检索结果-南通市图书馆

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

豌豆细菌性疫病菌实时荧光PCR检测

植物检疫 2021年第6期35卷 33-38页

作者：杨秋夏钱俊婷陈青牟桂萍陈仲兵易建平上海海关动植物与食品检验检疫技术中心上海200135 厦门海关技术中心黄埔海关技术中心

为了快速准确检测豌豆细菌性疫病菌(Pseudomonas syringae ***,简称Ppi),根据Ppi序列分别设计类群I和类群II的特异探针P-PS1和P-PS2,建立了Ppi类群I和类群II的实时荧光PCR检测方法。探针P-PS1能扩增供试的5株Ppi类群I菌株,43株类群II菌... 详细信息

为了快速准确检测豌豆细菌性疫病菌(Pseudomonas syringae ***,简称Ppi),根据Ppi序列分别设计类群I和类群II的特异探针P-PS1和P-PS2,建立了Ppi类群I和类群II的实时荧光PCR检测方法。探针P-PS1能扩增供试的5株Ppi类群I菌株,43株类群II菌株和其他55株供试菌株均为阴性。探针P-PS2对供试的43株类群II菌株均表现为阳性扩增,5株类群I菌株和其他55株供试菌均为阴性扩增。不同稀释度菌体DNA的扩增结果显示探针P-PS1和探针P-PS2的检测灵敏度均为500 fg菌体DNA。进境豌豆样品的检测试验结果表明该检测方法可用于进境豌豆样品和疫情监测中Ppi的快速检测。

关键词：豌豆细菌性疫病菌检测实时荧光PCR

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

LAMP方法检测豌豆细菌性疫病菌

植物检疫 2013年第3期27卷 80-84页

作者：封立平尼秀媚厉艳吴兴海纪瑛甘琴华山东出入境检验检疫局山东青岛266002

本文应用环介导等温核酸扩增技术(LAMP)对豌豆细菌性疫病菌的肽相关脂蛋白(oprL)特异性基因进行扩增,采用2对引物识别目的片段的6个特异性区域,60 oC恒温1h完成扩增,设计的引物与假单胞属的近缘菌丁香假单胞菌丁香致病变种、绿黄假单胞... 详细信息

本文应用环介导等温核酸扩增技术(LAMP)对豌豆细菌性疫病菌的肽相关脂蛋白(oprL)特异性基因进行扩增,采用2对引物识别目的片段的6个特异性区域,60 oC恒温1h完成扩增,设计的引物与假单胞属的近缘菌丁香假单胞菌丁香致病变种、绿黄假单胞菌、丁香假单胞菌大豆致病变种、丁香假单胞菌菜豆致病变种都没有扩增反应,表现了较好的特异性。该LAMP检测方法与普通PCR相比灵敏度高100倍。同时,LAMP技术的检测程序便捷,所需设备简单,其结果可以通过肉眼观察来判断,比常规PCR能更早得到反应结果,因此该技术在该病菌的口岸检疫方面拥有更大的优势。

关键词：豌豆细菌性疫病菌 LAMP oprL 检测

基于豌豆细菌性疫病菌适配体的表面增强拉曼技术鉴定豌豆细菌性疫病菌的研究

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

山东农业工程学院学报 2022年第4期39卷 32-35页

作者：李建勇王英超李晓明陈晞张欢欢张卫华济南海关技术中心山东济南250014 青岛海关技术中心山东青岛266002 山东省农业科学院山东济南250014

本研究基于指数富集的配体系统进化技术(SELEX)筛选得到豌豆细菌性疫病菌特异性的核酸适配体Ppi1,并且将核酸适配体结合表面增强拉曼光谱技术(SERS)应用于丁香假单胞菌豌豆致病变种(Pseudomonas syringae ***)的检疫鉴定。结果表明将培... 详细信息

本研究基于指数富集的配体系统进化技术(SELEX)筛选得到豌豆细菌性疫病菌特异性的核酸适配体Ppi1,并且将核酸适配体结合表面增强拉曼光谱技术(SERS)应用于丁香假单胞菌豌豆致病变种(Pseudomonas syringae ***)的检疫鉴定。结果表明将培养的豌豆细菌性疫病菌(OD=0.4)菌液进行梯度稀释,取4个梯度进行检测,均在580cm-1和930 cm-1出现特征峰,而空白对照和阴性对照均未出现上述特征峰;在其他条件不变的情况下,随着浓度的递减,拉曼信号也逐渐减弱。该方法具有特异性强,灵敏度高,检测步骤简单、快速,周期短等特点。

关键词：核酸适配体豌豆细菌性疫病菌表面增强拉曼光谱

两种植物检疫性丁香假单胞病原细菌的分子检测技术研究

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

两种植物检疫性丁香假单胞病原细菌的分子检测技术研究

作者：陶中云浙江大学

学位级别：硕士

Pseudomonas syringae pv. pisi和Pseudomonas syringae pv. maculicola分别为豌豆细菌性疫病和十字花科细菌性黑斑病的致病菌,在我国均被列入《中华人民共和国进境植物检疫性有害生物名录》。本研究自主设计了针对这两种病菌的特异性引... 详细信息

Pseudomonas syringae pv. pisi和Pseudomonas syringae pv. maculicola分别为豌豆细菌性疫病和十字花科细菌性黑斑病的致病菌,在我国均被列入《中华人民共和国进境植物检疫性有害生物名录》。本研究自主设计了针对这两种病菌的特异性引物,建立了一套可靠、灵敏、快捷的分子检测方法,有望从源头上协助控制两种检疫性病菌的扩散,为我国的植物检疫提供技术支撑。本研究以150株包括两种靶标菌在内的植物相关细菌为模板进行了常规PCR扩增,结果表明两对特异性引物均没有出现假阳性和假阴性。灵敏度测试结果表明常规PCR测定豌豆细菌性疫病菌纯化DNA的检测限为103fg/μl,菌悬液的检测限为102CFU/ml实时荧光定量PCR测定纯化DNA的检测限可达102fg/μl,菌悬液的检测限达10FU/ml。豌豆模拟带菌活体样本的检测中,特异性引物能够分别从植物粗提物的102倍(常规PCR)、103倍(实时荧光定量PCR)稀释液中检测到靶标细菌。以十字花科细菌性黑斑病菌的纯化DNA及菌悬液梯度稀释产物为模板进行的灵敏度测试中,常规PCR以及实时荧光定量PCR的检测限均为102fg/μl和10CFU/ml。在模拟种子带菌的检测中,常规PCR对经种子浸泡液稀释过的菌悬液的检测限为105CFU/ml,实时荧光定量PCR的检测限为103CFU/ml。模拟带菌种子抽样检测的结果表明,常规PCR可以检测出带菌率为5%的种子样本(即10g种子中含0.5g带菌种子),而实时荧光定量PCR可以检测出带菌率为2.5%的种子样本(10g种子中含0.25g带菌种子)。本研究通过对检测样本中的靶标菌进行富集培养后再进行检测,大大提高了检测精度,结果表明常规PCR和实时荧光定量PCR均可检出千分之一带菌率的种子。

关键词：豌豆细菌性疫病菌十字花科黑斑病菌常规PCR 荧光定量PCR