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谷胱甘肽s-转移酶pi抑制血管平滑肌细胞表型转化的作用及机制研究

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谷胱甘肽S-转移酶pi抑制血管平滑肌细胞表型转化的作用及机制研究

作者：佘蓉南京大学

学位级别：硕士

血管平滑肌细胞（vascular smooth muscle cells,VsMC）是血管壁中膜的主要组成细胞。正常的血管中VsMC呈收缩表型,分化程度高,呈典型的纺锤形或条带状,高表达收缩型VsMC标志蛋白如血管肌动蛋白相关蛋白（sM22 alpha,sM22α）、平滑肌α... 详细信息

血管平滑肌细胞（vascular smooth muscle cells,VsMC）是血管壁中膜的主要组成细胞。正常的血管中VsMC呈收缩表型,分化程度高,呈典型的纺锤形或条带状,高表达收缩型VsMC标志蛋白如血管肌动蛋白相关蛋白（sM22 alpha,sM22α）、平滑肌α-肌动蛋白（smooth muscle alpha-actin,α-sMA）及sM-MHC等。当血管受损时,VsMC可在各种因素如生长因子刺激下转化为合成表型,其分化程度低,细胞收缩能力下降,可增殖和迁移并且能够合成和分泌大量的细胞外基质。合成型VsMC形态上类似成纤维细胞,呈扁平形,细胞体积较大,缺乏肌纤维,富含粗面内质网、高尔基体、核糖体等,并高表达骨桥蛋白（osteopontin,OPN）等合成型VsMC标志蛋白。VsMC表型转化普遍存在于动脉粥样硬化、高血压和血管成形术后再狭窄等心血管疾病的发生和发展过程中,因此抑制VsMC表型转化可能是预防和治疗心血管疾病的有效措施。血小板源生长因子B（platelet-derived growth factor-B,PDGF-BB）是一种促细胞分裂因子,能够诱导VsMC表型转化,在新内膜的形成中起着至关重要的作用。在正常成熟血管中,PDGF及其受体的表达较低,当血管损伤时,PDGF表达异常增加。有证据表明PDGF可通过抑制α-sMA和钙调蛋白的表达来促进VsMC从收缩表型转变为合成表型。谷胱甘肽s-转移酶pi（Glutathione s-transferases-pi,GsTpi）普遍存在于细胞中,最初发现其能够催化谷胱甘肽（Glutathione,GsH）与亲电子底物结合形成复合物以进行解毒作用。GsTpi还可以通过蛋白-蛋白结合的方式调控各种激酶。有证据表明GsTpi对血管紧张素II诱导的VsMC增殖和迁移具有抑制作用,但GsTpi对VsMC表型转化相关蛋白的作用尚未见报道。本论文旨在探讨GsTpi抑制VsMC表型转化的作用机制。我们首先用PDGF-BB刺激VsMC,发现内源性GsTpi蛋白表达升高,据此推测上调的GsTpi可能参与调控PDGF-BB诱导的内膜增生性疾病相关的血管重塑。而用pc DNA3-Xpress-GsTpi（1.5μg/m L）真核表达质粒转染VsMC后,我们发现过表达GsTpi可以升高PDGFBB降低的VsMC收缩表型蛋白（sMA和sM22α）水平,并降低合成表型蛋白（OPN）水平,进而阻断了细胞周期从G0/G1期向s期的进程。进一步研究结果显示,PDGFBB刺激VsMC可使细胞中GsTpi的184位丝氨酸残基发生磷酸化,使其从细胞质转移至细胞核。qRT-PCR结果显示,PDGF-BB刺激VsMC后,合成型VsMC标记物OPN的mRNA水平显著升高,收缩型标记物sMA和sM22α的mRNA水平显著降低。而过表达GsTpi s184D显著逆转了PDGF-BB对OPN、sMA和sM22α的mRNA水平的调控作用。据此我们推测GsTpi可能通过影响核内相关转录过程来调控VsMC的表型转化。CREB结合蛋白（CREB binding protein,CBP）是一种转录辅助因子,可与序列特异性DNA结合转录因子;同时也是乙酰化转移酶,能在目标启动子附近使组蛋白乙酰化,从而参与DNA修复、细胞生长、凋亡和炎症反应等。我们发现过表达GsTpi可以促进CBP入核,维持核内CBP活性。而使用CBP溴区结构域抑制剂sGC-CBP30与GsTpi共处理VsMC后,可逆转GsTpi对VsMC表型转化的抑制作用,表明GsTpi对VsMC的表现转换调控依赖于CBP核内活性的维持。综上所述,本研究表明PDGF-BB刺激VsMC后,GsTpi磷酸化并进入细胞核,通过调节CBP在核内的蛋白水平及活性,从而对VsMC的表型转化起负调控作用,为后续对内膜增生性疾病及动脉粥样硬化的研究提供了新的思路。

关键词：血管平滑肌细胞谷胱甘肽s-转移酶pi 血小板源生长因子-B CREB结合蛋白

儿童急性白血病患者的谷胱甘肽s-转移酶pi基因多态性分析

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中华医学杂志 2003年第21期83卷 1863-1866页

作者：袁晓军顾龙君薛惠良汤静燕赵金彩陈静王耀平陈静潘慈宋得莲上海第二医科大学附属新华医院上海儿童医学中心血液肿瘤科 200127

目的　研究谷胱甘肽s 转移酶pi(GsT pi)的基因型多态性在中国儿童急性白血病 (AL)中的频率分布特征 ,探讨GsT pi基因变异与儿童白血病的易感性及化疗效应之间可能的相关性。方法　采用DNA直接测序法对 12 0例AL患儿和 85名健康儿童进行G... 详细信息

目的　研究谷胱甘肽s 转移酶pi(GsT pi)的基因型多态性在中国儿童急性白血病 (AL)中的频率分布特征 ,探讨GsT pi基因变异与儿童白血病的易感性及化疗效应之间可能的相关性。方法　采用DNA直接测序法对 12 0例AL患儿和 85名健康儿童进行GsT pi基因型的测定 ,分析各基因型在AL儿童与健康对照者之间的分布差异。结果　AL患儿GsT pi外显子 5的突变率为 4 7 5 % ,明显高于健康儿童的 31 8% (OR =1 94 4 ,95 %CI为 1 0 88～ 3 4 73) ,其多态性分布特征与国外报道相似。其中 ,ALL患儿外显子 5的基因突变率增高更明显 ,而AML患儿与健康儿童的差异未达到显著水平 ;B系ALL患儿的总突变率 (6 0 3% )明显高于T ALL儿童 (4 7 1% ) ,但后者的纯合子突变率(17 6 % )显著高于前者 (3 4 % ) (P值均 sT pi外显子 6存在文献报道的Ala114 Val变异基因型 ,但发现了两个新的突变基因型 :1例健康儿童的外显子 6第 99位点出现A/G杂合 ,该杂合基因型未引起氨基酸的改变 ;2例白血病儿童在外显子 6第 10 3测序位点发生G→T/G碱?

关键词：儿童急性白血病谷胱甘肽s-转移酶pi 基因多态性

谷胱甘肽s-转移酶pi(GsTP1)Ile105Val多态性与皮肤黑色素瘤发病风险相关性的Meta分析

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中国循证医学杂志 2016年第9期16卷 1035-1039页

作者：龚德浩龚辰熊芳四川省达州市中西医结合医院四川达州635000 厦门大学医学院福建厦门361102

目的系统评价谷胱甘肽s-转移酶pi(GsTP1)Ile105Val多态性与皮肤黑色素瘤的相关性。方法计算机检索Pub Med、EMbase、CNKI和Wan Fang Data数据库,搜集GsTP1 Ile105Val多态性与皮肤黑色素瘤相关性的病例-对照研究,检索时限截至2016年6月3... 详细信息

目的系统评价谷胱甘肽s-转移酶pi(GsTP1)Ile105Val多态性与皮肤黑色素瘤的相关性。方法计算机检索Pub Med、EMbase、CNKI和Wan Fang Data数据库,搜集GsTP1 Ile105Val多态性与皮肤黑色素瘤相关性的病例-对照研究,检索时限截至2016年6月31日。由2位研究者独立筛选文献、提取资料和评价纳入研究的偏倚风险后,采用Rev Man 5.3软件进行Meta分析。结果最终纳入4个病例-对照研究,共981例病例和796例对照。Meta分析结果显示,在显性模型(GG+GA ***)下,GsTP1 Ile105Val多态性与皮肤黑色素瘤发病风险存在相关性,且差异有统计学意义[OR=1.22,95%CI(1.01,1.48),P=0.04],但在隐性、杂合子、纯合子模型下,GsTP1基因Ile105Val(A/G)多态性与皮肤黑色素瘤发病风险无相关性[GG ***+AA:OR=1.18,95%CI(0.86,1.60),P=0.30;GA ***:OR=1.28,95%CI(0.92,1.77),P=0.14;GG ***:OR=1.20,95%CI(0.98,1.47),P=0.08]。结论当前证据显示,在显性模型下,GsTP1 Ile105Val多态性与皮肤黑色素瘤存在相关性,可能增加皮肤黑色素瘤的发病风险。

关键词：谷胱甘肽s-转移酶pi GsTP1 le105Val 多态性 Meta分析病例-对照研究

人谷胱甘肽 s-转移酶pi(GsTp)中半胱氨酸对其在细胞氧化应激下功能的影响

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实验生物学报 2004年第3期37卷 176-182页

作者：司马健何兰朱键薛彬邰一琳张双全殷志敏南京师范大学生命科学学院南京210097

利用PCR定点突变技术构建人GsTp三种半胱氨酸突变体C^(47/101)、C^(14/47/101)和C^(14/47/101/169)。将CsTp 野生型和突变体表达质粒转染293细胞,以CDNB 为底物测定胞内GsT 的转移酶活性,结果显示各类突变体均明显抑制了细胞内源性CsT ... 详细信息

利用PCR定点突变技术构建人GsTp三种半胱氨酸突变体C^(47/101)、C^(14/47/101)和C^(14/47/101/169)。将CsTp 野生型和突变体表达质粒转染293细胞,以CDNB 为底物测定胞内GsT 的转移酶活性,结果显示各类突变体均明显抑制了细胞内源性CsT 的催化活性,具有显著的负显性(dominant nega-tive)突变体的功能;将CsTp 野生型和突变体与c-Jun、NF-kB 和p53的报告基因载体共转染,通过萤光素酶活性测定发现突变体C^(14/47/101)和C^(14/47/101/169)能明显激活c-Jun 和p21的转录活性;Western印迹分析显示突变体均能上调细胞内p21蛋白的水平,细胞存活率的测定表明GsTp 突变体能增强293细胞对H_2O_2刺激的敏感性;实验结果表明半胱氨酸残基对于维持GsTp 在对抗细胞氧化应激过程中的保护作用至关重要。

关键词：人谷胱甘肽s-转移酶pi GsTp 半胱氨酸定点突变氧化应激负显性

NBDHEX调控谷胱甘肽s-转移酶pi磷酸化在乳腺癌阿霉素耐药中的研究

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NBDHEX调控谷胱甘肽S-转移酶pi磷酸化在乳腺癌阿霉素耐药中的研究

作者：沙欢欢南京医科大学

学位级别：硕士

目的:探讨谷胱甘肽s-转移酶pi(GsTpi)磷酸化对乳腺癌阿霉素耐药性的影响,并探讨GsTpi新型抑制剂NBDHEX是否通过抑制GsTpi磷酸化逆转乳腺癌阿霉素耐药。方法:1、用CCK-8法检测乳腺癌细胞株MCF-7和MCF-7/ADR对阿霉素的敏感性。采用Western... 详细信息

目的:探讨谷胱甘肽s-转移酶pi(GsTpi)磷酸化对乳腺癌阿霉素耐药性的影响,并探讨GsTpi新型抑制剂NBDHEX是否通过抑制GsTpi磷酸化逆转乳腺癌阿霉素耐药。方法:1、用CCK-8法检测乳腺癌细胞株MCF-7和MCF-7/ADR对阿霉素的敏感性。采用Western Blot和免疫荧光技术检测GsTpi在这两种细胞株的表达以及细胞内定位。2、用GsTpi质粒转染MCF-7,sh RNA质粒转染MCF-7/ADR,用Crispr/Cas构建和筛选GsTpi敲降的MCF-7/ADR细胞株。采用Western Blot和免疫荧光技术检测GsTpi的表达。用CCK-8法检测GsTpi表达变化对乳腺癌细胞阿霉素耐药性的影响。3、酶活实验检测NBDHEX对GsTpi活性的影响。CCK-8法检测NBDHEX对细胞的毒性作用以及对阿霉素敏感性的影响。流式细胞术检测凋亡率及Western Blot检测凋亡相关蛋白进一步验证NBDHEX对阿霉素耐药性的影响。4、采用质谱技术检测MCF-7/ADR中GsTpi的磷酸化位点。酶活实验检测各位点磷酸化对GsTpi活性的影响。CCK-8法检测GsTpi磷酸化对乳腺癌细胞阿霉素耐药性的影响。Western Blot评估NBDHEX对GsTpi磷酸化水平的影响。5、应用Western Blot和免疫荧光技术检测GsTpi磷酸化对其核易位的影响。结果:1、Western Blot及免疫荧光结果显示GsTpi在敏感株MCF-7中无表达,而在耐药株MCF-7/ADR中表达并且富集于细胞核。2、与对照组相比,MCF-7过表达GsTpi后细胞IC50升高。与对照组相比,GsTpi-sh RNA下调MCF-7/ADR GsTpi表达后,IC50降低。筛选出三株GsTpi敲降的MCF-7/ADR,与对照组相比,它们的IC50也降低。3、酶活实验结果表明NBDHEX可以抑制GsTpi活性。CCK-8结果显示NBDHEX单药对细胞生长无抑制作用,但其可增加细胞对阿霉素的敏感性。流式细胞术和Western Blot结果表明NBDHEX联合阿霉素可以促进MCF-7/ADR细胞凋亡。4、质谱分析结果表明MCF-7/ADR中GsTpi蛋白存在多个位点的酪氨酸磷酸化。酶活实验及CCK-8结果表明GsTpi第7位点的酪氨酸磷酸化增强GsTpi活性,并且可以介导乳腺癌细胞对阿霉素的耐药性。Western Blot结果提示NBDHEX可以抑制GsTpi酪氨酸磷酸化的水平。5、Western Blot、免疫荧光结果表明GsTpi磷酸化可以促进GsTpi核易位。结论:1、GsTpi的表达水平与乳腺癌细胞对阿霉素的耐药性呈正相关。2、GsTpi第7位点的酪氨酸磷酸化增加其自身活性,介导耐药。此外,GsTpi磷酸化还可促进GsTpi核易位。3、NBDHEX可通过抑制GsTpi磷酸化抑制其活性,从而逆转乳腺癌细胞对阿霉素的耐药性。

关键词： NBDHEX 谷胱甘肽s-转移酶pi 磷酸化阿霉素耐药乳腺癌

谷胱甘肽s-转移酶pi在宫颈癌中的表达及临床意义

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中国癌症杂志 2001年第2期11卷 189-189页

作者：阮永华张灿珍杨西敏梁正南刘宝源陈云昆明医学院病理学教研室云南昆明650031 昆明医学院附属肿瘤医院病理科云南昆明650031

1982年Tew等首先发现谷胱甘肽s-转移酶(GsT)活性增高与肿瘤细胞获得性抗药性有关。为了解宫颈癌中GsTpi表达与化疗的关系及其临床意义，估测肿瘤对化疗药物的敏感性，为宫颈癌预见性化疗提供依据，我们用s—P免疫组化法检测了107例宫颈... 详细信息

1982年Tew等首先发现谷胱甘肽s-转移酶(GsT)活性增高与肿瘤细胞获得性抗药性有关。为了解宫颈癌中GsTpi表达与化疗的关系及其临床意义，估测肿瘤对化疗药物的敏感性，为宫颈癌预见性化疗提供依据，我们用s—P免疫组化法检测了107例宫颈组织中GsTpi的表达情况。材料和方法一研究对象选自本教研室及肿瘤医院病理科近9年宫颈活检及子宫切除标本共107例。宫颈癌73例(鳞癌56例，腺癌17例)，平均48.6岁。宫颈上皮内瘤变25例，正常宫颈9例。二免疫组化标记 GsTpi单克隆抗体(克隆号353—10)、s—P试剂盒及阳性对照片均为Mixin公司产品。石蜡切片经微波抗原修复，常规s—P免疫组化操作、DAB显色、苏木素复染、光镜观察。实验设立阳性对照及阴性对照。三判断标准参照张胜本等［1］标准分为4级：阴性(-)，无棕色颗粒；弱阳性(+)；胞浆淡棕色，只染色于个别细胞；中度阳性(++)，胞浆为棕色，其分布范围广泛或呈多灶性；强阳性(+++)，GsTpi活性显著升高，胞浆或胞核呈深棕色。四统计处理结果以χ2检验做统计学处理。

关键词：宫颈癌谷胱甘肽s-转移酶pi 免疫组织化学

超敏C反应蛋白和人谷胱甘肽硫转移酶pi及膜联蛋白A5在老年陈旧性心肌梗死患者的表达及临床意义

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中华老年医学杂志 2016年第9期35卷 944-947页

作者：张枫林胡有东陈颖郭殿选周华兰赵庆娜李侠徐州医学院附属淮安医院老年病科淮安223002

目的研究陈旧性心肌梗死老年患者循环超敏c-反应蛋白（high-sensitivity C-reactiveprotein，hs-CRP）、人谷胱甘肽硫转移酶pi（glutathione s-transferase pi，GsTpi）和膜联蛋白A5（annexinA5，AnxA5）水平的变化。方法前瞻性研究，连续人选2012年12月至2015年11月老年陈旧性心肌梗死患者185例。采用酶联免疫吸附法（ELIsA）检测GsTpi和AnxA5水平的变化，应用免疫散射比浊法测定hs-CRP的水平。结果随老年陈旧性心肌梗死患者冠状动脉狭窄程度的加重，GsTpi水平下降，AnxA5和hs-CRP水平升高。冠状动脉狭窄〉95％组GsTpi（190．0±37．0）μg／L、AnxA5（33．9±4．0）μg／L、hs-CRP（15．3±1．3）mg／L，与冠状动脉狭窄55％-65％组GsTpi（289．0±86．0）μg／L AnxA5（8．1±2．9）μg／L、hs-CRP（5．9±0．8）mg／L比较，差异有统计学意义（均P〈0．01）；左心室射血分数（LVEF）45％-54％组GsTpi（219．0±61．0）μg／L、AnxA5（12．9±3．9）μg／L、hs-CRP（10．1±1．0）mg／L，与I。VEF％30％组GsTpi（198．0±39．0）μg／L、AnxA（538．9±5．10）μg／L、hs-CRP（17．9±1．9）mg／L比较，差异有统计学意义（均P〈0．01）；NYHAⅠ级组GsTpi、AnxA5、hs-CRP与NYHAⅣ级组比较，差异有统计学意义（均声〈0．01）。结论GsTpi、AnxA5和hs-CRP水平的变化可能影响老年陈旧性心肌梗死患者冠状动脉狭窄和心力衰竭的严重程度。

关键词：谷胱甘肽s-转移酶pi 膜联蛋白A5 C反应蛋白质心肌梗死

谷胱甘肽s-转移酶-π与肿瘤多药耐药的研究进展

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胃肠病学 2010年第12期15卷 755-757页

作者：王慧群张开光安徽医科大学附属省立医院消化内科

肿瘤多药耐药（MDR）是造成肿瘤化疗失败的主要因为,亦是近年肿瘤化疗的研究热点.随着对非P-糖蛋白（P-gp）介导的MDR机制研究的不断深入,证实谷胱甘肽s-转移酶-π（GsT-π）在肿瘤MDR中发挥重要作用,有望成为新的肿瘤治疗靶点.本文就G... 详细信息

肿瘤多药耐药（MDR）是造成肿瘤化疗失败的主要因为,亦是近年肿瘤化疗的研究热点.随着对非P-糖蛋白（P-gp）介导的MDR机制研究的不断深入,证实谷胱甘肽s-转移酶-π（GsT-π）在肿瘤MDR中发挥重要作用,有望成为新的肿瘤治疗靶点.本文就GsT-π的生理特性、分布、耐药机制、检测手段和逆转由GsT-π介导的MDR等方面作一综述.

关键词：抗药性,肿瘤谷胱甘肽s-转移酶pi P糖蛋白

谷胱甘肽s-转移酶P1基因多态性与散发性结直肠腺癌易感性的关系

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胃肠病学 2008年第3期13卷 163-166页

作者：张定亮闵小彦林李淼陈浩王建嶂裴继华林秀清温州医学院附属第二医院消化内科 325027

背景:谷胱甘肽s-转移酶(GsT)属Ⅱ相代谢酶,在人体内参与多种致癌物的解毒作用。目的:探讨GsTP1基因多态性与散发性结直肠腺癌(sCRAC)遗传易感性的关系。方法:118例sCRAC患者和140名健康对照者纳入研究。采用聚合酶链反应-限制性片段长... 详细信息

背景:谷胱甘肽s-转移酶(GsT)属Ⅱ相代谢酶,在人体内参与多种致癌物的解毒作用。目的:探讨GsTP1基因多态性与散发性结直肠腺癌(sCRAC)遗传易感性的关系。方法:118例sCRAC患者和140名健康对照者纳入研究。采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)检测GsTP1基因第5外显子105位密码子单核苷酸多态性,分析两组间GsTP1等位基因和基因型的差异。结果:sCRAC组GsTP1突变型等位基因(Val)频率显著高于健康对照组(57.6%对40.7%,P=0.000);纯合突变基因型(Val/Val)频率亦高于健康对照组,但差异无统计学意义(44.1%对30.7%,P=0.027)。根据临床病理特征对sCRAC患者进行分层分析,Dukes C期和低分化腺癌Val/Val基因型频率分别显著高于Dukes A、B期(P=0.007)和高、中分化腺癌(P=0.002)。结论:GsTP1基因多态性与sCRAC相关,纯合突变基因型携带者对sCRAC的易感性增加。

关键词：谷胱甘肽s-转移酶pi 多态性单核苷酸结直肠肿瘤散发性疾病易感性聚合酶链反应多态性-限制性片断长度