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GAD对NOD小鼠β细胞淋巴细胞性炎症的防护作用

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复旦学报（医学版） 2001年第3期28卷 239-242,247页

作者：刘芳俞茂华朱秋毓周俊淇李吟遒钟慈声复旦大学附属华山医院内分泌科复旦大学基础医学院电镜室上海200032

目的　了解GAD对NOD小鼠的 1型糖尿病是否具有预防作用并探讨其免疫作用机制。方法　用猪脑GAD 50 μg和不完全弗氏佐剂 (FIA) 50 μl混合后给 4周龄雌性NOD小鼠腹腔注射 (ip) (n =3 2 ) ,同时单独注射等量FIA作为对照组 (n =1 9)。 8... 详细信息

目的　了解GAD对NOD小鼠的 1型糖尿病是否具有预防作用并探讨其免疫作用机制。方法　用猪脑GAD 50 μg和不完全弗氏佐剂 (FIA) 50 μl混合后给 4周龄雌性NOD小鼠腹腔注射 (ip) (n =3 2 ) ,同时单独注射等量FIA作为对照组 (n =1 9)。 8周龄时环磷酰胺 (CY) 2 50mg/kgip以加速糖尿病。每周测定体重、血糖 ,2 0周龄处死小鼠后测定血清C 肽、观察胰腺病理和超微结构变化。结果　 2 0周龄时 ,FIA对照组的糖尿病总发病率为 73 .58% ,而GAD组仅有 6.2 5%小鼠发生糖尿病 (P 脱颗粒、分泌颗粒空泡样变等超微结构异常 ,而GAD组胰岛 β细胞数显著多于对照组 (P <0 .0 5) ,且无上述超微异常。结论　猪脑GAD可预防NOD小鼠胰岛炎发生。

关键词：谷氨酸脱羟酶非肥胖糖尿病胰岛炎超微结构 GAD NOD β细胞

谷氨酸脱羧酶电极与大肠杆菌膜电极的比较研究

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分析化学 1993年第3期 251-254页

作者：孔继烈何红邓家祺复旦大学化学系复旦大学化学系上海 200433

本文研究了分别用谷氨酸脱羧酶和大肠杆菌作为催化L-谷氨酸脱羧的酶材料来制作的生物传感器的响应性能。结果表明这两种电极各具特点。谷氨酸脱羧酶电极对底物L-谷氨酸的校正曲线的线性范围为3.16×10;mol/L～1.0×10;mol/L。斜率为46mV... 详细信息

本文研究了分别用谷氨酸脱羧酶和大肠杆菌作为催化L-谷氨酸脱羧的酶材料来制作的生物传感器的响应性能。结果表明这两种电极各具特点。谷氨酸脱羧酶电极对底物L-谷氨酸的校正曲线的线性范围为3.16×10;mol/L～1.0×10;mol/L。斜率为46mV,响应时间为6～8min电极寿命仅为5天。而大肠杆菌膜电极线性范围为4.22×10;mol/L～1.78×10;mol/L,斜率为48.5mV,响应时间为8～9min,电极寿命达34天。这两种电极对底物L-谷氨酸皆具有专一的选择性,且在磷酸吡哆醛的存在下,活性都有所增加。将电极用于味精中L-谷氨酸钠的测定,获得较满意的结果。

关键词：谷氨酸脱羟酶大肠杆菌生物传感器 L-谷氨酸

ICA512/IA-2抗体及GAD抗体联合检测筛查自身免疫中介1型糖尿病

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上海医学 2001年第4期24卷 214-216页

作者：张如根项坤三潘晓平上海市第六人民医院内分泌科上海市糖尿病研究所200233 上海市长宁区中心医院内分泌科

目的　应用ICA5 12 /IA 2抗体与谷氨酸脱羧酶 (GAD)抗体联合筛查中国人糖尿病患者中的自身免疫中介 1型糖尿病。方法　 487例中国人 ,按原WHO 1985标准诊断为非糖尿病 10 9例、IDDM 35例及NID DM 34 3例。对象血清ICA5 12 /IA 2抗体及GA... 详细信息

目的　应用ICA5 12 /IA 2抗体与谷氨酸脱羧酶 (GAD)抗体联合筛查中国人糖尿病患者中的自身免疫中介 1型糖尿病。方法　 487例中国人 ,按原WHO 1985标准诊断为非糖尿病 10 9例、IDDM 35例及NID DM 34 3例。对象血清ICA5 12 /IA 2抗体及GAD抗体的检测采用放射配体法 ,以人重组ICA5 12 /IA 2及GAD6 5为抗原 (英国RSR公司 )。结果　 (1)非糖尿病、IDDM组及NIDDM组ICA5 12 /IA 2抗体阳性率分别为0 .9%、14.3%及 2 .3% (IDDM组比非糖尿病组及NIDDM组P均 5年者中分别占 5 2 .0 %、30 .0 %及 17.5 % (P <0 .0 5 )。结论　在中国人临床表现为NIDDM患者中 ,至少有 12 .0 %为自身免疫中介 1型糖尿病。

关键词： ICA512/IA-2抗全 GAD抗体 Ⅰ型糖尿病谷氨酸脱羟酶 GAD

霍乱毒素B亚单位与糖尿病自身抗原表位肽融合基因的克隆、表达及鉴定

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霍乱毒素B亚单位与糖尿病自身抗原表位肽融合基因的克隆、表达及...

作者：刘利成西南大学

学位级别：硕士

通过口服自身抗原诱导免疫耐受能够延迟和抑止自身免疫型疾病和过敏反应，但是口服诱导免疫耐受需要大剂量的抗原或者长期给予小剂量的抗原，而且只有在一个相当窄的范围内有效，免疫致敏个体中免疫耐受难于诱导。霍乱毒素B亚单位分子(c... 详细信息

通过口服自身抗原诱导免疫耐受能够延迟和抑止自身免疫型疾病和过敏反应，但是口服诱导免疫耐受需要大剂量的抗原或者长期给予小剂量的抗原，而且只有在一个相当窄的范围内有效，免疫致敏个体中免疫耐受难于诱导。霍乱毒素B亚单位分子(cholera toxin B、(CTB)能够克服上述缺点。CTB作为一种载体蛋白分子与糖尿病自身抗原胰岛素B(Insulin B，InsB)链分子交联后口服NOD(non-obese diabetic)小鼠，能够显著减轻胰岛炎症程度和Ⅰ型糖尿病的发生率，而且所需的胰岛素剂量只有单纯使用胰岛素的1／500-1／5000，但是化学交联蛋白成份复杂，难于纯化，而基因工程融合蛋白分子较化学交联蛋白分子有明显的优越性，融合蛋白分子具有操作简便，组分单一等特点。本实验通过重叠PCR技术分别将胰岛素B链基因和谷氨酸脱羧酶(Glutamate acid decarboxylase，GAD)(531-545)肽段基因分别融合到CTB基因的3′端，获得融合基因CTB-InsB(CI)，CTB-GAD(CG)。将CI、CG基因酶切后克隆到pET22b载体上，转化BL21(DE3)感受态细胞。经FML培养基中的乳糖诱导重组质粒表达目的蛋白。表达产物经SDS-PAGE电泳分析后表明该菌株可以表达目的蛋白，CG的分子量为14KD，CI的分子量为17KD，表达产物以包涵体形式表达。CG的表达量占全菌蛋白的30％左右，CI的表达量占全菌蛋白的35％左右。超声破菌后获得包涵体，经2M尿素溶液洗涤后，溶于8M的尿素溶液中，以稀释复性的方式对变性蛋白进行复性。复性蛋白经P．F．F疏水柱纯化，对纯化产物进行脱盐，浓缩处理后蛋白纯度达到90％。Western-blotting表明该融合CI和CG蛋白分子具有霍乱毒素抗原性，能够与CTB抗体特异性的结合。体外实验结果说明CI和CG能够特异性结合神经

关键词：霍乱毒素B亚单位胰岛素谷氨酸脱羟酶大肠杆菌

低频重复经颅磁刺激对癫痫大鼠行为及GAD65、NMDAR1表达的影响

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低频重复经颅磁刺激对癫痫大鼠行为及GAD65、NMDAR1表达的影响

作者：张军强成都中医药大学

学位级别：硕士

目的观察低频重复经颅磁刺激(rTMS)对癫痫大鼠模型痫性发作行为及海马区谷氨酸脱羟酶65(GAD65)、N-甲基-D-天门冬氨酸受体1(NMDAR1)表达的影响,探讨rTMS的抗痫作用及可能机制。方法选择健康雄性wistar大鼠50只,随机分为磁刺激组(包括0.... 详细信息

目的观察低频重复经颅磁刺激(rTMS)对癫痫大鼠模型痫性发作行为及海马区谷氨酸脱羟酶65(GAD65)、N-甲基-D-天门冬氨酸受体1(NMDAR1)表达的影响,探讨rTMS的抗痫作用及可能机制。方法选择健康雄性wistar大鼠50只,随机分为磁刺激组(包括0.3Hz刺激组、0.5Hz刺激组、0.8Hz刺激组、1.0Hz刺激组)及假刺激组,共5组,每组10只,各组进行相应预处理后,制作氯化锂-匹罗卡品癫痫急性模型,腹腔注射氯化锂3 mmol/kg,注射20h后腹腔注射东莨菪碱1mg/kg,30min后腹腔注射匹鲁卡品30 mg/kg,观察大鼠行为学变化。Ⅳ级以上痫性发作1h后腹腔注射10%水合氯醛(300mg/kg)终止发作,观察一周后,断头取脑切片,行HE染色及免疫组织化学染色观察海马区GAD65和NMDAR1的表达。结果rTMS刺激组大鼠刺激期间未见痫性发作及颅内出血征象,各组大鼠注射匹鲁卡品后均出现痫性发作,表现为点头、甩尾、须动、头面抽动、前肢、后肢抽动、全身抽动、窜动、直立等,49只达到Ⅳ级以上发作,其中有2只终止后死亡。rTMS刺激组大鼠(0.3Hz刺激组、0.5Hz刺激组、0.8Hz刺激组、1.0Hz刺激组)痫性发作潜伏期均比rTMS假刺激组延长,差异均有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01),其中0.5Hz刺激组最长;0.5Hz刺激组大鼠出现的痫性发作行为次数均比0.3Hz刺激组、0.8Hz刺激组、1.0Hz刺激组少,且整体发作程度轻,差异有统计学意义(P＜0.05)。rTMS刺激各组大鼠海马神经元GAD65的表达量明显高于rTMS假刺激组(均P＜0.05或P＜0.01),NMDAR1则明显低于rTMS假刺激组,差异有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01),以0.5Hz刺激组最为明显。结论适量的低频rTMS是比较安全的,可延缓大鼠痫性发作潜伏期、减少痫性发作次数、减轻痫性发作程度;能够降低癫痫大鼠海马区NMDAR1的表达及增强GAD65的表达,可能与其抗痫作用有关。

关键词：经颅磁刺激癫痫氯化锂匹鲁卡品谷氨酸脱羟酶 N-甲基-D-天门冬氨酸

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僵人综合征(讲座)

中国神经免疫学和神经病学杂志 2004年第3期11卷 171-173页

作者：汤晓芙北京协和医院神经内科北京100730

僵人综合征临床以进行性波动肌肉僵直和肌痉挛为特点 ,易由内外刺激引发 ,醒时出现 ,入睡减轻或消失。肌电图示持续性运动单元活动 ,皮肌反射明显增强。血和脑脊液中可测出谷氨酸脱羟酶抗体。目前认为是一种自家免疫疾病。由于此病不多... 详细信息

僵人综合征临床以进行性波动肌肉僵直和肌痉挛为特点 ,易由内外刺激引发 ,醒时出现 ,入睡减轻或消失。肌电图示持续性运动单元活动 ,皮肌反射明显增强。血和脑脊液中可测出谷氨酸脱羟酶抗体。目前认为是一种自家免疫疾病。由于此病不多见 ,临床应加强认识。

关键词：僵人综合征僵直肌痉挛谷氨酸脱羟酶

磺脲类药物继发性失效患者GAD-Ab、ICA的测定

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天津医科大学学报 2000年第2期6卷 189-191页

作者：黎云燕张士明天津医科大学第二医院内分泌科

目的 :探讨磺脲类药物继发性失效 ( SFS)的发病原因。方法 :对 48例 SFS患者初诊时空腹血糖 ( FPG)、C-肽 ( FC- P)进行回顾 ,并对入选 SFS后的患者测定了谷氨酸脱羧酶抗体 ( GAD-Ab)、胰岛细胞抗体 ( ICA)。结果 :48例 SFS患者 GAD- A... 详细信息

目的 :探讨磺脲类药物继发性失效 ( SFS)的发病原因。方法 :对 48例 SFS患者初诊时空腹血糖 ( FPG)、C-肽 ( FC- P)进行回顾 ,并对入选 SFS后的患者测定了谷氨酸脱羧酶抗体 ( GAD-Ab)、胰岛细胞抗体 ( ICA)。结果 :48例 SFS患者 GAD- AB阳性者 9例 (占 1 8.75% ) ,ICA阳性者 6例 (占 1 2 .50 % ) ,6例 ICA阳性者其 GAD- Ab均为阳性。 48例 SFS患者初诊时 FPG≥ 1 2 mmol/L占 90 %以上 ,FC- P≤ 0 .8μg/L占 80 %以上。 48例 SFS患者符合成人迟发型自身免疫性糖尿病( LADA) 6例 (占 1 2 .5% )。结论 :非肥胖 2型糖尿病 ( DM)患者发病初期 FPG≥ 1 2 mmol/L、FC- P≤0 .8μg/L者 ,易导致 SFS,SFS患者中有一部分是 LADA。

关键词：磺脲类药物糖尿病谷氨酸脱羟酶抗体 LADA SFS

GAD-Ab与ICA检测对2型糖尿病患者中LADA早期诊断的临床价值

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当代医学 2009年第18期15卷 70-71页

作者：李淮鲁邢应如胡雪梅安徽省淮南东方医院集团肿瘤医院 232001 安徽省淮南东方医院集团总院

目的探讨谷氨酸脱羟酶抗体(GAD-Ab)和(或)胰岛细胞抗体(ICA)检测对于2型糖尿病中成人隐匿性自身免疫糖尿病(LADA)患者诊治中的临床意义。方法对124例2型糖尿病患者与43例正常人的血清,用ELISA法测定GAD-Ab及ICA,采用放射免疫法测定血清... 详细信息

目的探讨谷氨酸脱羟酶抗体(GAD-Ab)和(或)胰岛细胞抗体(ICA)检测对于2型糖尿病中成人隐匿性自身免疫糖尿病(LADA)患者诊治中的临床意义。方法对124例2型糖尿病患者与43例正常人的血清,用ELISA法测定GAD-Ab及ICA,采用放射免疫法测定血清C肽水平。结果124例2型糖尿病人中抗体阳性率30.65%,GAD-Ab、ICA、双抗阳性分别为15.32%、9.68%、8.87%,抗体阳性率显著高于单项阳性率,差异有统计学意义(P<0.01)。对照组43例中除了ICA阳性率2.33%,其余均为阴性。GAD-Ab与ICA阳性患者空腹与餐后2hC肽水平低于自身抗体阴性者,差异有统计学意义(P<0.05)。结论检测初诊为2型糖尿病患者血清中GAD-Ab和ICA阳性率,有助于早期确诊LADA;多种抗体联合检测可提高诊断的敏感性。

关键词：谷氨酸脱羟酶胰岛细胞抗体成人隐匿性自身免疫糖尿病