水产品的监测和毒素危害的宣传,确保食用安全。

关键词：腹泻性毒素酶联免疫测定法小鼠生物法监测深圳市贝类样品大亚湾两种方法大鹏湾海域

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磁性固相萃取技术用于贝类中软骨藻酸的分析

磁性固相萃取技术用于贝类中软骨藻酸的分析

第21届全国色谱学术报告会及仪器展览会

作者：林明霞童萍张兰福州大学食品安全分析与检测教育部重点实验室福州大学化学学院福州大学测试中心

＜正＞软骨藻酸毒素（DA）,是一类由拟菱形藻属产生的天然神经毒性氨基酸。DA通过受污染贝类或经食物链富集后最终被人们摄取,将引起人体神经信号传递紊乱,甚至短时间的记忆丧失。因此,构建一种针对DA的行之有效的定量检测方法对保障食... 详细信息

＜正＞软骨藻酸毒素（DA）,是一类由拟菱形藻属产生的天然神经毒性氨基酸。DA通过受污染贝类或经食物链富集后最终被人们摄取,将引起人体神经信号传递紊乱,甚至短时间的记忆丧失。因此,构建一种针对DA的行之有效的定量检测方法对保障食品安全及减少经济损失是很有必要的。目前,在已提出的众多DA检测方法中,高效液相色谱（HPLC）具有的高选择性、高灵敏度使其成为最常用的DA检测手段[1]。由于贝类样品中可能存在的基质干扰,在进行HPLC检测前需要进行

关键词：软骨藻酸 Fe3O4@ZIF-8 磁性固相萃取 HPLC-MS/MS 贝类样品

来源： cnki会议评论

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氢化物-原子荧光法测定贝类中的微量砷

山东环境 2003年第3期 37-38页

作者：赫旭杨青刘春花青岛市环境保护研究所胶南市环境保护局

本文研究了氢化物-原子荧光法测定贝类样品中微量砷的试验条件,试验了不同的消解体系、酸介质、预还原剂用量对测定砷的影响及贝类样品常见元素的干扰影响,选择了试验的最佳测定条件。结果表明:方法的检出限为0.20μg/L,相对标准偏差小... 详细信息

本文研究了氢化物-原子荧光法测定贝类样品中微量砷的试验条件,试验了不同的消解体系、酸介质、预还原剂用量对测定砷的影响及贝类样品常见元素的干扰影响,选择了试验的最佳测定条件。结果表明:方法的检出限为0.20μg/L,相对标准偏差小于3.8%。

关键词：氢化物-原子荧光法贝类样品微量砷