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谷胱甘肽过氧化物酶8（GPX8）在胶质瘤中的表达及机制初步研究

谷胱甘肽过氧化物酶8（GPX8）在胶质瘤中的表达及机制初步研究

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作者：李光明安徽理工大学

学位级别：硕士

目的:通过分析胶质瘤m RNA-seq图谱,探索GPXs在胶质瘤上更多表达特征和潜在生物学信息。结合TCGA分析结果和免疫浸润确定核心基因GPX8,并进一步探究GPX8在胶质瘤患者样本中的表达。最后,结合体外实验研究GPX8对人胶质瘤细胞系增殖、迁... 详细信息

目的:通过分析胶质瘤m RNA-seq图谱,探索GPXs在胶质瘤上更多表达特征和潜在生物学信息。结合TCGA分析结果和免疫浸润确定核心基因GPX8,并进一步探究GPX8在胶质瘤患者样本中的表达。最后,结合体外实验研究GPX8对人胶质瘤细胞系增殖、迁移的影响。方法:1、收集TCGA中胶质瘤的表达谱和临床资料用于计算分析;使用CGGA中胶质瘤的表达谱和临床资料用于验证分析队列。基于TCGA和CGGA(CGGA中不含GPX5和GPX6),分析GPXs之间基因相关性。2、GEPIA2数据库查看GPXs各亚型基因在TCGA和GTEx数据中的胶质瘤差异表达,初步筛选GPXs在胶质瘤中的差异基因。使用R语言置GPXs于TCGA数据库进行单基因生存分析,确定GPX7和GPX8高表达导致较差的预后。3、使用免疫荧光共定位分析GPX8与多个免疫检查点的相关性,探究GPX8与肿瘤免疫微环境的联系。4、收集临床胶质瘤组织标本和重型颅脑外伤手术清除脑组织,采用RT-q PCR和Western Blot方法进行GPX8表达情况验证。5、应用Western blot检测GPX8在人胶质瘤细胞中的表达。6、设计GPX8敲低质粒,构建GPX8稳转株,并采用Western Blot方法验证LN229和T98G细胞中GPX8的敲减效率。7、下调GPX8探究对细胞增殖、迁移等细胞生物学功能。结果:1、TCGA数据库分析基因的蛋白相互作用,发现GPX1、GPX4、GPX7和GPX8基因密切相关。结合TCGA分析结果确定高表达且预后差基因为GPX7和GPX8。最后将GPX7和GPX8于TCGA和CGGA数据中进行单因素和多因素风险回归分析。最终确定GPX7和GPX8为胶质瘤为预后相关风险因素,且免疫浸润显示GPX8在高级别胶质瘤和低级别胶质瘤中与肿瘤免疫评分相关。2、免疫荧光共定位分析发现高级别胶质瘤和低级别胶质瘤中GPX8与CD274,CTLA4和TIGIT显着正相关。低级别胶质瘤中GPX8与LAG3的相关性显著高于对照组,高级别胶质瘤中GPX8与LAG3之间未发现相关性。3、荧光定量PCR和Western Blot结果显示相较于重型颅脑外伤坏死脑组织,三对低级别胶质瘤和三对高级别胶质瘤GPX8表达量均显著增高(P<0.005)。4、以正常人脑胶质细胞系HEB为对照,在U87,LN229,T98胶质瘤细胞株中,GPX8在LN229和T98G细胞中表达最高。细胞功能实验显示敲低GPX8可以抑制胶质瘤细胞的增殖(P<0.005)、迁移能力(P<0.001)。结论:综上,GPX8在胶质瘤组织及细胞中表达上调,且高表达患者预后较差。GPX8可以促进胶质瘤细胞的增殖、迁移与侵袭能力,这些结果提示,GPX8可能作为胶质瘤潜在的生物标志物或胶质瘤患者治疗的新靶点。图[21]表[18]参[57]

关键词：胶质瘤谷胱甘肽过氧化物酶基因家族 GPX8 细胞增殖细胞迁移细胞凋亡

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